發(fā)布時(shí)間：2017-08-23 12:03

  本文關(guān)鍵詞：瑞舒伐他汀對(duì)兔動(dòng)脈粥樣硬化斑塊內(nèi)CD147的表達(dá)及斑塊穩(wěn)定性的影響

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【摘要】：心腦血管疾病因其具有很高的發(fā)病率和死亡率,成為目前威脅人類健康的重要?dú)⑹帧?dòng)脈粥樣硬化(atherosclerosis, AS)是眾多的心腦血管疾病(冠心病、腦卒中等)發(fā)生發(fā)展的重要病理基礎(chǔ)。動(dòng)脈粥樣硬化的形成是由多種因素(如高血壓、高脂血癥、高血糖、吸煙等)導(dǎo)致了動(dòng)脈血管的內(nèi)皮功能紊亂,平滑肌細(xì)胞發(fā)生增殖、遷移,動(dòng)脈血管壁發(fā)生炎癥反應(yīng),繼而形成粥樣硬化斑塊,在動(dòng)脈硬化的發(fā)生發(fā)展過(guò)程中,炎癥反應(yīng)貫穿始終。目前隨著生活水平的普遍提高,多種高危因素如糖尿病、高脂血癥的患病率逐年升高,使動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)病率、死亡率增加,嚴(yán)重威脅人類健康及生活。目前國(guó)內(nèi)外許多學(xué)者針對(duì)關(guān)于動(dòng)脈粥樣硬化發(fā)病機(jī)制做了大量的研究工作,提出了許多假說(shuō),如脂質(zhì)學(xué)說(shuō)、血栓學(xué)說(shuō)、炎癥反應(yīng)學(xué)說(shuō)和損傷學(xué)說(shuō)等。明確動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)病機(jī)制對(duì)于尋求預(yù)防措施和治療手段顯得至關(guān)重要。目前的研究認(rèn)為,動(dòng)脈粥樣硬化性疾病是動(dòng)脈管壁長(zhǎng)期慢性進(jìn)展性炎癥性病變,其特征由富含脂質(zhì)的粥樣核心內(nèi)有炎癥細(xì)胞聚集以及其表面覆蓋的纖維帽構(gòu)成。從病理學(xué)上觀察斑塊穩(wěn)定與否與纖維帽的厚度、炎癥細(xì)胞的聚集程度及膠原組織的含量多少密切相關(guān)。而目前的研究證實(shí),斑塊內(nèi)炎癥反應(yīng)的程度是導(dǎo)致纖維帽變薄、斑塊不穩(wěn)定的最為重要的因素。由于炎癥介質(zhì)刺激斑塊內(nèi)炎癥細(xì)胞活化,后者表達(dá)和分泌大量基質(zhì)金屬蛋白酶(matrix metalloproteinases, MMPs),導(dǎo)致斑塊內(nèi)包括膠原在內(nèi)的細(xì)胞外基質(zhì)降解,纖維帽變薄,使斑塊不穩(wěn)定,易于破裂,從而產(chǎn)生急性心腦血管事件。 基質(zhì)金屬蛋白酶是一組由平滑肌細(xì)胞和巨噬細(xì)胞分泌和表達(dá)的鋅離子依賴性內(nèi)肽酶的總稱。MMPs的活性很大程度上決定了動(dòng)脈粥樣硬化斑塊纖維帽厚度及其膠原含量。在動(dòng)脈粥樣硬化發(fā)生、發(fā)展中,基質(zhì)金屬蛋白酶通過(guò)降解易損斑塊的纖維帽,從而在斑塊形成和斑塊破裂出血的發(fā)生中都起非常重要的作用。因此,MMPs與動(dòng)脈粥樣斑塊穩(wěn)定性的研究已成為目前研究的熱點(diǎn)之一。動(dòng)脈粥樣硬化斑塊內(nèi)的MMPs主要是由巨噬細(xì)胞及平滑肌細(xì)胞分泌,已發(fā)現(xiàn)動(dòng)脈粥樣硬化斑塊內(nèi)巨噬細(xì)胞聚積區(qū)有大量的MMPs存在。MMP-2、MMP-9屬于基質(zhì)金屬蛋白酶的明膠酶類,是目前研究較多且對(duì)斑塊穩(wěn)定性影響較為明確的兩種基質(zhì)金屬蛋白酶。目前對(duì)于MMPs表達(dá)和功能調(diào)控的的信號(hào)通路還并不十分清楚,除受內(nèi)源特異性細(xì)胞外抑制劑調(diào)節(jié)外,還受轉(zhuǎn)錄水平和酶原激活等形式調(diào)節(jié)。 CD147分子是一種高度糖基化的、廣泛表達(dá)的跨膜糖蛋白,最初是從肺癌細(xì)胞系LX-1中分離出來(lái),屬于免疫球蛋白超家族的成員。CD147分子是基質(zhì)金屬蛋白酶的上游調(diào)控因子,它能夠以旁分泌的方式在多種細(xì)胞質(zhì)誘導(dǎo)產(chǎn)生過(guò)過(guò)度MMPs,通過(guò)降解細(xì)胞外基質(zhì)中膠原蛋白,從而促進(jìn)細(xì)胞轉(zhuǎn)移和免疫性疾病的炎癥活動(dòng)。目前研究發(fā)現(xiàn)CD147可以在平滑肌細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞、單核細(xì)胞等多種細(xì)胞中誘導(dǎo)金屬基質(zhì)蛋白酶的產(chǎn)生,其包括MMP-1、MMP-2、MMP-3、MMP-9、1型跨膜基質(zhì)金屬蛋白酶蛋白(Membrane Type1Matrix Metalloproteinase, MT-MMP)等,由此我們推測(cè)斑塊內(nèi)CD147通過(guò)影響MMPs的表達(dá),對(duì)斑塊穩(wěn)定性可能起到重要作用。 他汀類是目前治療心腦血管疾病的常用藥物,其對(duì)心腦血管病的治療作用除了依靠其降脂作用外,還得益于多種非調(diào)脂作用,如抑制平滑肌細(xì)胞的增生、增加一氧化氮的生物合成、改善血管內(nèi)皮功能、逆轉(zhuǎn)血管重構(gòu)、抑制血栓形成、抗炎作用、抗氧化和穩(wěn)定動(dòng)脈粥樣硬化斑塊等,這些作用在動(dòng)脈粥樣硬化的防治中占有重要地位。他汀類降脂藥的多效性作用越來(lái)越受到關(guān)注,其抗炎作用是目前研究的熱點(diǎn)之一。瑞舒伐他汀作為一種新型的降脂藥物在臨床上廣泛應(yīng)用,其除了具有強(qiáng)大的降脂作用外,還可在抑制炎癥反應(yīng)、改善血管內(nèi)皮功能、穩(wěn)定斑塊等方面發(fā)揮重要作用。 近年來(lái),隨著他汀藥物在臨床的廣泛應(yīng)用,降低了心腦血管疾病的發(fā)生率和病死率。本研究通過(guò)建立兔頸動(dòng)脈粥樣硬化易損斑塊模型,探討血清炎癥因子濃度水平變化、斑塊內(nèi)CD147的表達(dá)水平與斑塊穩(wěn)定性的關(guān)系,探索瑞舒伐他汀穩(wěn)定斑塊的機(jī)制。 目的 1、利用液氮凍傷聯(lián)合高脂飲食喂養(yǎng)創(chuàng)建與人動(dòng)脈粥樣硬化斑塊相似的兔頸動(dòng)脈粥樣硬化斑塊模型,為研究動(dòng)脈粥樣硬化斑塊的病理基礎(chǔ)及干預(yù)治療奠定基礎(chǔ)。 2、在上述自創(chuàng)的兔動(dòng)脈粥樣硬化模型基礎(chǔ)上,探討瑞舒伐他汀對(duì)兔頸動(dòng)脈粥樣硬化斑塊內(nèi)的CD147表達(dá)水平、外周血清金屬基質(zhì)蛋白酶-2(MMP-2)、金屬基質(zhì)蛋白酶-9(MMP-9)的濃度水平以及斑塊穩(wěn)定性的影響。 方法 1、動(dòng)物模型的建立健康純種雄性新西蘭白兔18只,將動(dòng)物采用抽簽法隨機(jī)分為3組,分別為：A組為空白對(duì)照組：普通飼料喂養(yǎng)；B組為模型對(duì)照組：造模+高脂飼料喂養(yǎng)；C組為藥物干預(yù)組：造模+高脂飼料+瑞舒伐他汀鈣片(2.5mg/kg/d)。普通飼料適應(yīng)性喂養(yǎng)7天后,對(duì)模型對(duì)照組及藥物干預(yù)組實(shí)施右頸動(dòng)脈內(nèi)膜液氮凍傷術(shù),術(shù)后模型對(duì)照組及藥物干預(yù)組高脂飼料喂養(yǎng)13周,行右側(cè)頸動(dòng)脈內(nèi)膜液氮激發(fā)術(shù),繼續(xù)喂養(yǎng)1周后處死�？瞻讓�(duì)照組一直給予普通飼料喂養(yǎng)。 2、瑞舒伐他汀藥物干預(yù)藥物干預(yù)組第1次術(shù)后第一天,開(kāi)始瑞舒伐他汀灌胃給藥,每只兔按2.5mg/kg計(jì)算給藥,稀釋于10ml生理鹽水灌胃,每日一次。其他兩組予同等劑量的生理鹽水。 3、分別于實(shí)驗(yàn)前、15周末采血,采用酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)檢測(cè)基質(zhì)金屬蛋白酶2(MMP-2)、基質(zhì)金屬蛋白酶9(MMP-9)的水平。 4、15周末時(shí)處死所有動(dòng)物,取出實(shí)驗(yàn)血管作HE染色、Masson三色染色和彈力纖維染色,光鏡下觀察實(shí)驗(yàn)血管病理形態(tài)學(xué)特點(diǎn)。應(yīng)用MMP-2、MMP-9的單克隆抗體對(duì)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物血管進(jìn)行免疫組織化學(xué)染色,以明確斑塊局部金屬基質(zhì)蛋白酶系列蛋白表達(dá)情況。逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)檢測(cè)斑塊內(nèi)CD147mRNA表達(dá)水平及蛋白質(zhì)印跡法(Western blot)檢測(cè)斑塊內(nèi)CD147蛋白表達(dá)水平。 5、統(tǒng)計(jì)學(xué)分析：數(shù)據(jù)應(yīng)用SPSS13.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)描述與分析,計(jì)量資料用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示,兩配對(duì)樣本均數(shù)總體比較時(shí)采用配對(duì)樣本t檢驗(yàn)。多個(gè)樣本均數(shù)總體比較采用One-way ANOVA(方差不齊時(shí)多個(gè)樣本均數(shù)總體比較采用Brown-Forsythe法檢驗(yàn),對(duì)自由度進(jìn)行校正后在進(jìn)行比較)；方差齊時(shí)多個(gè)樣本均數(shù)間的多重比較采用LSD檢驗(yàn)(方差不齊時(shí)樣本均數(shù)間的多重比較采用Dunnett'sT3檢驗(yàn)),認(rèn)為P0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 結(jié)果 1、兔總體生長(zhǎng)良好。所有18只實(shí)驗(yàn)動(dòng)物全部完成實(shí)驗(yàn),其中B組2只兔子第2次液氮激發(fā)術(shù)后(14周末)出現(xiàn)腦梗塞。所得18只動(dòng)物數(shù)據(jù)參與分析。A組6只,B組6只,C組6只。 2、血清MMP-2濃度變化：實(shí)驗(yàn)前,各組兔血清MMP-2水平無(wú)顯著性差異(P0.05)。第15周末,空白對(duì)照組MMP-2水平與同組實(shí)驗(yàn)前相比,無(wú)顯著性差異(P0.05)；模型對(duì)照組和藥物干預(yù)組MMP-2與同組實(shí)驗(yàn)前相比,有顯著性差異(P0.05),表現(xiàn)為其MMP-2水平較實(shí)驗(yàn)前分別明顯升高。第15周末模型對(duì)照組和藥物干預(yù)組MMP-2水平有顯著性差異,表現(xiàn)為藥物干預(yù)組MMP-2水平明顯低于模型對(duì)照組(P0.05)。 3、血清MMP-9濃度變化：實(shí)驗(yàn)前,各組兔血清MMP-2水平無(wú)顯著性差異(P0.05)。第15周末,空白對(duì)照組MMP-2水平與同組實(shí)驗(yàn)前相比,無(wú)顯著性差異(P0.05)；模型對(duì)照組和藥物干預(yù)組MMP-2與同組實(shí)驗(yàn)前相比,有顯著性差異(P0.05),表現(xiàn)為其MMP-2水平較實(shí)驗(yàn)前分別明顯升高。第15周末模型對(duì)照組和藥物干預(yù)組MMP-2水平有顯著性差異,表現(xiàn)為藥物干預(yù)組MMP-2水平明顯低于模型對(duì)照組(P0.05)。 4、RT-PCR結(jié)果：各組均可檢測(cè)到CD147mRNA表達(dá),各組CD147mRNA表達(dá)量均有顯著性差異(P0.05),表現(xiàn)為模型對(duì)照組CD147mRNA表達(dá)量最高,空白對(duì)照組CD147mRNA表達(dá)量最低,而藥物干預(yù)組CD147mRNA表達(dá)量介于上述兩組之間。模型對(duì)照組與空白對(duì)照組相比,CD147mRNA表達(dá)量升高19.5倍。藥物干預(yù)組與模型對(duì)照組相比,CD147mRNA表達(dá)量降低45.3%。 5、Western blot結(jié)果：各組均可檢測(cè)到CD147蛋白表達(dá),各組CD147蛋白含量均有顯著性差異(P0.05),表現(xiàn)為空白對(duì)照組頸動(dòng)脈局部CD147蛋白含量最低,模型對(duì)照組CD147蛋白含量最高,而藥物干預(yù)組CD147蛋白含量介于上述兩組之間。模型對(duì)照組與空白對(duì)照組相比,CD147蛋白表達(dá)量升高1.37倍。藥物干預(yù)組與模型對(duì)照組相比,CD147蛋白表達(dá)量降低17.5%。 結(jié)論 動(dòng)脈易損斑塊局部CD147的表達(dá)以及血清MMP-2、MMP-9的濃度水平明顯增加。而瑞舒伐他汀可以明顯抑制斑塊局部CD147的表達(dá)及降低血清MMP-2、MMP-9濃度水平。因此,瑞舒伐他汀可能通過(guò)抑制CD147表達(dá)及降低血清MMP-2、MMP-9等炎癥因子水平,從而發(fā)揮其穩(wěn)定斑塊的作用。
【關(guān)鍵詞】：動(dòng)脈粥樣硬化 瑞舒伐他汀 CD147 基質(zhì)金屬蛋白酶-2 基質(zhì)金屬蛋白酶-9
【學(xué)位授予單位】：南方醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號(hào)】：R543.5
【目錄】：

• 摘要3-8
• ABSTRACT8-19
• 前言19-21
• 1. 材料與方法21-39
• 2. 結(jié)果39-43
• 3. 討論43-51
• 4. 結(jié)論51-52
• 參考文獻(xiàn)52-58
• 附圖58-62
• 英文縮寫(xiě)詞62-63
• 成果63-64
• 致謝64-66

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前5條

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本文編號(hào)：724915