本文關(guān)鍵詞：榆干離褶傘溶栓酶對乙醇誘導(dǎo)內(nèi)皮細(xì)胞損傷的保護(hù)作用研究

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【摘要】：目的：研究榆干離褶傘(Lu.)溶栓酶對乙醇誘導(dǎo)的血管內(nèi)皮細(xì)胞損傷的保護(hù)作用及抗血小板的作用。方法： (1)細(xì)胞實(shí)驗(yàn)：用200 μ mol/L乙醇誘導(dǎo)內(nèi)皮細(xì)胞氧化損傷后,利用MTT法檢測L.u溶栓酶對內(nèi)皮細(xì)胞存活率；檢測細(xì)胞上清液LDH活性；AO/EB雙染法觀察內(nèi)皮細(xì)胞的凋亡；流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞的線粒體跨膜電位和總活性氧的含量；Western bolt方法觀察Caspase-8、Caspase-9、Cleaved Caspase-3、細(xì)胞色素C蛋白的表達(dá)；(2)動物實(shí)驗(yàn)：40%乙醇誘導(dǎo)內(nèi)皮細(xì)胞損傷大鼠模型,HE染色觀察頸動脈形態(tài)學(xué)變化；流式細(xì)胞儀檢測血小板CD62p水平；ELISA法測定血清Ang-Ⅱ、ET-1、Renin、NOS、iNOS、eNOS水平：測定血清SOD、MDA、T-AOC和NO水平。結(jié)果： (1)細(xì)胞實(shí)驗(yàn)：MTT結(jié)果表明,L.u溶栓酶對乙醇誘導(dǎo)的氧化損傷有保護(hù)作用；與模型組相比,用藥組細(xì)胞上清液的LDH活性下降；AO/EB染色結(jié)果顯示,模型組內(nèi)皮細(xì)胞固縮成圓狀且呈橘黃色,部分細(xì)胞胞漿出現(xiàn)空泡狀結(jié)構(gòu),且出現(xiàn)紅染結(jié)構(gòu),用藥后內(nèi)皮細(xì)胞紅染結(jié)構(gòu)逐漸消失,凋亡細(xì)胞減少,細(xì)胞形態(tài)逐漸恢復(fù)正常結(jié)構(gòu)；流式細(xì)胞儀檢測線粒體跨膜電位和總活性氧結(jié)果表明,與模型組相比用藥組的線粒體跨膜電位明顯升高,而細(xì)胞內(nèi)活性氧含量明顯下降；Western bolt結(jié)果表明,與模型組相比,用藥組明顯減少細(xì)胞色素C、Cleaved Caspase3、蛋白的表達(dá),增加Caspase8、Caspase9蛋白表達(dá)。(2)動物實(shí)驗(yàn),HE染色結(jié)果顯示：乙醇誘導(dǎo)損傷后血管嚴(yán)重收縮,血管內(nèi)皮細(xì)胞層斷續(xù),內(nèi)皮細(xì)胞脫落明顯；用藥組血管收縮程度減少,內(nèi)皮細(xì)胞脫落現(xiàn)象明顯減輕,血管內(nèi)皮細(xì)胞完整并連續(xù)。流式細(xì)胞儀檢測CD62p結(jié)果表明,用藥組血小板CD62p水平明顯下降,說明Lu.溶栓酶抑制血小板的活化。ELISA檢測結(jié)果表明,與模型組相比,用藥組血清NOS、iNOS、eNOS、Renin、Ang-Ⅱ和ET-1水平明顯下降。用藥組明顯抑制乙醇誘導(dǎo)引起的SOD和T-AOC水平的下降,并減少M(fèi)DA和NO水平。結(jié)論：(1)L.u溶栓酶對乙醇誘導(dǎo)的血管內(nèi)皮細(xì)胞的損傷具有一定的保護(hù)作用。(2)L.u溶栓酶具有抑制血小板活化的作用。
【關(guān)鍵詞】：榆干離褶傘溶栓酶 人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞 凋亡 血小板 抗氧化 腎素-血管緊張素
【學(xué)位授予單位】：延邊大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R543
【目錄】：

• 摘要5-6
• Abstract6-8
• 中英文縮詞8-11
• 第一章 前言11-13
• 第二章 材料與方法13-24
• 2.1 實(shí)驗(yàn)器材、試劑13-15
• 2.1.1 細(xì)胞、動物13
• 2.1.2 樣品13
• 2.1.3 實(shí)驗(yàn)試劑13-14
• 2.1.4 實(shí)驗(yàn)儀器14-15
• 2.2 實(shí)驗(yàn)方法15-24
• 2.2.1 細(xì)胞培養(yǎng)準(zhǔn)備15-16
• 2.2.2 HUVEC的培養(yǎng)及實(shí)驗(yàn)分組16-17
• 2.2.3 MTT法測L.u溶栓酶對乙醇誘導(dǎo)的HUVEC存活率的影響17
• 2.2.4 細(xì)胞上清液LDH活性測定17
• 2.2.5 AO/EB染色觀察細(xì)胞的凋亡情況17-18
• 2.2.6 流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞跨膜電位與ROS含量18-19
• 2.2.7 Western Blot法檢測細(xì)胞Cleaved Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9和Ctyc C蛋白表達(dá)19-21
• 2.2.8 動物模型制備21
• 2.2.9 頸動脈形態(tài)學(xué)觀察21-22
• 2.2.10 流式細(xì)胞儀檢測CD62p22
• 2.2.11 生化指標(biāo)檢測22-23
• 2.2.12 結(jié)果統(tǒng)計(jì)方法23-24
• 第三章 實(shí)驗(yàn)結(jié)果24-33
• 3.1 L.u溶栓酶對HUVECs的存活率的影響24
• 3.2 L.u溶栓酶對細(xì)胞上清液LDH活性的影響24-25
• 3.3 AO/EB染色觀察內(nèi)皮細(xì)胞凋亡情況25
• 3.4 L.u溶栓酶對線粒體跨膜電位與總活性氧含量25-28
• 3.4.1 L.u溶栓酶對細(xì)胞線粒體跨膜電位(△Ψm)的影響25-26
• 3.4.2 L.u溶栓酶對細(xì)胞內(nèi)總活性氧(ROS)的影響26-28
• 3.5 L.u溶栓酶對Cleaved Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9和Ctyc C蛋白表達(dá)的影響28-29
• 3.6 L.u溶栓酶對頸動脈HE染色組織形態(tài)學(xué)的影響29
• 3.7 L.u溶栓酶對血小板CD62p活性的影響29-30
• 3.8 L.u溶栓酶對血清生化指標(biāo)的影響30-33
• 3.8.1 L.u溶栓酶對血清SOD、MDA、T-AOC的檢測30-31
• 3.8.2 L.u溶栓酶對血清NO、NOS、iNOS、eNOS的影響31
• 3.8.3 L.u溶栓酶對血清Ang-Ⅱ、ET-1、Renin的影響31-33
• 第四章 討論33-38
• 第五章 結(jié)論38-39
• 參考文獻(xiàn)39-43
• 致謝43-44
• 碩士期間發(fā)表論文情況44

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