本文關(guān)鍵詞：靜脈內(nèi)皮源性活性氧族上調(diào)核因子HIF-1α誘導(dǎo)VEGF表達(dá)參與DVT形成的研究

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【摘要】：[目的]1.參照經(jīng)典文獻(xiàn),利用下腔靜脈狹窄法造模,用三種不同外直徑的注射器針頭作為控制下腔靜脈狹窄的工具,摸索在保證低死亡率時既能成栓穩(wěn)定,又更能模仿臨床環(huán)境的大鼠IVC殘余管腔橫截面積百分比范圍。2.在確定適合的殘余管腔橫截面積百分比之后利用相應(yīng)注射器針頭作為狹窄工具繼續(xù)用下腔靜脈狹窄法造模,研究大鼠狹窄法DVT模型和GSH干預(yù)模型的建立,以及觀察它們病理切片的不同表現(xiàn)。3.在造模24小時后取下腔靜脈及內(nèi)容物,通過TBA法和QPCR技術(shù),檢測大鼠靜脈內(nèi)皮細(xì)胞中MDA含量、HIF-1α和VEGF mRNA的表達(dá)情況,探討DVT形成時ROS、HIF-1α和VEGF三者的作用及相互關(guān)系。[材料與方法]第一部分：大鼠下腔靜脈狹窄法構(gòu)建瘀滯型DVT動物模型實(shí)驗(yàn)一、大鼠下腔靜脈狹窄法確定IVC殘余管腔橫截面積百分比1.實(shí)驗(yàn)分組：大鼠45只,按隨機(jī)分組原則分A組(n=15)、B組(n=15)、C組(n=15),且每組均采用下腔靜脈狹窄法制備深靜脈血栓模型；A、B、C三組分別采用外直徑為0.7mm (22G)、0.9mm (20G)、1.2mm (18G)注射器針頭控制大鼠DVT造模后殘余管腔橫截面積百分比。2.DVT大鼠下腔靜脈組織取材：在造模后24h時將大鼠過量麻醉,開腹后將結(jié)扎線至髂總靜脈分叉處之間下腔靜脈及其內(nèi)容物取下觀察是否有血栓形成。3.指標(biāo)測定和統(tǒng)計學(xué)分析：統(tǒng)計每組大鼠死亡率、成栓率、血管直徑及殘余管腔橫截面積百分比；統(tǒng)計學(xué)軟件采用SPSS17.0,計量資料采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(x±s)；組間兩兩比較采用單因素方差分析、用LSD法(最小二乘法),*p0.05有統(tǒng)計學(xué)意義。實(shí)驗(yàn)二、狹窄法造模后局部靜脈及血栓的組織學(xué)表現(xiàn)1.實(shí)驗(yàn)分組：大鼠80只,按隨機(jī)分組原則分正常組(n=20)、假手術(shù)組(n=20)、DVT模型組(n=20)及模型干預(yù)組(n=20),采用下腔靜脈狹窄法制備深靜脈血栓模型,模型干預(yù)組在造模前24h和造模后分別腹腔注射還原型谷胱甘肽660mg/Kg;用外徑0.9mm (20G)注射器針頭控制DVT造模后殘余管腔橫截面積百分比在9.9%±1.7%范圍內(nèi)。2.大鼠血液及下腔靜脈組織取材：在造模后24h時將大鼠過量麻醉,開腹后行腹主動脈采血,將獲得的大鼠抗凝全血離心后取血漿置于-80℃凍存；采血后取結(jié)扎線至髂總靜脈分叉處之間下腔靜脈及其內(nèi)容物并分成兩份,一份置于4%多聚甲醛中保存做病理切片,另一份置于-80℃凍存。3.指標(biāo)測定和統(tǒng)計學(xué)分析：統(tǒng)計大鼠成栓率、血栓濕重、血栓長度和血栓濕重/長度比值；統(tǒng)計學(xué)軟件采用SPSS17.0,計量資料采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(x±s)；組間兩兩比較采用單因素方差分析,用LSD法(最小二乘法),*p0.05有統(tǒng)計學(xué)意義。第二部分：大鼠DVT模型靜脈組織中]HIF-1α、VEGF和MDA的mRNA表達(dá)變化1.TBA法檢測各組大鼠靜脈組織內(nèi)MDA的含量,間接反應(yīng)氧化應(yīng)激的水平。2.Triz ol法提取每組大鼠下腔靜脈中總RNA, RT-PCR將各組大鼠靜脈組織RNA逆轉(zhuǎn)錄為cDNA；以GAPDH為內(nèi)參照,用Real-time PCR法檢測HIF-1α和、mRNA的表達(dá)變化。3.統(tǒng)計學(xué)分析：統(tǒng)計學(xué)軟件采用SPSS17.0。計量資料采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(x±s)；組間兩兩比較采用單因素方差分析,用LSD法(最小二乘法),*p0.05有統(tǒng)計學(xué)意義。[結(jié)果]第一部分：大鼠下腔靜脈狹窄法構(gòu)建瘀滯型DVT動物模型實(shí)驗(yàn)一、大鼠下腔靜脈狹窄法確定IVC殘余管腔橫截面積百分比1.三組大鼠死亡率分別為6.67%、6.67%、0%；成栓率分別為92.9%、92.9%、57.1%。2.三組大鼠血管外直徑測量值分別為2.84±0.38mm、2.90±0.28mm、2.86±0.29mm(*p0.05)；所對應(yīng)造模后殘余管腔橫截面積百分比分別為6.4%±1.6%、9.9%±1.7%、18.1%±3.9%。實(shí)驗(yàn)二、狹窄法造模后局部靜脈及血栓的組織學(xué)表現(xiàn)1.HE染色切片：正常組與假手術(shù)組均表現(xiàn)為整個血管內(nèi)膜表面完整,內(nèi)皮細(xì)胞排列整齊、大小均勻,管腔中無血栓形成；DVT模型組鏡下可見完全性血栓形成,部分與血管壁粘連,血栓內(nèi)主要成分為血小板梁、纖維素和紅細(xì)胞,同時可見明顯炎性細(xì)胞侵潤血管壁和血栓組織；DVT模型GSH干預(yù)組中成栓者鏡下可見完全性血栓形成,部分與血管壁粘連,血栓內(nèi)主要成分為血小板梁、纖維素和紅細(xì)胞,同時可見炎性細(xì)胞侵潤血管壁和血栓組織,而未成栓者見整個血管內(nèi)膜表面完整,內(nèi)皮細(xì)胞排列整齊、大小均勻,管腔中無血栓形成,但可見炎性細(xì)胞侵潤血管壁。2.大鼠成栓率：模型組和模型干預(yù)組均與正常組和假手術(shù)組有差異(*p0.05)；而模型干預(yù)組較模型組成栓率明顯下降(*p0.05)。3.大鼠血栓長度：除正常對照組與假手術(shù)組之間無統(tǒng)計學(xué)意義(*p0.05),其余兩兩之間均有統(tǒng)計學(xué)意義(*p0.05),其中DVT模型組的血栓長度最大,DVT模型干預(yù)組次之。4.大鼠血栓濕重：除正常對照組與假手術(shù)組之間無統(tǒng)計學(xué)意義(*p0.05),其余兩兩之間均有統(tǒng)計學(xué)意義(*p0.05),其中DVT模型干預(yù)組較DVT模型組升高。5.大鼠血栓濕重/長度比值：DVT模型干預(yù)組較模型組升高,有統(tǒng)計學(xué)意義(*p0.05)。第二部分：大鼠DVT模型靜脈組織中HIF-1α、VEGF和MDA的mRNA表達(dá)變化1.MDA的含量在DVT模型組和模型干預(yù)組中升高(*p0.05),其中DVT模型組最高,模型干預(yù)組次之,但二者之間無統(tǒng)計學(xué)意義(*p0.05)。2.HIF-1αmRNA在模型組中的表達(dá)均高于正常組和假手術(shù)組(*p0.05),而在模型干預(yù)組中的表達(dá)則低于模型組(*p0.05);VECF mRNA在模型組中的表達(dá)均高于正常組和假手術(shù)組(*p0.05),而在模型干預(yù)組中的表達(dá)則低于模型組(*p0.05)。[結(jié)論]1.下腔靜脈狹窄法可有效建立大鼠DVT模型。2.大鼠下腔靜脈DVT造模時,殘余管腔橫截面積百分比控制為9.9%±1.7%,成栓較為穩(wěn)定。3.還原型谷胱甘肽可能會降低深靜脈血栓形成的成栓率。4.HIF-1α、VEGF對DVT形成的影響可能與氧化應(yīng)激過程相關(guān)。
【關(guān)鍵詞】：氧化應(yīng)激 缺氧誘導(dǎo)因子1α 血管內(nèi)皮生長因子 深靜脈血栓
【學(xué)位授予單位】：昆明醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R543.6
【目錄】：

• 中文摘要5-9
• 英文摘要9-13
• 中英文縮略詞筒表13-15
• 前言15-19
• 第一部分 大鼠下腔靜脈狹窄法構(gòu)建瘀滯型DVT動物模型19-45
• 實(shí)驗(yàn)一 大鼠下腔靜脈狹窄法確定IVC殘余管腔橫截面積百分比19-26
• 材料與方法19-24
• 結(jié)果24-26
• 實(shí)驗(yàn)二 狹窄法造模后局部靜脈及血栓的組織學(xué)表現(xiàn)26-45
• 材料與方法26-32
• 結(jié)果32-38
• 討論38-44
• 結(jié)論44-45
• 第二部分 檢測MDA和HIF-α、VEGF mRNA在大鼠下腔靜脈中的含量及表達(dá)變化45-60
• 材料與方法45-52
• 結(jié)果52-56
• 討論56-59
• 結(jié)論59-60
• 參考文獻(xiàn)60-65
• 綜述165-71
• 參考文獻(xiàn)68-71
• 綜述271-79
• 參考文獻(xiàn)76-79
• 在讀期間基本情況79-80
• 致謝80

【參考文獻(xiàn)】

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1 李學(xué)娟，劉政;大鼠和小鼠腹主動脈穿刺采血法[J];上海實(shí)驗(yàn)動物科學(xué);1995年04期

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本文編號：701046