本文關(guān)鍵詞：低剪切應(yīng)力對(duì)血管內(nèi)皮細(xì)胞自噬的影響及其機(jī)制的初步研究

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【摘要】：[目的]觀察低剪切應(yīng)力對(duì)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞(HUVECs)自噬的影響并探討其機(jī)制。[方法](1)apo E-/-小鼠喂飼高脂飲食,分別于0、4、8和12周處死,取主動(dòng)脈竇部做冰凍切片,主動(dòng)脈提蛋白。HE和油紅O染色法觀察動(dòng)脈粥樣硬化(Atherosclerosis,As)斑塊病變;免疫組織化學(xué)法和Western blot檢測(cè)BECLIN 1、LC3和P62以及TET2的蛋白表達(dá);免疫熒光法觀察5-m C和5-hm C的含量。(2)將HUVECs置于體外灌流系統(tǒng),分別以低剪切應(yīng)力(5 dyne/cm2)和正常剪切應(yīng)力(15 dyne/cm2)處理1h,Western blot檢測(cè)BECLIN 1、LC3和P62以及TET2的蛋白表達(dá)。再以巴伐洛霉素孵育2h,觀察LC3II/LC3I的比值。(3)低表達(dá)和高表達(dá)TET2質(zhì)粒轉(zhuǎn)染HUVECs,Western blot檢測(cè)BECLIN 1、LC3和P62的蛋白表達(dá)。再以不同剪切應(yīng)力處理1h,Western blot檢測(cè)BECLIN 1、LC3、P62和ET-1及e NOS的蛋白表達(dá)。[結(jié)果]隨著高脂飲食時(shí)間的延長(zhǎng),As病變程度逐漸加重。As病變進(jìn)程中BECLIN 1、LC3和P62的蛋白含量顯著增加;TET2的蛋白表達(dá)明顯降低;5-m C的含量顯著增加,且其增加幅度顯著高于5-hm C。與正常剪切應(yīng)力組相比,低剪切應(yīng)力組BECLIN 1和LC3II/LC3I的蛋白表達(dá)降低;自噬障礙標(biāo)志物P62的蛋白表達(dá)增加;TET2的蛋白表達(dá)降低。巴伐洛霉素孵育2h后,低剪切應(yīng)力組LC3II/LC3I無(wú)明顯變化,而正常剪切應(yīng)力組LC3II/LC3I明顯增大。不同剪切應(yīng)力處理后,高表達(dá)TET2可以上調(diào)BECLIN 1、LC3II/LC3I及e NOS的蛋白表達(dá),下調(diào)P62及ET-1的蛋白表達(dá);而低表達(dá)TET2可以下調(diào)BECLIN1、LC3II/LC3I及e NOS的蛋白表達(dá),上調(diào)P62及ET-1的蛋白表達(dá)。[結(jié)論]低剪切應(yīng)力下調(diào)血管內(nèi)皮細(xì)胞TET2的蛋白表達(dá)從而抑制血管內(nèi)皮細(xì)胞自噬。
【關(guān)鍵詞】：低剪切應(yīng)力 血管內(nèi)皮細(xì)胞 自噬 TET2 動(dòng)脈粥樣硬化
【學(xué)位授予單位】：南華大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R54
【目錄】：

• 摘要4-6
• Abstract6-11
• 主要縮略詞英文索引11-12
• 第1章 緒論12-20
• 1.1 選題背景及意義12-13
• 1.2 國(guó)內(nèi)外研究現(xiàn)狀13-16
• 1.3 研究目標(biāo)、內(nèi)容及擬解決的關(guān)鍵技術(shù)問(wèn)題16-20
• 1.3.1 研究目標(biāo)16
• 1.3.2 研究?jī)?nèi)容16
• 1.3.3 研究方法和可行性分析16-17
• 1.3.4 擬解決的關(guān)鍵問(wèn)題和創(chuàng)新點(diǎn)17-20
• 1.3.4.1 擬解決的關(guān)鍵問(wèn)題17
• 1.3.4.2 創(chuàng)新點(diǎn)17-20
• 第2章 實(shí)驗(yàn)材料與研究方法20-28
• 2.1 實(shí)驗(yàn)材料與儀器20-23
• 2.1.1 實(shí)驗(yàn)所用動(dòng)物、細(xì)胞和試劑20-21
• 2.1.2 主要儀器設(shè)備21-23
• 2.2 實(shí)驗(yàn)方法23-28
• 2.2.1 動(dòng)物飼養(yǎng)及心臟和主動(dòng)脈的獲取23
• 2.2.2 細(xì)胞培養(yǎng)和灌流系統(tǒng)23-24
• 2.2.3 質(zhì)粒轉(zhuǎn)染24
• 2.2.4 蛋白質(zhì)免疫印跡24-26
• 2.2.4.1 蛋白質(zhì)提取24-25
• 2.2.4.2 Western Blot25-26
• 2.2.5 HE染色26
• 2.2.6 油紅O染色26-27
• 2.2.7 免疫組織化學(xué)染色27
• 2.2.8 免疫熒光染色27
• 2.2.9 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法27-28
• 第3章 實(shí)驗(yàn)結(jié)果28-42
• 3.1 As病變進(jìn)程中自噬相關(guān)基因的蛋白表達(dá)28-31
• 3.2 低剪切應(yīng)力對(duì)血管內(nèi)皮細(xì)胞自噬和自噬流的影響31-33
• 3.3 As病變進(jìn)程中TET2的蛋白表達(dá)33
• 3.4 As病變進(jìn)程中 5-mC和 5-hmC含量的改變33-34
• 3.5 低剪切應(yīng)力對(duì)血管內(nèi)皮細(xì)胞TET2蛋白表達(dá)的影響34-35
• 3.6 TET2干預(yù)對(duì)血管內(nèi)皮細(xì)胞自噬的影響35-37
• 3.7 TET2干預(yù)對(duì)低剪切應(yīng)力條件下血管內(nèi)皮細(xì)胞自噬的影響37-39
• 3.8 TET2干預(yù)對(duì)低剪切應(yīng)力條件下血管內(nèi)皮細(xì)胞ET-1 蛋白表達(dá)的影響39-40
• 3.9 TET2干預(yù)對(duì)低剪切應(yīng)力條件下血管內(nèi)皮細(xì)胞eNOS蛋白表達(dá)的影響40-42
• 第4章 討論42-46
• 第5章 結(jié)論與展望46-48
• 5.1 結(jié)論46
• 5.2 不足與展望46-48
• 參考文獻(xiàn)48-52
• 文獻(xiàn)綜述52-74
• References67-74
• 作者攻讀碩士學(xué)位期間的科研成果74-76
• 致謝76-78
• 基金資助78

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前1條

1 李小紅;郭鳳霞;楊沁;李榮慶;趙戰(zhàn)芝;危當(dāng)恒;;自噬干預(yù)對(duì)低剪切應(yīng)力下血管內(nèi)皮細(xì)胞eNOS和ET-1表達(dá)的影響[J];中國(guó)動(dòng)脈硬化雜志;2014年09期

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本文編號(hào)：791249