本文關鍵詞：MicroRNA-155對動脈粥樣硬化炎癥中TRIF信號通路的影響

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【摘要】：[目的]明確miR-155是否能調(diào)控TRIF介導的信號通路,調(diào)節(jié)促炎和抗炎反應的平衡,為防治動脈粥樣硬化提供新的思路和策略。[方法]1. oxLDL對RAW264.7細胞進行干預,分別于Oh、6h、12h、24h取樣,0h作為對照組,采用RT-PCR分析不同誘導時間下巨噬細胞中miR-155、 SOCS1、TRIF mRNA的濃度；采用western blot觀察不同干預時間對SOCS1、 TRIF蛋白濃度的影響。2.對oxLDL干預后的RAW264.7細胞進行SOCS1腺病毒轉(zhuǎn)染,采用RT-PCR分析轉(zhuǎn)染后miR-155、SOCS1、TRIF mRNA的濃度；采用western blot分析轉(zhuǎn)染SOCS1腺病毒對SOCS1、TRIF蛋白濃度的影響。3.高脂喂養(yǎng)ApoE-/-小鼠建立動脈粥樣硬化小鼠模型后,對小鼠進行尾靜脈注射antagomir miR-155,建立miR-155表達抑制的動脈粥樣硬化小鼠模型,分為C57BL/6普通喂養(yǎng)組、ApoE-/-高脂喂養(yǎng)組、ApoE-/-高脂喂養(yǎng)+antagomir NC組、ApoE-/-高脂喂養(yǎng)+Antagomir miR-155組。收集小鼠胸腹主動脈組織為樣本。4.將小鼠主動脈取出,進行石蠟切片,對其進行HE染色及masson染色,觀察主動脈斑塊的形態(tài)。5. western blot檢測SOCS1、TRIF蛋白的表達情況。6.統(tǒng)計學分析,實驗所得數(shù)據(jù)均采用spss17.0軟件進行分析,用均值±標準差(mean±SD)的方式表示。[結(jié)果]1.在oxLDL對RAW264.7細胞進行干預后,RT-PCR結(jié)果顯示,miR-155及TRIF的表達量隨干預時間增加而逐漸升高(P0.05),而SOCS1的表達量則呈現(xiàn)逐漸降低(P0.05),差異具有統(tǒng)計學意義；同時,western blot結(jié)果顯示,TRIF的蛋白濃度隨干預時間增加而升高(P0.05),而SOCS1的蛋白濃度則隨干預時間增加而降低(P0.05)。2. SOCS1腺病毒轉(zhuǎn)染后,RT-PCR結(jié)果顯示,SOCS1表達量明顯升高(P0.05),提示轉(zhuǎn)染成功,TRIF的表達量明顯下降(P0.05), miR-155的表達量變化不明顯(P0.05)；在western blot結(jié)果中顯示,轉(zhuǎn)染組SOCS1表達量明顯升高(P0.05),而TRIF表達量則明顯降低(P0.05),差異具有統(tǒng)計學意義。3.高脂喂養(yǎng)小鼠后,小鼠胸腹主動脈切片HE染色提示動脈粥樣硬化模型建立成功。4. antagomir miR-155干預后,masson染色顯示干擾組膠原纖維數(shù)量比對照組數(shù)量增加,斑塊趨于穩(wěn)定,提示antagomir miR-155干預成功。western blot結(jié)果顯示,干預組SOCS1表達量比對照組明顯升高(P0.05),同時干預組TRIF表達量比對照組明顯降低(P0.05),差異具有統(tǒng)計學意義。[結(jié)論]1.miR-155及TRIF參與oxLDL刺激的RAW264.7巨噬細胞炎癥,并且miR-155通過抑制SOCS1, SOCS1負反饋調(diào)節(jié)TRIF促進炎癥反應。2.轉(zhuǎn)染SOCS1腺病毒后,miR-155并無明顯變化,而TRIF出現(xiàn)明顯降低,進一步證實SOCS1能負反饋調(diào)節(jié)TRIF。3.高脂喂養(yǎng)ApoE-/-小鼠成功建立小鼠動脈粥樣硬化模型,TRIF表達量明顯升高,同時SOCS1的表達量明顯降低,提示TRIF參與動脈粥樣硬化。4.通過尾靜脈注射antagomir miR-155成功建立miR-155表達抑制的動脈粥樣硬化小鼠模型；miR-155抑制后,其靶標分子SOCS1表達量明顯升高,進一步調(diào)控TRIF, TRIF出現(xiàn)表達量明顯降低,再一次提示miR-155通過抑制靶標分子SOCS1促進炎癥反應,進而調(diào)節(jié)TRIF介導的信號轉(zhuǎn)導通路。
【關鍵詞】：miRNA-155 TRIF 動脈粥樣硬化 炎癥 SOCS1
【學位授予單位】：昆明醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R543.5
【目錄】：

• 縮略詞表5-7
• 中文摘要7-9
• 英文摘要9-12
• 前言12-15
• 材料與方法15-31
• 結(jié)果31-40
• 討論40-48
• 結(jié)論48-49
• 參考文獻49-54
• 綜述54-61
• 參考文獻59-61
• 攻讀學位期間獲得的學術成果61-62
• 致謝62

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本文編號：702923