本文關(guān)鍵詞：血管緊張素Ⅱ在血管內(nèi)皮細胞自噬中作用及其機制

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【摘要】：目的:探究血管緊張素II(Angiotensin II,Ang II)在人臍靜脈內(nèi)皮細胞(Human umbilical vascular endothelial cell,HUVEC)自噬中的作用及其機制。方法:以HUVEC為研究對象,以不同濃度的Ang II及不同時間刺激HUVEC,MTT檢測所給濃度的Ang II作用24 h時的細胞活力;分別用Ang II的I型受體拮抗劑(ARB)、NADPH氧化酶抑制劑(Apocynin)、線粒體ATP敏感性鉀通道抑制劑(5-HD)、一氧化氮合酶(NOS)抑制劑(L-NAME)、自噬抑制劑(3-MA)及其促進劑(Rapamycin)預(yù)處理細胞,再加入Ang II刺激細胞,用western blot方法檢測自噬相關(guān)蛋白LC3、Beclin-1(BECN 1)、P62表達量的變化,用免疫熒光的方法檢測自噬小體數(shù)目變化;通過轉(zhuǎn)染敲除自噬基因ATG-5后,用western blot方法檢測上述自噬相關(guān)蛋白表達量的變化,免疫熒光檢測自噬小體數(shù)目變化;用NO試劑盒檢測NO含量變化,Western blot檢測NOS表達量變化。結(jié)果:細胞接受所給濃度的Ang II刺激24 h時其活力無顯著變化;不同濃度的Ang II以及在其作用于不同時間均可促進HUVEC的LC3-II/LC3-I、BECN表達量增多,P62表達量降低,表明Ang II可導(dǎo)致HUVEC自噬;ARB、NADPH氧化酶抑制劑以及線粒體ATP敏感性鉀通道抑制劑5-HD均可減弱Ang II所致細胞上述自噬相關(guān)蛋白水平變化,表明Ang II引起的HUVEC自噬可通過ATI受體、NADPH氧化酶作用及線粒體ATP敏感性鉀通道介導(dǎo);Ang II對細胞作用24 h后NO、p-NOS水平下降,細胞自噬水平明顯增高,L-NAME作用于細胞后的效應(yīng)類似于Ang II的作用,表明Ang II可能通過NOS活性下降引起HUVEC自噬增強;3-MA和Rapamycin分別對Ang II所致的自噬水平起到抑制和加強作用。Ang II引起人臍靜脈內(nèi)皮細胞自噬,其機制可能是由AT1介導(dǎo)的NADPH氧化酶、線粒體ATP敏感性鉀通道激活及NOS活性下降所致。
【關(guān)鍵詞】：血管緊張素II 血管內(nèi)皮細胞 線粒體ATP敏感性鉀通道 NADPH氧化酶 一氧化氮合酶 自噬
【學(xué)位授予單位】：蘇州大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R54
【目錄】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-10
• 引言10-13
• 實驗材料與方法13-24
• 一 實驗材料13-15
• （一）實驗細胞13
• （二）主要試劑13-14
• （三）主要儀器14-15
• 二 實驗方法15-24
• （一）人臍靜脈內(nèi)皮細胞培養(yǎng)15
• （二）細胞不同處理方式15-17
• （三）MTT測定細胞活性17
• （四）Western blot17-20
• （五）免疫熒光20-21
• （六）NO含量測定21-23
• （七）統(tǒng)計學(xué)分析23-24
• 實驗結(jié)果24-37
• 一、血管緊張素II刺激 24 h對血管內(nèi)皮細胞生存率（活力）的影響24
• 二、不同濃度的血管緊張素Ⅱ?qū)ρ軆?nèi)皮細胞自噬的影響24-25
• 三、血管緊張素Ⅱ作用不同時間點對血管內(nèi)皮細胞自噬的影響25-26
• 四、ARB在血管緊張素Ⅱ誘導(dǎo)血管內(nèi)皮細胞自噬中的作用26-27
• 五、NADPH氧化酶在血管緊張素Ⅱ誘導(dǎo)血管內(nèi)皮細胞自噬中的作用27-28
• 六、線粒體ATP敏感性鉀通道在血管緊張素Ⅱ誘導(dǎo)血管內(nèi)皮細胞自噬中的作用28-29
• 七、一氧化氮合酶在血管緊張素Ⅱ誘導(dǎo)血管內(nèi)皮細胞自噬中的作用29-31
• 八、沉默自噬基因?qū)ρ芫o張素Ⅱ誘導(dǎo)血管內(nèi)皮細胞自噬的影響31-32
• 九、自噬抑制劑 3-MA對血管緊張素Ⅱ誘導(dǎo)血管內(nèi)皮細胞自噬的影響32-33
• 十、自噬促進劑雷帕霉素對血管緊張素Ⅱ誘導(dǎo)血管內(nèi)皮細胞自噬的影響33-34
• 十一、自噬小體免疫熒光結(jié)果34-37
• 討論37-39
• 結(jié)論和展望39-40
• 參考文獻40-45
• 綜述45-57
• 參考文獻51-57
• 縮略詞表57-59
• 攻讀學(xué)位期間公開發(fā)表的論文59-60
• 致謝60-61

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本文編號：657605