本文關(guān)鍵詞：脂肪源性間充質(zhì)干細胞CD73陽性亞群體外分化能力評價

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【摘要】：背景缺血性心臟病發(fā)病率和死亡率極高,嚴重威脅人類健康。心肌一旦梗死,心肌細胞數(shù)量迅速減少,疤痕組織替代正常組織結(jié)構(gòu),心室發(fā)生退行性重塑,心肌泵血功能下降,導致心力衰竭。近幾年干細胞研究逐步深入,細胞移植被認為是一種極具臨床應(yīng)用前景的治療缺血性心臟病的再生醫(yī)學療法。在所有可供心肌移植的種子細胞中,脂肪源性間充質(zhì)干細胞(Adipose tissue-derived mesenchymal stem cells,ADMSCs)具有分化為心肌細胞的潛能、易于獲得、細胞存儲量大以及倫理問題少,有望成為心肌修復最理想的干細胞之一。但是,ADMSCs是非均質(zhì)的細胞群,不同亞群生物學特性的差異在一定程度影響ADMSCs的應(yīng)用效果。因此,研究ADMSCs不同亞群的生物學特性、篩選向心肌分化的優(yōu)勢亞群,對加大研究針對性和提高臨床療效具有十分重要的意義。目的以CD73為分選標準,分離、純化CD73陽性和CD73陰性的ADMSCs,研究兩個亞群的生物學特性和向心肌分化、脂肪細胞分化、骨細胞分化潛能的差異,篩選出心肌分化優(yōu)勢亞群,為進一步開展細胞治療心肌疾患提供實驗參考。方法1.流式細胞儀分選CD73+/CD73-ADMSCs亞群,HE染色觀測其形態(tài),免疫熒光化學法檢測亞群的間充質(zhì)干細胞表面標記CD73、CD90和CD105的表達。2.5-aza誘導CD73+/CD73-ADMSCs亞群,細胞免疫熒光化學法檢測心肌特異性蛋白心肌肌鈣蛋白c-TnT, Real-time PCR檢測c-TnT、Gata-4基因水平變化。3.成脂肪誘導劑誘導CD73+/CD73-ADMSCs亞群,油紅O檢測成脂肪細胞分化情況,分光光度計檢測評價亞群的成脂肪細胞分化能力。4.成骨誘導劑誘導CD73+/CD73-ADMSCs亞群,茜素紅檢測成骨細胞分化情況,Real-time PCR檢測骨細胞OST和RUNX2基因水平變化。結(jié)果1.流式細胞儀分選出CD73陽性和CD73陰性的ADMSCs, CD73-細胞以寬大扁平或方形細胞為主,表達CD105和CD90、不表達CD73；而CD73+ADMSCs主要是小細胞,形態(tài)特點呈細長形、三角形、星狀或紡錘狀,表達CD90、CD105和CD73。2.成心肌誘導后,CD73+ADMSCs心肌特異性c-TnT表達率45.6%、CD73亞群5.3%,基因水平上CD73+亞群也較陰性亞群高表達c-TnT、Gata-4(P0.01)。3.成脂肪細胞誘導后,CD73+ADMSCs與CD73-亞群油紅O染色均顯示陽性,差異無統(tǒng)計學意義（P0.05)。4.成骨細胞誘導后,CD73+ADMSCs與CD73-亞群茜素紅染色均顯示陽性,表達骨細胞特異性O(shè)ST和RUNX2基因,差異無統(tǒng)計學意義（P0.05)。結(jié)論1.CD73+ADMSCs形態(tài)以小細胞為主,表達CD90、CD 105和CD73；而CD73-細胞主多為大細胞,表達CD105和CD90、不表達CD73。2.CD73+/+CD73-兩個亞群均具有成骨、成脂和成心肌的分化能力,CD73+ADMSCs較CD73-ADMSCs在體外具有更高地向心肌分化的潛能,成骨和成脂分化定量上差異無統(tǒng)計學意義,提示CD73+ADMSCs具有更好的心肌治療前景。
【關(guān)鍵詞】：CD73 cTnT 心肌分化 脂肪間充質(zhì)干細胞
【學位授予單位】：新鄉(xiāng)醫(yī)學院
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R541
【目錄】：

• 摘要5-7
• Abstract7-10
• 前言10-12
• 材料與方法12-22
• 結(jié)果22-31
• 討論31-34
• 小結(jié)34-35
• 參考文獻35-40
• 綜述：心臟再生的研究進展40-63
• 參考文獻56-63
• 附錄63-64
• 攻讀學位期間發(fā)表文章情況64-65
• 致謝65-66
• 個人簡歷66

【參考文獻】

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1 胡詩宇;楊柳;孫海英;;關(guān)于骨髓間充質(zhì)干/祖細胞群中RS細胞亞群的研究進展[J];生物醫(yī)學工程學雜志;2009年04期

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本文編號：801984