本文關鍵詞：廣西巴馬小型豬動脈病變與ABCA1關系的初步研究

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【摘要】：大動脈因血流速度快、血壓大等原因易出現內皮損傷。膽固醇代謝物質易粘附于損傷的血管內膜形成脂質沉積,血管發(fā)生堵塞及血栓形成,進而發(fā)展成為動脈粥樣硬化(atherosclerosis, AS)。膽固醇代謝異常是動脈粥樣病變的主要原因。膽固醇逆轉運的限速蛋白ATP結合盒轉運蛋白Al (ABCA1)對膽固醇代謝尤為重要。ABCA1與動脈病變之間的作用及調控關系復雜,現已發(fā)現多種microRNA參與對膽固醇逆轉運及動脈粥樣硬化的調控。本實驗采用廣西巴馬小型豬為實驗材料,選取常規(guī)飼養(yǎng)豬4頭,飼以常規(guī)飼料作為對照組；選取高脂高糖飼喂豬,9頭飼以高脂高糖飼料作為實驗1組,5頭飼以高脂高糖高膽固醇作為實驗2組。實驗為期3個月,其間每月檢測血液生理生化指標,實驗結束時檢測動脈病理變化情況�？寺V西巴馬小型豬ABC Al基因CDs并分析其生物學信息。檢測ABCA1 mRNA及蛋白在各組實驗豬主動脈、頸動脈、腹主動脈中的表達情況,同時檢測以ABCA1為靶基因的niRNA-33a,miRNA-758在各組實驗豬肝臟中的表達情況。構建ABCA1真核表達載體并驗證其功能。通過以上實驗來探討動脈粥樣硬化過程中ABCA1與膽固醇代謝的變化及影響ABCA1表達的microRNAs的變化情況,并為制作轉ABCA1廣西巴馬小型豬奠定基礎。實驗結果顯示：(1)實驗2組血清總膽固醇、高密度脂蛋白、低密度脂蛋白水平均呈上升趨勢,實驗1組與對照組血清總膽固醇、高密度脂蛋白、低密度脂蛋白水平無明顯差異。(2)主動脈、頸動脈、腹主動脈制作病理切片HE染色檢驗結果顯示,實驗1組和實驗2組各動脈均出現不同程度病變。實驗1組各動脈內膜增厚,中膜平滑肌細胞排列紊亂。實驗2組各動脈病變較實驗1組嚴重,內膜不平整,中膜增厚并出現巨噬細胞和泡沫細胞。(3)實驗獲得的廣西巴馬小型豬ABCA1 CDs全長2856bp,編碼961個氨基酸,成熟蛋白無信號肽,ATP轉運體活性中心位于第602-834位氨基酸。(4) qRT-PCR結果顯示：在主動脈和頸動脈,實驗2組ABCA1 mRNA表達量顯著高于實驗1組和對照組(P0.05)；在腹主動脈,實驗2組和實驗1組ABCA1 mRNA表達量均顯著高于對照組(P0.05)。免疫組化半定量分析結果顯示：在主動脈,ABCA1蛋白表達量實驗2組實驗1組對照組,但差異不顯著；在頸動脈,實驗1組和實驗2組ABCAl蛋白的表達量顯著高于對照組(P0.05)；在腹主動脈,實驗2組ABCAl蛋白表達量顯著高于實驗1組(P0.05),實驗1組顯著高于對照組(P0.05)。免疫組化定位ABCAl蛋白在動脈內膜增厚區(qū)大量表達,且表達量隨病變程度的加劇而升高。(5) qRT-PCR結果顯示實驗2組肝臟中ABCA1表達量顯著高于對照組1和對照組(P0.05)cmiR-33a在實驗1組、實驗2組肝臟中的表達量均顯著低于對照組(P0.05)。miR-758在實驗1組肝臟中表達量顯著高于對照組(P0.05),在實驗2組中顯著低于對照組(P0.05)。(6)轉pEGFP-Nl-ABCAl的PK-15細胞可檢測到綠色熒光,且ABCAl mRNA水平顯著上升。在胞質注射的豬卵母細胞分裂期和囊胚期均能檢測到綠色熒光。結論：高脂高糖和高脂高糖高膽固醇均可誘導廣西巴馬小型豬動脈病變,后者引發(fā)的病變更為嚴重,說明高水平膽固醇可加速動脈病變進程；病變區(qū)ABCAl表達量更高,說明ABCAl主要在病變區(qū)發(fā)揮功能；高脂高糖可引發(fā)miRNA-33a下調,高膽固醇則可進一步引發(fā)mRNA-758的下調,以提高ABCA1的表達,以將多余的大量膽固醇轉運出細胞。實驗構建的pEGFP-N1-ABCAl真核表達載體能夠為后續(xù)構建轉ABCAl基因的廣西巴馬小型豬奠定基礎。
【關鍵詞】：廣西巴馬小型豬 膽固醇 動脈病變 ATP結合盒轉運蛋白A1 MircoRNA 真核表達載體
【學位授予單位】：廣西大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R543.5
【目錄】：

• 摘要4-6
• ABSTRACT6-11
• 第一章 綜述11-20
• 1.1 動脈粥樣硬化疾病的現狀11
• 1.2 動脈病變及其誘因11-13
• 1.3 膽固醇代謝與動脈病變關系13-14
• 1.4 ABCA1基因與膽固醇14-18
• 1.5 廣西巴馬小型豬18-19
• 1.6 本實驗的目的及意義19-20
• 第二章 廣西巴馬小型豬高脂高糖高膽固醇飼喂實驗20-29
• 2.1 實驗材料與方法20
• 2.2 實驗方法20-22
• 2.3 實驗結果與分析22-27
• 2.4 討論27-29
• 第三章 廣西巴馬小型豬ABCA1生物學信息分析與表達量檢測29-52
• 3.1 實驗材料29-31
• 3.2 實驗方法31-41
• 3.2.1 廣西巴馬小型豬ABCA1生物學信息分析31-36
• 3.2.2 廣西巴馬小型豬ABCA1表達量檢測36-41
• 3.3 實驗結果與分析41-51
• 3.4 討論51-52
• 第四章 廣西巴馬小型豬動脈病變過程中調控ABCA1的miRNA-33a及miRNA-758的表達量檢測52-57
• 4.1 實驗材料與方法52-54
• 4.2 實驗結果與分析54-56
• 4.3 討論56-57
• 第五章 廣西巴馬小型豬ABCA1真核載體構建57-69
• 5.1 實驗材料與方法57-63
• 5.2 實驗結果與分析63-67
• 5.3 討論67-69
• 第六章 結論69-70
• 參考文獻70-76
• 附錄176-78
• 縮略詞(Abbreviation)76-78
• 附錄278-82
• 致謝82-83
• 發(fā)表論文83

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本文編號：794850