本文關(guān)鍵詞：Klotho基因與大鼠心力衰竭心肌重構(gòu)的相關(guān)性研究

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【摘要】：目的:探討重組腺病毒介導(dǎo)的Klotho基因轉(zhuǎn)染對大鼠心力衰竭(心衰)進程以及心肌重構(gòu)的影響,并探討其機制。方法:SPF級SD大鼠,隨機數(shù)表法分為5組,即正常對照組(對照組,未給予任何干預(yù)),心衰組(只做心衰模型,不給予其他干預(yù)),生理鹽水組(在心衰模型的基礎(chǔ)上尾靜脈注射生理鹽水,0.5 ml/只),腺病毒載體介導(dǎo)的增強熒光蛋白組(AD.EGFP組,在心衰模型的基礎(chǔ)上用腺病毒載體介導(dǎo)增強熒光蛋白,2×1010 pfu,0.5 ml/只),以及腺病毒載體介導(dǎo)的目的基因組(AD.Klotho組,在心衰模型的基礎(chǔ)上用腺病毒載體介導(dǎo)目的基因,2×1010pfu,0.5 ml/只),每組6只。異丙腎上腺素連續(xù)腹腔注射法建立大鼠心衰模型。構(gòu)建重組腺病毒載體pDC316-CMV-EGFP-Klotho,標記為AD.Klotho,并將其轉(zhuǎn)導(dǎo)至相應(yīng)的心衰大鼠模型。建模第6周,采用超聲心動圖測定各組大鼠的左心室射血分數(shù)(LVEF);多道生理記錄儀測定各組大鼠血液動力學(xué)變化;檢測各組大鼠心肌組織病理學(xué)改變;冰凍切片后鏡下觀察各組大鼠心肌組織熒光蛋白表達水平;實時熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)評估各組大鼠心肌組織中Klotho基因的表達水平,以及心肌纖維化相關(guān)因子Ⅰ型膠原和Ⅲ型膠原的表達水平;ELISA法檢測各組大鼠血漿中B型利鈉肽(BNP)的表達水平。結(jié)果:心衰組、生理鹽水組、AD.EGFP組和AD.Klotho組大鼠心肌組織蘇木素伊紅染色可見心肌細胞斷裂、心肌間質(zhì)增生、心肌細胞肥大和結(jié)構(gòu)改變。對照組大鼠心肌組織病理切片未見上述改變。通過比較發(fā)現(xiàn),AD.Klotho組大鼠心肌纖維化程度、重構(gòu)程度以及心肌細胞肥大程度均較心衰組、生理鹽水組和ad.egfp組低。建模第6周,ad.klotho組和ad.egfp組大鼠心肌組織中仍可見egfp綠色熒光表達,而對照組、心衰組和生理鹽水組則未可見。各組大鼠心肌組織中klotho、膠原Ⅰa1和Ⅲa1mrna均有表達。其中,對照組和ad.klotho組klothomrna表達水平較高,與其他3組比較差異均具有統(tǒng)計學(xué)意義(p均0.05),而心衰組、生理鹽水組和ad.egfp組間klothomrna表達水平差異無統(tǒng)計學(xué)意義(p均0.05)。心衰組、生理鹽水組和ad.egfp組膠原Ⅰa1和Ⅲa1mrna表達水平均較對照組和ad.klotho組高,差異均具有統(tǒng)計學(xué)意義(p均0.05),且三組間比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(p均0.05)。超聲心動圖結(jié)果示心衰組、生理鹽水組、ad.egfp組和ad.klotho組大鼠總體左室射血分數(shù)為(42.27±3.22%)低于對照組(72.13±2.97%)(p0.01)。對照組和ad.klotho組hr均高于心衰組、生理鹽水組和ad.egfp組(p均0.05)。對照組和ad.klotho組lvsp均高于心衰組、生理鹽水組和ad.egfp組(p均0.01)。對照組和ad.klotho組lvedp均低于心衰組、生理鹽水組和ad.egfp組(p均0.01)。對照組和ad.klotho組+dp/dtmax均大于心衰組、生理鹽水組和ad.egfp組(p均0.05)。對照組和ad.klotho組-dp/dtmax亦均大于心衰組、生理鹽水組和ad.egfp組(p均0.05)。心衰組、生理鹽水組、ad.egfp組和ad.klotho組大鼠心臟體質(zhì)量指數(shù)分別為(6.50±0.32)、(6.46±0.18)、(6.34±0.15)和(5.23±0.19)g×1000/g均明顯高于對照組(2.84±0.25)g×1000/g,(p均0.05),但ad.klotho組又明顯低于心衰組、生理鹽水組和ad.egfp組(p0.05),心衰組、生理鹽水組和ad.egfp組間差異則無統(tǒng)計學(xué)意義(p均0.05)。心衰組、生理鹽水組、ad.egfp組和ad.klotho組大鼠血清中bnp水平均明顯高于模型組(p均0.01),但ad.klotho組明顯低于心衰組、生理鹽水組和ad.egfp組(p0.05)。結(jié)論:腹腔注射異丙腎上腺素可成功建立大鼠心衰模型。klotho基因可抑制心肌纖維化、心肌肥大及膠原纖維增生。
【關(guān)鍵詞】：心力衰竭 充血性 心室重構(gòu) Klotho基因
【學(xué)位授予單位】：桂林醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R541.6
【目錄】：

• 中文摘要5-8
• ABSTRACT8-11
• 英漢縮略詞對照表11-12
• 前言12-14
• 1 材料與方法14-33
• 1.1 實驗材料與儀器14-15
• 1.2 主要實驗試劑15-16
• 1.3 主要實驗儀器16-17
• 1.4 實驗方法17-33
• 1.5 統(tǒng)計學(xué)分析33
• 2 結(jié)果33-45
• 2.1 模型建立33
• 2.2 重組腺病毒治療 6 周后各組大鼠心臟組織切片病理學(xué) HE 染色33-35
• 2.3 重組腺病毒治療 6 周后各組大鼠心臟組織綠色熒光分布情況35-36
• 2.4 重組腺病毒轉(zhuǎn)染 HEK293 細胞結(jié)果圖36-37
• 2.5 重組腺病毒載體的構(gòu)建37-42
• 2.6 各組大鼠心肺功能的檢測結(jié)果42
• 2.7 各組大鼠心臟體質(zhì)量指數(shù)的檢測結(jié)果42-43
• 2.8 大鼠心肌組織中Klotho和Col Ⅰa1和ColⅢa1 mRNA表達水平的檢測結(jié)果43-44
• 2.9 各組大鼠血清中 BNP 水平的檢測結(jié)果44-45
• 3 討論45-47
• 4 結(jié)論47-48
• 參考文獻48-52
• 綜述52-62
• 參考文獻58-62
• 攻讀學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文目錄62-63
• 致謝63-64

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本文編號：722374