本文關(guān)鍵詞：高血壓小鼠腎組織基因表達(dá)譜分析及阿利克侖的腎臟保護(hù)作用機(jī)制探討

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【摘要】：目的通過基因表達(dá)譜芯片篩選人血管緊張素原-腎素(Angiotensinogen-renin,AGT-REN)雙轉(zhuǎn)基因高血壓小鼠腎臟差異表達(dá)基因,并通過進(jìn)一步研究腎素抑制劑阿利克侖對AGT-REN雙轉(zhuǎn)基因高血壓小鼠腎臟AT1、Mas和轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子Ets1(E26transformation-specific-1,Ets1)、骨橋蛋白(Osteopontin,OPN)及NADPH氧化酶2(NADPH oxidase 2,NOX2)、NOX4、誘導(dǎo)型一氧化氮合酶(Inducible nitric oxide synthase,i NOS)的影響,探討阿利克侖對高血壓腎損傷發(fā)揮保護(hù)作用的作用機(jī)制。方法第一部分:1動(dòng)物分組:3只10月齡雄性AGT-REN雙轉(zhuǎn)基因高血壓小鼠為高血壓組(HT組),3只背景相同的野生型C57B6小鼠作為正常對照組(WT組)。2動(dòng)脈血壓監(jiān)測:采用無創(chuàng)尾套法測量各組小鼠平均動(dòng)脈壓(Mean artery pressure,MAP),觀察各組小鼠連續(xù)29d內(nèi)隔日血壓的變化。3用小鼠全基因組基因芯片篩選AGT-REN高血壓小鼠與WT小鼠相比腎臟的差異表達(dá)基因。4蛋白免疫印跡法(Western blot,WB)驗(yàn)證基因芯片結(jié)果。第二部分:1動(dòng)物分組及給藥方法:12只10月齡雄性AGT-REN雙轉(zhuǎn)基因高血壓小鼠隨機(jī)分為高血壓對照組(HT組)和阿利克侖治療組(HT+Aliskiren組),每組6只,另選擇背景相同的6只野生型C57B6雄性小鼠作為正常對照組(WT組)。通過腹腔注射給藥,以20mg/kg/d對HT+Aliskiren組小鼠給予阿利克侖處理28天,其余兩組給予等量生理鹽水作為對照,期間監(jiān)測血壓,28天后取材,檢測各項(xiàng)指標(biāo)。2用光鏡和電鏡觀察腎組織病理形態(tài)的變化。3 WB方法檢測腎組織Ets1、OPN和RAS組分AT1、Mas受體及氧化應(yīng)激指標(biāo)NOX2、NOX4、i NOS的表達(dá)。結(jié)果第一部分:1 AGT-REN雙轉(zhuǎn)基因高血壓小鼠血壓:與WT組小鼠比較,HT組小鼠MAP明顯升高。2芯片結(jié)果數(shù)據(jù)分析:(1)差異表達(dá)基因的篩選:用小鼠全基因組基因芯片從33696個(gè)基因中發(fā)現(xiàn)HT組小鼠與WT組小鼠相比腎臟的差異表達(dá)基因36個(gè)。其中在三組中均上調(diào)的基因有Ets1、OPN等20個(gè),均下調(diào)的基因有Bcat1等16個(gè)。(2)基因芯片的生物學(xué)功能:分子功能分析中上調(diào)的基因有16個(gè),下調(diào)的基因有9個(gè);生物學(xué)途徑分析中上調(diào)的基因14個(gè),下調(diào)的基因7個(gè);細(xì)胞組件分析中上調(diào)的基因14個(gè),下調(diào)的基因7個(gè)。(3)基因芯片的通路分析:KEGG通路分析中發(fā)現(xiàn)差異表達(dá)基因主要參與了花生四烯酸代謝、脂肪酸代謝、腎細(xì)胞癌等生物過程。5基因芯片結(jié)果驗(yàn)證:Western blot結(jié)果顯示Ets1、OPN表達(dá)水平明顯升高,與基因芯片表達(dá)結(jié)果一致。第二部分:1血壓:與WT組小鼠相比,HT組小鼠MAP明顯升高;給予阿利克侖治療后,HT+Aliskiren組小鼠MAP較HT組明顯下降。2腎組織病理形態(tài)學(xué)結(jié)果:光鏡下觀察腎組織HE染色,WT組腎小球系膜基質(zhì)無增生,間質(zhì)無炎細(xì)胞浸潤,腎小管結(jié)構(gòu)正常,未見蛋白管型;HT組可見腎小球皺縮硬化,大部分毛細(xì)血管管壁增厚,可見玻璃樣變,腎小管萎縮脫落,并可見蛋白管型,腎間質(zhì)可見炎細(xì)胞浸潤;HT+Aliskiren組上述病變明顯改善。電鏡下,WT組小鼠腎小球結(jié)構(gòu)完整,結(jié)構(gòu)清晰,腎小管上皮細(xì)胞線粒體豐富,排列整齊;HT組小鼠腎小球基底膜增厚,足突融合或消失,腎小管上皮細(xì)胞線粒體水腫、空泡變性,排列紊亂,間質(zhì)可見大量膠原纖維形成;HT+Aliskiren組小鼠腎臟上述病變較HT組顯著減輕。3 WB結(jié)果:與WT組比較,HT組小鼠腎臟轉(zhuǎn)錄因子Ets1、OPN及AT1受體表達(dá)明顯升高,Mas受體表達(dá)明顯降低,NOX2、NOX4、i NOS表達(dá)升高;HT+Aliskiren組較HT組,下調(diào)了Ets1、OPN及AT1受體及NOX2、NOX4、i NOS的表達(dá),上調(diào)了Mas受體。結(jié)論1腎素-血管緊張素系統(tǒng)的激活可誘導(dǎo)多基因表達(dá),參與高血壓腎損傷的發(fā)生發(fā)展。2 AngⅡ-Ets1-OPN通路及AngⅡ-NADPH氧化酶信號途徑參與高血壓及高血壓腎病的發(fā)生發(fā)展。3阿利克侖通過抑制Ets1、OPN的表達(dá)和氧化應(yīng)激對高血壓腎損傷起保護(hù)作用。
【關(guān)鍵詞】：高血壓腎損害 基因芯片 骨橋蛋白 腎素血管緊張素系統(tǒng) 氧化應(yīng)激
【學(xué)位授予單位】：華北理工大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R544.1
【目錄】：

• 摘要4-6
• ABSTRACT6-10
• 英文縮略表10-11
• 引言11-13
• 第1章 AGT-REN雙轉(zhuǎn)基因高血壓小鼠腎臟基因芯片表達(dá)譜的變化和數(shù)據(jù)分析13-36
• 1.1 材料與方法13-19
• 1.1.1 實(shí)驗(yàn)材料13-15
• 1.1.2 實(shí)驗(yàn)方法15-18
• 1.1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析18-19
• 1.2 結(jié)果19-30
• 1.2.1 血壓測定結(jié)果19
• 1.2.2 總RNA的提取和質(zhì)量鑒定19-20
• 1.2.3 基因芯片的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)控制20
• 1.2.4 樣品雜交芯片掃描圖20-21
• 1.2.5 芯片結(jié)果數(shù)據(jù)分析21-29
• 1.2.6 基因芯片結(jié)果驗(yàn)證29-30
• 1.3 討論30-32
• 1.4 小結(jié)32
• 參考文獻(xiàn)32-36
• 第2章 阿利克侖對高血壓及高血壓腎損傷作用機(jī)制研究36-46
• 2.1 材料與方法36-38
• 2.1.1 實(shí)驗(yàn)材料36
• 2.1.2 實(shí)驗(yàn)方法36-38
• 2.2 結(jié)果38-41
• 2.2.1 血壓測定結(jié)果38
• 2.2.2 各組小鼠腎組織形態(tài)學(xué)改變38-39
• 2.2.3 腎組織AT1、Mas受體及Ets1、OPN表達(dá)情況39-40
• 2.2.4 腎組織NOX2、NOX4和iNOS的表達(dá)40-41
• 2.3 討論41-44
• 2.3.1 Ets1、OPN與高血壓42
• 2.3.2 氧化應(yīng)激和高血壓及高血壓腎損害42-43
• 2.3.3 骨橋蛋白和氧化應(yīng)激43-44
• 2.4 小結(jié)44
• 參考文獻(xiàn)44-46
• 第3章 綜述 骨橋蛋白在高血壓及其靶器官損害中的研究進(jìn)展46-61
• 3.1 骨橋蛋白的結(jié)構(gòu)和功能46-48
• 3.1.1 骨橋蛋白的基因結(jié)構(gòu)與調(diào)控46
• 3.1.2 骨橋蛋白的分子結(jié)構(gòu)和分布46-47
• 3.1.3 骨橋蛋白的不同亞型47-48
• 3.2 骨橋蛋白的生物學(xué)功能48-50
• 3.2.1 骨橋蛋白的生物礦化作用48-49
• 3.2.2 骨橋蛋白與炎癥反應(yīng)49-50
• 3.3 骨橋蛋白與高血壓及高血壓靶器官損害50-53
• 3.3.1 骨橋蛋白與高血壓50-51
• 3.3.2 骨橋蛋白與高血壓動(dòng)脈粥樣硬化51
• 3.3.3 骨橋蛋白和高血壓心臟病51-52
• 3.3.4 骨橋蛋白與高血壓腎病52-53
• 3.3.5 骨橋蛋白與高血壓腦血管病53
• 3.4 結(jié)語與展望53-54
• 參考文獻(xiàn)54-61
• 結(jié)論61-62
• 致謝62-63
• 導(dǎo)師簡介63-64
• 作者簡介64-65
• 學(xué)位論文數(shù)據(jù)集65

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 李從圣;孟令毅;徐俊;程立順;楊靜;程元光;吳偉;;原發(fā)性高血壓患者動(dòng)脈血管組織E26轉(zhuǎn)錄因子1及單核細(xì)胞趨化蛋白1的表達(dá)和臨床意義[J];中華高血壓雜志;2013年09期

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本文編號：678809