發(fā)布時(shí)間：2017-08-26 04:07

  本文關(guān)鍵詞：Id1和MT-MMPs在切應(yīng)力調(diào)控血管新生過(guò)程中的作用

  更多相關(guān)文章： 血管新生 分化抑制因子1(Id1) 切應(yīng)力 MT1-MMP MT4-MMP

【摘要】：動(dòng)脈粥樣硬化(atherosclerosis,AS)是我國(guó)發(fā)病率和致死率最高的心腦血管疾病之一,動(dòng)脈粥樣硬化斑塊穩(wěn)定性喪失導(dǎo)致的斑塊破裂以及繼發(fā)的急性血栓形成是心血管疾病中的重大事件。穩(wěn)定性斑塊向易損斑塊轉(zhuǎn)化是動(dòng)脈粥樣硬化引起急性冠狀動(dòng)脈綜合癥的最主要原因。而斑塊內(nèi)血管新生可能是誘發(fā)易損斑塊形成的重要刺激因素,易損斑塊內(nèi)新生的微血管結(jié)構(gòu)缺乏完整性,通常只由一層內(nèi)皮細(xì)胞構(gòu)成,因而不完整的微血管增加了血管通透性,成為脂質(zhì)、巨噬細(xì)胞和單核細(xì)胞浸潤(rùn)斑塊的主要通道,破壞了斑塊的穩(wěn)定性進(jìn)而導(dǎo)致急性心腦血管疾病的發(fā)生。近年,研究證明斑塊破裂主要發(fā)生在斑塊近心端的高切應(yīng)力區(qū)域,血管內(nèi)切應(yīng)力的改變是AS易損斑塊形成的重要刺激因素,也是血管新生的重要調(diào)節(jié)因素。但是對(duì)于切應(yīng)力如何調(diào)控血管新生的機(jī)制還不清楚�；诖�,本文擬探究切應(yīng)力引起易損斑塊血管新生的力學(xué)和分子學(xué)機(jī)制,明確細(xì)胞分化抑制因子1(Inhibitor of differentiation-1,Id1)和膜型基質(zhì)金屬蛋白酶(Membrane-type matrix metalloproteinases,MT-MMPs)是否參與剪切力調(diào)控血管新生,進(jìn)而為深入了解AS易損斑塊的發(fā)生機(jī)制提供新的理論依據(jù),為動(dòng)脈粥樣硬化疾病治療提供新的靶點(diǎn)。本文主要研究?jī)?nèi)容和結(jié)論如下:第一部分:在體研究切應(yīng)力對(duì)動(dòng)脈粥樣硬化易損斑塊血管新生的影響(1)對(duì)Apo E-/-小鼠頸動(dòng)脈進(jìn)行套環(huán)結(jié)扎,形成血管局部狹窄,通過(guò)小動(dòng)物超聲技術(shù)檢測(cè)狹窄血管兩端的血流速率和血管直徑,結(jié)果顯示近心端的切應(yīng)力高于遠(yuǎn)心端;掃描電鏡觀察血管內(nèi)層結(jié)構(gòu),發(fā)現(xiàn)狹窄血管近心端內(nèi)皮層有損傷,而遠(yuǎn)心端區(qū)域血管內(nèi)皮細(xì)胞層比較完整。(2)小鼠頸動(dòng)脈狹窄模型構(gòu)建成功,并用高脂飼料喂8周后,核磁共振掃描檢測(cè)發(fā)現(xiàn)狹窄處血管形成了明顯的斑塊,HE染色發(fā)現(xiàn)狹窄近心端血管內(nèi)斑塊阻塞情況嚴(yán)重,斑塊內(nèi)形成大量新生微血管,而遠(yuǎn)心端低切應(yīng)力區(qū)僅有一定程度的內(nèi)膜增生;Masson染色和VG染色表明高切應(yīng)區(qū)易損斑塊內(nèi)膠原含量和肌纖維含量顯著性下降。第二部分:細(xì)胞水平研究切應(yīng)力對(duì)血管新生相關(guān)因子Id1、MT1-MMP(Membrane-type matrix metalloproteinase-1)、MT4-MMP(Membrane-type matrix metalloproteinase-4)的影響分別用5dynes/cm2、12dynes/cm2、25dynes/cm2的力加載人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞6h后,熒光定量PCR、Western blot和細(xì)胞免疫熒光檢測(cè)Id1,MTI-MMP,MT4-MMP的表達(dá)情況。結(jié)果發(fā)現(xiàn)高切應(yīng)力25dynes/cm2會(huì)促進(jìn)Id1,MTI-MMP,MT4-MMP的表達(dá)上調(diào),而低切應(yīng)力5dynes/cm2則會(huì)抑制其表達(dá)。第三部分:Id1調(diào)控MTI-MMP,MT4-MMP促進(jìn)血管新生的機(jī)制研究(1)為了進(jìn)一步的研究Id1與MTI-MMP,MT4-MMP的關(guān)系以及對(duì)血管新生的影響,慢病毒轉(zhuǎn)染獲得過(guò)表達(dá)Id1和干擾Id1的細(xì)胞株,RT-PCR和Western Blot檢測(cè)發(fā)現(xiàn)過(guò)表達(dá)Id1會(huì)促進(jìn)MT1-MMP、MT4-MMP的表達(dá)上調(diào),干擾Id1的表達(dá)則相應(yīng)的降低MT1-MMP、MT4-MMP的表達(dá)。(2)通過(guò)細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)、基質(zhì)膠侵襲實(shí)驗(yàn)和體外血管新生實(shí)驗(yàn),發(fā)現(xiàn)過(guò)表達(dá)Id1能加速胞外基質(zhì)的降解,增強(qiáng)細(xì)胞的遷移能力和大大提高內(nèi)皮細(xì)胞血管新生能力,包括細(xì)胞形成管腔數(shù)量和管腔長(zhǎng)度。上述研究進(jìn)一步驗(yàn)證了Id1能調(diào)控MT1-MMP、MT4-MMP降解胞外基質(zhì)來(lái)增強(qiáng)細(xì)胞遷移、侵襲能力,調(diào)控血管新生過(guò)程。
【關(guān)鍵詞】：血管新生 分化抑制因子1(Id1) 切應(yīng)力 MT1-MMP MT4-MMP
【學(xué)位授予單位】：重慶大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類(lèi)號(hào)】：R543.5
【目錄】：

• 摘要3-5
• ABSTRACT5-10
• 主要縮寫(xiě)詞表10-11
• 1 緒論11-21
• 1.1 問(wèn)題的提出11-12
• 1.2 AS的發(fā)病機(jī)理12-13
• 1.3 血流切應(yīng)力與AS的關(guān)系13-15
• 1.4 斑塊內(nèi)血管新生與AS穩(wěn)定性的關(guān)系15-16
• 1.4.1 AS易損斑塊的特點(diǎn)15
• 1.4.2 斑塊內(nèi)血管新生與易損斑塊15-16
• 1.5 Id1蛋白與易損斑塊血管新生的關(guān)系16-17
• 1.5.1 Id1調(diào)控血管新生16-17
• 1.5.2 Id1調(diào)控AS易損斑塊的形成和發(fā)展17
• 1.6 膜型基質(zhì)金屬蛋白酶在血管新生中的作用17-19
• 1.7 研究意義和研究?jī)?nèi)容19-21
• 1.7.1 研究意義19
• 1.7.2 研究?jī)?nèi)容19-21
• 2 高切應(yīng)力介導(dǎo)血管新生促進(jìn)易損斑塊的形成21-33
• 2.1 引言21
• 2.2 材料21-22
• 2.2.1 實(shí)驗(yàn)儀器和耗材21-22
• 2.2.2 實(shí)驗(yàn)試劑22
• 2.2.3 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物22
• 2.3 方法22-25
• 2.3.1 構(gòu)建ApoE-/-小鼠頸總動(dòng)脈套環(huán)狹窄模型22-23
• 2.3.2 血管內(nèi)超聲成像技術(shù)檢測(cè)血流量和血管直徑23
• 2.3.3 血管內(nèi)腔掃描電鏡23
• 2.3.4 核磁共振檢測(cè)23-24
• 2.3.5 斑塊的形態(tài)學(xué)表征24-25
• 2.3.6 統(tǒng)計(jì)分析25
• 2.4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果25-31
• 2.4.1 狹窄套環(huán)引起頸動(dòng)脈血流動(dòng)力學(xué)的改變25-26
• 2.4.2 高切應(yīng)力破壞內(nèi)皮層完整性26-27
• 2.4.3 核磁共振MRI分析斑塊的形成27-28
• 2.4.4 高切應(yīng)力促進(jìn)斑塊內(nèi)血管新生28-30
• 2.4.5 高切應(yīng)力促進(jìn)膠原纖維、肌纖維的降解30-31
• 2.5 討論31-33
• 3 切應(yīng)力對(duì)Id1，MMP14，MMP17表達(dá)的影響33-46
• 3.1 引言33
• 3.2 實(shí)驗(yàn)材料33-35
• 3.2.1 實(shí)驗(yàn)儀器和耗材33-34
• 3.2.2 實(shí)驗(yàn)試劑34-35
• 3.3 實(shí)驗(yàn)方法35-41
• 3.3.1 HUVEC的培養(yǎng)、傳代、凍存、復(fù)蘇35
• 3.3.2 細(xì)胞力學(xué)加載35-36
• 3.3.3 細(xì)胞免疫熒光染色36
• 3.3.4 熒光定量PCR36-39
• 3.3.5 Western blot39-41
• 3.4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果41-45
• 3.4.1 不同切應(yīng)力處理HUVECs后細(xì)胞形態(tài)的變化41-42
• 3.4.2 細(xì)胞免疫熒光檢測(cè)Id1、MMP14、MMP17的表達(dá)42-43
• 3.4.3 高切應(yīng)力促進(jìn)內(nèi)皮細(xì)胞Id1、MMP14、MMP17基因的表達(dá)43-44
• 3.4.4 Western Blot檢測(cè)Id1、MMP14、MMP17蛋白的表達(dá)44-45
• 3.5 討論45-46
• 4 Id1通過(guò)調(diào)控MMP14，MMP17促進(jìn)血管新生過(guò)程46-54
• 4.1 引言46
• 4.2 實(shí)驗(yàn)儀器和試劑46
• 4.3 實(shí)驗(yàn)方法46-48
• 4.3.1 HUVEC的慢病毒感染46-47
• 4.3.2 細(xì)胞遷移實(shí)驗(yàn)47
• 4.3.3 血管內(nèi)皮細(xì)胞Matrigel基質(zhì)膠上侵襲實(shí)驗(yàn)47
• 4.3.4 細(xì)胞管腔形成實(shí)驗(yàn)47-48
• 4.3.5 熒光定量PCR和western blot48
• 4.4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果48-53
• 4.4.1 Id1過(guò)表達(dá)和Id1干擾內(nèi)皮細(xì)胞的鑒定48-49
• 4.4.2 Id1調(diào)控MMP14，MMP17的表達(dá)49-50
• 4.4.3 過(guò)表達(dá)Id1促進(jìn)細(xì)胞的遷移能力50-51
• 4.4.4 Id1促進(jìn)細(xì)胞基質(zhì)膠侵襲能力51-52
• 4.4.5 Id1促進(jìn)體外血管新生52-53
• 4.5 討論53-54
• 5 結(jié)論與展望54-56
• 5.1 主要結(jié)論54
• 5.2 后續(xù)工作展望54-56
• 致謝56-57
• 參考文獻(xiàn)57-63
• 附錄63
• A. 作者在攻讀學(xué)位期間發(fā)表的論文和專(zhuān)利63
• B. 作者在功讀碩士期間參與的課題63

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本文編號(hào)：739544