發(fā)布時(shí)間：2017-08-30 02:37

  本文關(guān)鍵詞：大鼠自身免疫性心肌炎Toll樣受體9的表達(dá)及慢病毒介導(dǎo)Fg12基因沉默干預(yù)作用的研究

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【摘要】：目的:本實(shí)驗(yàn)?zāi)康脑谟诮⒆陨砻庖叽笫笮募⊙啄Ｐ鸵约癋gl2慢病毒介導(dǎo)基因沉默干預(yù)的大鼠模型。探討toll樣受體9(TLR9)在自身免疫性大鼠心肌炎中的表達(dá)情況,以及以慢病毒介導(dǎo)的人纖維介素2(Fgl2)作為治療靶點(diǎn),進(jìn)一步明確對(duì)自身免疫性大鼠心肌炎治療的可行性及其相關(guān)機(jī)制。方法:Fgl2RNAi慢病毒的包裝及制備。選擇購(gòu)買6周左右Lewis雄性大鼠32只,其中選擇正常大鼠8只(NC組),其余剩下的大鼠在第1天以及第8天分別注射豬心肌球蛋白,從而建立實(shí)驗(yàn)性自身免疫性心肌炎的大鼠模型,建模成功以后隨機(jī)地分為3組:心肌炎組(EAM組)、GFP空載體干擾組(GFP組)和Fgl2慢病毒干擾組(RNAi組)。之后分別在免疫第0天、初次免疫后第21天觀察各組大鼠的心臟超聲心動(dòng)圖;然后再分別隨機(jī)地處死第一次免疫后21天以及40天各組大鼠,每組4只,取出組織以用于檢測(cè)相關(guān)指標(biāo)。大鼠心肌組織做HE染色,觀察各組大鼠心肌的炎癥情況,用間接ELISA的方法檢測(cè)血清中IL-6、INF-α及NF-κB炎癥因子的水平,通過(guò)流式細(xì)胞儀檢測(cè)各組大鼠血清中的CD4+CD25+T細(xì)胞百分比,應(yīng)用RT-PCR法分別檢測(cè)大鼠心肌組織中的TLR9以及共刺激分子CLTA-4的m RNA地表達(dá)情況,用Western Blot法檢測(cè)TLR9及Fgl2蛋白在大鼠心肌組織中的表達(dá)情況。結(jié)果:大鼠心臟超聲檢查結(jié)果顯示,初次免疫后21d EAM組的心功能較NC組明顯降低(P0.05),RNAi組較EAM組心功能好轉(zhuǎn)(P0.05),EAM組與GFP組無(wú)差異。血清學(xué)檢查顯示EAM組大鼠血清INF-α及NF-κB水平在急性期達(dá)到高峰(初次免疫后21d),血清中的IL-6水平在慢性期(免疫后第40d)達(dá)到高峰,明顯比其他各組增高(P0.05),RNAi組相比于EAM組炎癥因子水平有所降低(P0.05),EAM組與GFP組無(wú)差異。初次免疫后的第21d,EAM組的心肌炎癥評(píng)分、TLR9蛋白以及m RNA地表達(dá)量等均較其他各組增高(P0.05),RNAi組較EAM組炎癥評(píng)分以及TLR9的蛋白表達(dá)量減少(P0.05),EAM組與GFP組無(wú)差異。初次免疫后的第21d的大鼠血清中CD4+、CD25+及CD4+CD25+T細(xì)胞百分比在各組之間比較,無(wú)明顯差異(P0.05)。結(jié)論:實(shí)驗(yàn)性自身免疫性心肌炎大鼠心臟TLR9蛋白和m RNA表達(dá)上調(diào),慢病毒介導(dǎo)Fgl2基因沉默可以下調(diào)TLR9蛋白表達(dá),使TLR9蛋白和m RNA表達(dá)下降,從而使大鼠心肌炎癥減輕,提示TLR9信號(hào)通路可能參與了實(shí)驗(yàn)性自身免疫性心肌炎的發(fā)生過(guò)程,Fgl2RNA慢病毒可以減輕心肌炎癥,可能起到了預(yù)防和阻止其慢性遷延,甚至是治療心肌炎的作用。
【關(guān)鍵詞】：自身免疫性實(shí)驗(yàn)性心肌炎 Toll樣受體9 Fgl2
【學(xué)位授予單位】：南昌大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R542.21
【目錄】：

• 摘要3-5
• abstract5-9
• 中英文縮寫(xiě)詞表9-10
• 第1章 引言10-12
• 第2章 材料與方法12-24
• 2.1 實(shí)驗(yàn)材料12-14
• 2.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物12
• 2.1.2 主要試劑12
• 2.1.3 主要儀器12-13
• 2.1.4 主要試劑配制13-14
• 2.2 實(shí)驗(yàn)方法14-22
• 2.2.1 包裝以及構(gòu)建Fgl2RNAi慢病毒載體14
• 2.2.2 實(shí)驗(yàn)分組14-15
• 2.2.3 自身免疫性大鼠心肌炎（EAM）模型的構(gòu)建15
• 2.2.4 Fgl2-RNAi-LV干預(yù)15
• 2.2.5 通過(guò)心臟超聲心動(dòng)圖對(duì)大鼠心臟檢測(cè)觀察各組大鼠心臟功能15-16
• 2.2.6 取材16
• 2.2.7 大鼠心肌病理學(xué)檢查觀察心肌炎癥病變情況16-17
• 2.2.8 ELISA法檢測(cè)大鼠血清中炎癥因子水平17-18
• 2.2.9 流式細(xì)胞儀對(duì)大鼠血清進(jìn)行CD4+CD25+T細(xì)胞百分比檢測(cè)18
• 2.2.10 qRT-PCR檢測(cè)大鼠心肌組織中TLR9和CTLA-4 的表達(dá)情況18-20
• 2.2.11 Western Blot法檢測(cè)心肌組織Fgl2和TLR9蛋白表達(dá)20-22
• 2.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析22-24
• 第3章 實(shí)驗(yàn)結(jié)果24-34
• 3.1 心臟超聲心動(dòng)圖檢查24
• 3.2 大鼠心肌組織HE染色以及病理檢查24-27
• 3.3 大鼠血清炎癥因子水平27-29
• 3.4 大鼠血清中CD4+CD25+T細(xì)胞百分比29-31
• 3.5 大鼠心肌組織中TLR9和CTLA-4 的m RNA表達(dá)31-32
• 3.6 大鼠心肌組織中Fgl2和TLR9蛋白表達(dá)32-34
• 第4章 討論34-37
• 第5章 結(jié)論37-38
• 致謝38-39
• 參考文獻(xiàn)39-41
• 綜述41-45
• 參考文獻(xiàn)44-45

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