本文關(guān)鍵詞：葡激酶改造：定點(diǎn)突變與聚乙二醇修飾聯(lián)合應(yīng)用及初步功能驗(yàn)證

  更多相關(guān)文章： 蛋白質(zhì)改造 聚乙二醇修飾 定點(diǎn)突變 活性驗(yàn)證

【摘要】：目的:通過對(duì)葡激酶蛋白(SAK,S)基因序列進(jìn)行定點(diǎn)突變,然后在多種條件下對(duì)突變蛋白進(jìn)行聚乙二醇修飾,篩選出最優(yōu)修飾條件。并通過分子篩分離得到較高純度修飾蛋白,并對(duì)其生物活性進(jìn)行初步驗(yàn)證。方法:根據(jù)S蛋白晶體結(jié)構(gòu)及抗原位點(diǎn)選擇突變位點(diǎn),設(shè)計(jì)突變引物,將S蛋白上選定的氨基酸突變?yōu)榘腚装彼?將突變質(zhì)粒通過化學(xué)轉(zhuǎn)化進(jìn)BL21(DE3)感受態(tài),并利用經(jīng)典原核表達(dá)技術(shù),在大腸桿菌中表達(dá)突變蛋白S-cys;利用離子親和層析、離子交換層析、分子篩等方法分離純化目的蛋白;對(duì)目的蛋白在不同條件下進(jìn)行聚乙二醇修飾,觀察并評(píng)價(jià)修飾溫度、修飾時(shí)間、蛋白質(zhì):修飾劑摩爾比等因素對(duì)修飾率的影響;二次分離,將修飾蛋白與未成功修飾蛋白分離開來,得到較高純度的修飾蛋白peg-S-cys,并通過纖維蛋白平板溶圈實(shí)驗(yàn)和動(dòng)物栓塞模型的構(gòu)建初步對(duì)其生物活性進(jìn)行驗(yàn)證。結(jié)果:(1)成功將選定氨基酸突變?yōu)榘腚装彼帷?2)原核表達(dá)、純化后得到了純度較高的S-cys蛋白。(3)在多種條件下對(duì)S-cys蛋白進(jìn)行修飾,根據(jù)修飾后SDS-PAGE結(jié)果得到最佳修飾條件。(4)應(yīng)用分子篩分離純化,成功獲得純度較高的peg-S-cys蛋白。(5)初步驗(yàn)證peg-S-cys具有溶栓活性。結(jié)論:通過對(duì)蛋白質(zhì)基因序列的定點(diǎn)突變,成功實(shí)現(xiàn)了蛋白質(zhì)的聚乙二醇定點(diǎn)修飾,在體外和體內(nèi)初步驗(yàn)證其活性,為蛋白質(zhì)改造提供了一種新的方法與思路。
【關(guān)鍵詞】：蛋白質(zhì)改造 聚乙二醇修飾 定點(diǎn)突變 活性驗(yàn)證
【學(xué)位授予單位】：重慶醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R541.4
【目錄】：

• 英漢縮略語名詞對(duì)照4-5
• 中文摘要5-7
• 英文摘要7-9
• 前言9-11
• 1 材料與方法11-18
• 2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果18-25
• 3 討論25-28
• 全文總結(jié)28-29
• 參考文獻(xiàn)29-31
• 文獻(xiàn)綜述31-35
• 參考文獻(xiàn)34-35
• 致謝35-36
• 攻讀學(xué)位期間發(fā)表的論文、參加的學(xué)術(shù)會(huì)議及參與的科研項(xiàng)目36

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前1條

1 楊可;楊震;汪德強(qiáng);雷寒;周建中;;重組葡激酶的表達(dá)純化及纖溶活性鑒定[J];重慶醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào);2012年03期

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本文編號(hào)：653665