本文關(guān)鍵詞：吡哆醇抗動(dòng)脈粥樣硬化的作用及機(jī)制研究

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【摘要】：研究背景動(dòng)脈粥樣硬化(Atherosclerosis, AS)是一種以內(nèi)皮細(xì)胞受損、平滑肌細(xì)胞侵入血管內(nèi)膜、血管平滑肌細(xì)胞增殖為主的血管重塑病理過(guò)程,是當(dāng)前人類死亡的主要原因之一。它是多致病因素共同誘發(fā)的一種疾病,主要包括內(nèi)皮損傷、炎癥反應(yīng)及氧化應(yīng)激等。在AS的進(jìn)展過(guò)程中,氧化低密度脂蛋白(oxidized low density lipoprotein, ox-LDL)在動(dòng)脈管壁脂代謝中獨(dú)特而復(fù)雜的作用正逐漸受到重視。ox-LDL是由親水表面層及疏水核心組成的多分子復(fù)合物,是低密度脂蛋白(low density lipoprotein, LDL)進(jìn)入并積聚于內(nèi)皮下后受自由基誘導(dǎo)導(dǎo)致氧化修飾形成。其能夠被巨噬細(xì)胞所吞噬,當(dāng)ox-LDL在巨噬細(xì)胞內(nèi)積聚到一定數(shù)量時(shí),將會(huì)促進(jìn)巨噬細(xì)胞變?yōu)榕菽?xì)胞。在巨噬細(xì)胞吞噬ox-LDL的過(guò)程中,細(xì)胞膜上的ox-LDL受體起到了非常重要的作用,目前發(fā)現(xiàn)血凝素樣氧化低密度脂蛋白受體(lectin-like oxidized low density lipoprotein receptor-1, LOX-1)是攝取ox-LDL的關(guān)鍵受體之一,除此之外,其他的清道夫受體如1型清道夫受體(scavenger receptors type 1, SR-A1)、白細(xì)胞分化抗原36(cluster of differentiation 36, CD36)也參與了此過(guò)程。吡哆醇(pyridoxine)是維生素B6的主要成分,其作為同型半胱氨酸(homocysteine,hcy)的輔酶,主要通過(guò)降低血hcy發(fā)揮抗AS作用。有研究發(fā)現(xiàn),pyridoxine在AS發(fā)展過(guò)程中對(duì)于內(nèi)皮保護(hù)起著重要作用,但具體機(jī)制尚不清楚,可能與CD36等受體有關(guān)。近年,本實(shí)驗(yàn)組對(duì)pyridoxine的保護(hù)機(jī)制進(jìn)行了一系列研究。結(jié)果顯示,在ox-LDL作用的HUVEC中,pyridoxine能有效緩解ox-LDL對(duì)于內(nèi)皮細(xì)胞的損傷作用,使內(nèi)皮型一氧化氮合酶(endothelial nitric oxide synthase, eNOS)活性增加,產(chǎn)物一氧化氮(nitric oxide, NO)的水平升高。但pyridoxine對(duì)于泡沫細(xì)胞的形成是否有作用,目前尚不清楚。本研究主要目的是探討pyridoxine是否能夠抗巨噬細(xì)胞攝取ox-LDL,并減緩泡沫細(xì)胞的形成,并進(jìn)一步研究其作用機(jī)制。材料與方法細(xì)胞模型構(gòu)建 傳代培養(yǎng)小鼠單核巨噬細(xì)胞白血病細(xì)胞(RAW264.7)細(xì)胞,至填滿六孔板約60-70%后,隨機(jī)分為4組,分別為18h對(duì)照組,18 h ox-LDL組,24 h對(duì)照組,24 h ox-LDL組,給予50mg/L ox-LDL,培養(yǎng)18h及24 h后,分別使用油紅O染色檢測(cè)細(xì)胞吞噬脂滴情況、DHE檢測(cè)細(xì)胞氧化應(yīng)激水平、Western Blot檢測(cè)細(xì)胞表面LOX-1蛋白表達(dá)情況。Pyridoxine作用機(jī)制實(shí)驗(yàn) 細(xì)胞培養(yǎng)同上,隨機(jī)分成5組,除對(duì)照組、ox-LDL組外,剩下三組分別用10 umol/L、1umol/L、100nmol/L三種不同濃度的pyridoxine進(jìn)行預(yù)處理15分鐘后,再加入ox-LDL,培養(yǎng)24 h后,分別使用油紅O染色檢測(cè)細(xì)胞吞噬脂滴情況、DHE檢測(cè)細(xì)胞氧化應(yīng)激水平、Real-time PCR檢測(cè)LOX-1、SR-A1、CD36的mRNA表達(dá)水平、Western Blot檢測(cè)細(xì)胞表面LOX-1蛋白表達(dá)情況。結(jié)果 細(xì)胞模型構(gòu)建 結(jié)果顯示,在油紅O染色實(shí)驗(yàn)中,RAW264.7細(xì)胞在給予ox-LDL后,相較18h組,24 h組吞噬脂滴更多,呈環(huán)狀分布在細(xì)胞膜內(nèi)側(cè),有著更好的泡沫細(xì)胞轉(zhuǎn)化率。DHE檢測(cè)結(jié)果顯示24 h組氧化應(yīng)激水平更高,Western Blot實(shí)驗(yàn)結(jié)果提示給予ox-LDL 24h后,細(xì)胞LOX-1蛋白表達(dá)顯著升高(P0.05),而18h組LOX-1蛋白水平相比對(duì)照組無(wú)顯著差異。Pyridoxine作用機(jī)制實(shí)驗(yàn) 在油紅O染色實(shí)驗(yàn)中,RAW264.7細(xì)胞在給予不同濃度的pyridoxine后,脂滴攝取均有不同程度地減少,且這種減少呈濃度依賴性。氧化應(yīng)激水平也同樣受到濃度依賴性地抑制。在mRNA水平上,LOX-1、CD36在加入ox-LDL后表達(dá)顯著提高(P0.05),SR-A1沒(méi)有變化；只有最高濃度(10 umol/L)的pyridoxine可以抑制LOX-1的表達(dá)(P0.05),而CD36則不受pyridoxine地抑制。蛋白水平上,不同濃度的pyridoxine均可抑制LOX-1蛋白的表達(dá)上調(diào)(P0.05),從而發(fā)揮抗AS炎癥反應(yīng)的作用,其中,10 umol/L和1 umol/L相比100 nmol/L的濃度,抑制更加顯著(P0.05)。結(jié)論以上結(jié)果表明,pyridoxine可通過(guò)①減少血管氧化應(yīng)激；②降低血管炎癥反應(yīng)；③下調(diào)LOX-1蛋白表達(dá)抑制ox-LDL誘導(dǎo)的人外周血單核細(xì)胞源性的巨噬細(xì)胞脂質(zhì)的沉積,從而發(fā)揮抗AS發(fā)展、延緩AS進(jìn)展的作用,為AS的治療和預(yù)防提供了新的藥物靶點(diǎn)和治療思路,具有潛在的臨床與藥物研發(fā)應(yīng)用價(jià)值。
【關(guān)鍵詞】：吡哆醇 動(dòng)脈粥樣硬化 氧化低密度脂蛋白 氧化應(yīng)激 炎癥
【學(xué)位授予單位】：南京大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R543.5
【目錄】：

• 中文摘要5-7
• 英文摘要7-10
• 第一章 緒論10-15
• 第二章 材料與方法15-24
• 第三章 結(jié)果24-32
• 第四章 討論32-37
• 第五章 全文總結(jié)37-38
• 參考文獻(xiàn)38-46
• 文獻(xiàn)綜述46-62
• 參考文獻(xiàn)53-62
• 攻讀學(xué)位期間發(fā)表文章情況62-63
• 致謝63-65

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