發(fā)布時(shí)間：2017-08-23 03:16

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【摘要】：【目的】1、探究與正常人相比,LLEST在急性髓系白血病(AML)及骨髓增生異常綜合征(MDS)中表達(dá)情況,明確LLEST在AML中的重要意義。2、研究LLEST促進(jìn)凋亡機(jī)制。3、構(gòu)建攜帶LLEST基因的慢病毒載體,初步進(jìn)行慢病毒包裝,并檢驗(yàn)其有效性,為下一步探究LLEST在原代白血病細(xì)胞上的效應(yīng)與功能提供理論與實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)�！痉椒ā客ㄟ^(guò)對(duì)NCBI數(shù)據(jù)庫(kù)中大樣本基因芯片數(shù)據(jù)的分析,發(fā)現(xiàn)與正常人相比,LLEST表達(dá)在AML和MDS患者中水平較低。選擇前期實(shí)驗(yàn)建立的高表達(dá)LLEST的K562細(xì)胞株(LLEST細(xì)胞株)和對(duì)照組K562細(xì)胞株(Vector細(xì)胞株)為實(shí)驗(yàn)對(duì)象,以基因芯片技術(shù)檢測(cè)兩種細(xì)胞株表達(dá)有差異的基因,同時(shí)運(yùn)用生物信息學(xué)分析軟件預(yù)測(cè)LLEST可能作用的基因�；趯�(duì)BCL2基因的預(yù)測(cè),選擇4例AML患者治療前后的標(biāo)本、LLEST細(xì)胞株和Vector細(xì)胞株、LLEST細(xì)胞和Vector細(xì)胞裸鼠皮下成瘤實(shí)驗(yàn)所成的瘤塊進(jìn)行研究相關(guān)基因及蛋白表達(dá)水平進(jìn)行研究。應(yīng)用雙熒光素酶報(bào)告基因技術(shù)對(duì)LLEST促凋亡機(jī)制進(jìn)行深入探索�；趯�(duì)XIAP基因的預(yù)測(cè),選擇18例初治AML治療前后的骨髓標(biāo)本以及LLEST細(xì)胞株和Vector細(xì)胞株,對(duì)LLEST和XIAP基因的表達(dá)進(jìn)行初步研究。選擇LV5慢病毒質(zhì)粒為載體,構(gòu)建攜帶LLEST基因慢病毒質(zhì)粒,并初步進(jìn)行慢病毒的包裝,為下一步研究奠定基礎(chǔ)�！窘Y(jié)果】1、根據(jù)NCBI數(shù)據(jù)庫(kù)Haferlach等對(duì)AML及MDS研究的基因芯片數(shù)據(jù),經(jīng)過(guò)分析發(fā)現(xiàn),與正常人相比,LLEST在AML及MDS患者中的骨髓單個(gè)核細(xì)胞的表達(dá)水平下降。2、為了分析LLEST發(fā)揮作用的機(jī)制,首先通過(guò)基因芯片技術(shù)檢測(cè)到在LLEST細(xì)胞株及Vector細(xì)胞株中表達(dá)有差異的基因,共1613個(gè);通過(guò)生物信息軟件預(yù)測(cè)了LLEST可能作用的基因,共1518個(gè),同時(shí)存在于這兩個(gè)數(shù)據(jù)集中共有11個(gè)基因。選擇4例AML患者治療前后的骨髓標(biāo)本對(duì)這11個(gè)基因及LLEST進(jìn)行檢測(cè),預(yù)測(cè)的基因只有BCL2基因水平一致性降低,LLEST明顯升高。在LLEST細(xì)胞株和Vector細(xì)胞株中,BCL2基因的表達(dá)有明顯差異,LLEST細(xì)胞株的BCL2基因明顯低水平。在裸鼠成瘤組織中,LLEST細(xì)胞皮下成瘤組織中,BCL2蛋白明顯比對(duì)照組表達(dá)低。熒光素酶基因?qū)嶒?yàn)表明LLEST對(duì)BCL2基因有直接抑制作用。3、18例AML患者中,有4例患者治療后骨髓標(biāo)本LLEST和XIAP水平同時(shí)降低。LLEST細(xì)胞株相較于Vector細(xì)胞株XIAP表達(dá)水平也明顯較低。4、選擇LV5慢病毒質(zhì)粒為載體,成功構(gòu)建了攜帶LLEST基因的重組慢病毒質(zhì)粒LV5-LLEST,在293T細(xì)胞中完成慢病毒的包裝,并轉(zhuǎn)染K562細(xì)胞。經(jīng)Q-PCR證實(shí)K562細(xì)胞實(shí)現(xiàn)了LLEST的高表達(dá),結(jié)果表明重組質(zhì)粒構(gòu)建的有效性�！窘Y(jié)論】1、AML與MDS病人中LLEST表達(dá)存在明顯差異。2、LLEST對(duì)白血病細(xì)胞具有促凋亡作用,通過(guò)下調(diào)BCL2基因而介導(dǎo)。3、XIAP參與LLEST發(fā)揮促凋亡作用,但其機(jī)制尚需進(jìn)一步研究。4、成功構(gòu)建攜帶LLEST基因的慢病毒載體,并初步完成了慢病毒的包裝,為下一步探究LLEST在原代白血病細(xì)胞上的效應(yīng)與功能提供理論與實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。
【關(guān)鍵詞】：LLEST BCL2基因 XIAP 促凋亡 慢病毒
【學(xué)位授予單位】：蘇州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R733.7;R551.3
【目錄】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-10
• 引言10-14
• 參考文獻(xiàn)12-14
• 第一部分 長(zhǎng)鏈非編碼RNA-LLEST抗白血病機(jī)制的研究14-27
• 材料與方法14-22
• 結(jié)果22-27
• 第二部分 LLEST抗白血病機(jī)制與XIAP27-30
• 材料與方法27-28
• 結(jié)果28-30
• 第三部分 攜帶長(zhǎng)鏈非編碼RNA-LLEST基因慢病毒質(zhì)粒的構(gòu)建30-41
• 材料與方法30-37
• 結(jié)果37-41
• 討論41-47
• 結(jié)論47-48
• 參考文獻(xiàn)48-50
• 綜述50-56
• 參考文獻(xiàn)53-56
• 中英文對(duì)照縮略詞表56-57
• 攻讀學(xué)位期間公開(kāi)發(fā)表的文章57-58
• 致謝58-60

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本文編號(hào)：722664