本文關(guān)鍵詞：miR-320a靶向調(diào)節(jié)MMP9抑制血管緊張素Ⅱ誘導(dǎo)的人主動脈血管平滑肌細(xì)胞功能及機(jī)制研究

  更多相關(guān)文章： miRNA 引物 PCR HAVSMC 腺病毒 miRNA HCS 高內(nèi)涵篩選 miR-320a Angiotensin Ⅱ transwell MMP-9 HAVSMC ERK

【摘要】：第一部分TAD差異miRNAs在人主動脈血管平滑肌細(xì)胞中的表達(dá)驗證目的：檢測芯片差異miRNAs在IAVSMC中的表達(dá)含量。方法：①從已知胸主動脈夾層與正常主動脈中膜芯片分析結(jié)果中挑選出差異表達(dá)的38個miRNAs;②設(shè)計38對miRNA引物；③人主動脈血管平滑肌細(xì)胞傳代培養(yǎng)；④提取總RNA,進(jìn)行RT-PCR檢測,分析結(jié)果。結(jié)果：38個miRNAs在HAVSMC中均有表達(dá),其中12個呈高表達(dá),8個呈中度表達(dá),18個呈低表達(dá)。結(jié)論：HAVSMC不同miRNA的表達(dá)水平存在差異。第二部分功能性miRNAs高內(nèi)涵篩選目的：篩選出對HAVSMC具有明確功能的miRNAs。方法：①慢病毒/腺病毒轉(zhuǎn)染HAVSMC預(yù)實驗,確定病毒載體；②從上述表達(dá)驗證的38個miRNAs中挑選出20個miRNA;③明確miRNA模擬表達(dá)趨勢(上調(diào)/下調(diào)),構(gòu)建相應(yīng)的腺病毒載體,轉(zhuǎn)染]HAVSMC。④基于Cellomics高通量篩選系統(tǒng),實時細(xì)胞計數(shù),檢測細(xì)胞增殖。結(jié)果：①腺病毒對HAVSMC更敏感；②各實驗組,連續(xù)5天,記錄細(xì)胞數(shù),細(xì)胞生長狀態(tài)良好,組間細(xì)胞增殖存在差異。結(jié)論：篩選出的14/20個miRNA對HAVSMC增殖功能有影響；HCS應(yīng)用于miRNA的批量篩選,準(zhǔn)確、穩(wěn)定、可信度高。miR-320a靶向調(diào)節(jié)MMP9抑制血管緊張素Ⅱ誘導(dǎo)的人主動脈血管平滑肌細(xì)胞增殖遷移功能目的：探討miR-320a對血管緊張素Ⅱ誘導(dǎo)的人主動脈血管平滑肌細(xì)胞(HAVSMC)增殖遷移功能的影響及潛在的機(jī)制。方法：建立HAVSMC培養(yǎng)體系,①RT-PCR檢測miR-320a mimics轉(zhuǎn)染人主動脈血管平滑肌細(xì)胞的效率；②CCK-8細(xì)胞增殖法,檢測血管緊張素Ⅱ?qū)θ酥鲃用}血管平滑肌細(xì)胞作用的時間、濃度曲線以及miR-320a對AngⅡ誘導(dǎo)的HAVSMC增殖作用的影響；③細(xì)胞劃痕、transwell驗證miR-320a對AngⅡ誘導(dǎo)的HAVSMC遷移功能的影響；④RT-PCR檢測miR-320a作用于HAVSMC后的MMP9的mRNA表達(dá)水平變化；⑤Western Blot檢測人主動脈血管平滑肌細(xì)胞MMP-9蛋白水平變化以及MAPK/ERK通路蛋白的表達(dá)變化。結(jié)果：AngⅡ顯著促進(jìn)人主動脈血管平滑肌細(xì)胞增殖；niR-320a過表達(dá)抑制AngⅡ誘導(dǎo)的人主動脈血管平滑肌細(xì)胞增殖及遷移功能；miR-320a過表達(dá)明顯降低MMP-9的mRNA及蛋白表達(dá)；miR-320a過表達(dá)明顯降低ERK1/2蛋白水平的表達(dá)。結(jié)論：miR-320a靶向調(diào)節(jié)MMP-9水平抑制血管緊張素Ⅱ誘導(dǎo)的人主動脈血管平滑肌細(xì)胞增殖遷移功能；MAPK/ERK通路可能參與上述過程。
【關(guān)鍵詞】：miRNA 引物 PCR HAVSMC 腺病毒 miRNA HCS 高內(nèi)涵篩選 miR-320a Angiotensin Ⅱ transwell MMP-9 HAVSMC ERK
【學(xué)位授予單位】：第二軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R543.1
【目錄】：

• 中文摘要5-7
• 英文摘要7-9
• 縮略詞表9-10
• 前言10-13
• 第一部分 TAD差異miRNAs在人主動脈血管平滑肌細(xì)胞中的表達(dá)驗證13-23
• 一、實驗材料13-15
• 二、實驗方法步驟15-18
• 三、結(jié)果18-21
• 四、討論21-23
• 第二部分 功能性miRNAs高內(nèi)涵篩選23-36
• 一、實驗材料23
• 二、實驗方法步驟23-26
• 三、結(jié)果26-34
• 四、討論34-36
• 第三部分 miR-320a靶向調(diào)節(jié)MMP9抑制血管緊張素Ⅱ誘導(dǎo)的人主動脈血管平滑肌細(xì)胞增殖遷移功能36-53
• 一、實驗材料36-41
• 二、實驗方法步驟41-46
• 三、結(jié)果46-51
• 四、討論51-53
• 全文總結(jié)及不足53-54
• 參考文獻(xiàn)54-57
• 綜述57-65
• 參考文獻(xiàn)62-65
• 就讀期間發(fā)表論文情況65-66
• 致謝66

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 周世權(quán);張艷煒;董秋實;程錦泉;;miRNA與心腦血管病研究進(jìn)展[J];中國公共衛(wèi)生;2014年03期

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本文編號：699115