本文關(guān)鍵詞：PD-1對(duì)小鼠體內(nèi)免疫反應(yīng)的調(diào)節(jié)在動(dòng)脈粥樣硬化形成中的作用

  更多相關(guān)文章： PD-1 動(dòng)脈粥樣硬化 T細(xì)胞 粥樣斑塊 炎癥

【摘要】：目的:目前,動(dòng)脈粥樣硬化在我國(guó)的患病率和發(fā)病率呈顯著上升趨勢(shì),并已成為我國(guó)老年人的主要病死原因之一。最近的研究表明,炎癥及免疫反應(yīng)在動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)生發(fā)展中起著重要作用。免疫細(xì)胞,特別是炎性細(xì)胞的浸潤(rùn)、激活及增殖在易損性動(dòng)脈粥樣硬化斑塊的形成和進(jìn)展中發(fā)揮著極為重要的作用。細(xì)胞程序性死亡受體1(PD-1)是近年來(lái)新發(fā)現(xiàn)的一種介導(dǎo)免疫抑制信號(hào)的共刺激分子受體,在激活的T細(xì)胞、B細(xì)胞和一些髓樣細(xì)胞上表達(dá)。近年來(lái),人們發(fā)現(xiàn)PD-1/PD-Ls路徑與急慢性炎癥、腫瘤、免疫耐受、自身免疫性疾病等密切相關(guān)。因?yàn)閯?dòng)脈粥樣硬化的發(fā)生發(fā)展與免疫及炎癥反應(yīng)有著密切的聯(lián)系,所以PD-1及其通路可能對(duì)動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)生發(fā)展發(fā)揮了重要調(diào)控作用。因此本研究旨在利用PD-1和Apo E雙基因缺陷小鼠,來(lái)研究PD-1信號(hào)通路在動(dòng)脈粥樣硬化發(fā)展中的作用。方法:將PD-1-/-小鼠和Apo E-/-小鼠進(jìn)行交配,獲得PD-1-/-Apo E-/-雙基因敲除小鼠。以同齡野生型PD-1+/+Apo E-/-小鼠作為對(duì)照組,分別測(cè)定6周時(shí)小鼠體重、血清三酰甘油、總膽固醇和高密度脂蛋白膽固醇的基線水平。兩組小鼠在高脂喂養(yǎng)12周后,再次檢測(cè)其體重、血清三酰甘油、總膽固醇和高密度脂蛋白膽固醇的水平。小鼠麻醉后,打開胸腔,用注射器穿刺左心室,用冷磷酸鹽緩沖液(PBS)沖洗左心腔和主動(dòng)脈腔內(nèi)的殘余血液。自升主動(dòng)脈處分離心臟與主動(dòng)脈,并切除心臟下半部分,心臟上半部分用冷PBS沖洗殘血后,包埋于OCT。鈍性分離自主動(dòng)脈弓至腹主動(dòng)脈分叉處的主動(dòng)脈節(jié)段,用冷PBS沖洗殘血后,取標(biāo)本進(jìn)行分析。用油紅染色法觀察標(biāo)本動(dòng)脈粥樣硬化情況。同時(shí),利用免疫組化方法分析斑塊內(nèi)CD3+T細(xì)胞、CD4+T細(xì)胞、CD8+T細(xì)胞、巨噬細(xì)胞和平滑肌細(xì)胞數(shù)量或比例變化。利用流式細(xì)胞儀檢測(cè)脾細(xì)胞總數(shù)、CD4+T細(xì)胞、CD8+T細(xì)胞及細(xì)胞表面CD26L、CD25的表達(dá)水平。利用細(xì)胞純化柱純化CD4+和CD8+T細(xì)胞用CFSE標(biāo)記,從正常小鼠分離樹突狀細(xì)胞和巨噬細(xì)胞,經(jīng)LDL處理后,按不同比例與CD4+和CD8+T細(xì)胞混合,經(jīng)FACS檢測(cè)確定CD4+和CD8+T細(xì)胞的增殖情況。將純化后的CD4+和CD8+T細(xì)胞經(jīng)抗CD3抗體激活,用酶聯(lián)免疫吸附法檢測(cè)上清中IL-2、IFN-γ、TNF-α的含量。同時(shí),用酶聯(lián)免疫吸附法檢測(cè)高脂喂養(yǎng)12周后小鼠空腹血清中IL-2、IFN-γ、TNF-α的水平。結(jié)果:6周基線和高脂喂養(yǎng)12周末,實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組小鼠的體重、血清三酰甘油、總膽固醇和高密度脂蛋白膽固醇水平均無(wú)顯著性差異;高脂喂養(yǎng)12周后,PD-1-/-Apo E-/-小鼠主動(dòng)脈弓和降主動(dòng)脈內(nèi)膜內(nèi)動(dòng)脈粥樣硬化斑塊較對(duì)照組顯著增多,管腔嚴(yán)重狹窄,主動(dòng)脈根部切片顯示動(dòng)脈粥樣硬化斑塊面積是對(duì)照組的約2倍[(0.51±0.08)mm2 vs(0.29±0.06)mm2,P0.001]。免疫組織化學(xué)分析顯示,12周高脂喂養(yǎng)后,實(shí)驗(yàn)組斑塊內(nèi)CD3+T淋巴細(xì)胞含量為(154.88±36.64)個(gè)/mm2,較對(duì)照組的(59.38±25.28)個(gè)/mm2顯著增多,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=2.14,P0.01)。進(jìn)一步分析斑塊內(nèi)細(xì)胞的組成顯示,PD-1-/-Apo E-/-實(shí)驗(yàn)組斑塊內(nèi)CD4+T淋巴細(xì)胞的數(shù)量是對(duì)照組的約3倍,CD8+T淋巴細(xì)胞也較對(duì)照組明顯增加。巨噬細(xì)胞的數(shù)量在PD-1-/-Apo E-/-實(shí)驗(yàn)組斑塊中也有增多,但平滑肌細(xì)胞的數(shù)量則在兩組中無(wú)顯著性差異。實(shí)驗(yàn)組脾臟中細(xì)胞總數(shù)、CD4+、CD8+T細(xì)胞的數(shù)量顯著增多,其中CD3+CD62L-、CD3+CD25+細(xì)胞的表達(dá)也顯著增高。而且,實(shí)驗(yàn)組T細(xì)胞經(jīng)CD3抗體激活后分泌IL-2、IFN-γ、TNF-α能力顯著增強(qiáng)。當(dāng)T細(xì)胞與巨噬細(xì)胞或樹突狀細(xì)胞共孵后,其增殖能力較對(duì)照組更強(qiáng)。12周高脂喂養(yǎng)后,實(shí)驗(yàn)組小鼠血清中TNF-α的水平較對(duì)照組顯著增高,而IL-2、IFN-γ的濃度無(wú)顯著差異。結(jié)論:本研究通過觀察PD-1-/-ApoE-/-雙基因敲除小鼠動(dòng)脈粥樣硬化的加速進(jìn)展、斑塊內(nèi)細(xì)胞成分的變化以及T細(xì)胞功能的改變,提示了在激活的T細(xì)胞中PD-1/PD-Ls信號(hào)通路下調(diào)參與了動(dòng)脈粥樣硬化過程中T淋巴細(xì)胞的浸潤(rùn),限制了動(dòng)脈粥樣硬化的形成。
【關(guān)鍵詞】：PD-1 動(dòng)脈粥樣硬化 T細(xì)胞 粥樣斑塊 炎癥
【學(xué)位授予單位】：天津醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R543.5
【目錄】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-11
• 縮略語(yǔ)/符號(hào)說(shuō)明11-12
• 前言12-15
• 研究現(xiàn)狀、成果12-14
• 研究目的、方法14-15
• 1 對(duì)象和方法15-22
• 1.1 實(shí)驗(yàn)對(duì)象和材料15-16
• 1.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物15
• 1.1.2 實(shí)驗(yàn)材料15
• 1.1.3 實(shí)驗(yàn)儀器15-16
• 1.2 研究方法16-21
• 1.2.1 動(dòng)物模型的建立與鑒定16-17
• 1.2.2 動(dòng)物的飼養(yǎng)及分組17
• 1.2.3 血脂水平檢測(cè)17
• 1.2.4 實(shí)驗(yàn)標(biāo)本收集17
• 1.2.5 動(dòng)脈粥樣硬化斑塊面積的測(cè)量17-18
• 1.2.6 動(dòng)脈粥樣硬化斑塊的免疫組化染色18
• 1.2.7 脾臟中淋巴細(xì)胞準(zhǔn)備幾流式細(xì)胞儀檢測(cè)18-19
• 1.2.8 T淋巴細(xì)胞體外增殖實(shí)驗(yàn)19
• 1.2.9 T淋巴細(xì)胞內(nèi)細(xì)胞因子檢測(cè)19-20
• 1.2.10 血清中細(xì)胞因子的檢測(cè)20-21
• 1.3 技術(shù)路線21-22
• 2 結(jié)果22-30
• 2.1 動(dòng)物模型的鑒定22-23
• 2.2 體重和血清膽固醇水平23
• 2.3 動(dòng)脈粥樣硬化斑塊的進(jìn)展23-25
• 2.4 動(dòng)脈粥樣硬化斑塊中的細(xì)胞形態(tài)學(xué)表現(xiàn)25-27
• 2.5 T淋巴細(xì)胞體內(nèi)激活27
• 2.6 T淋巴細(xì)胞的增殖和分泌27-30
• 2.7 血清中細(xì)胞因子的變化30
• 3 討論30-36
• 結(jié)論36-37
• 參考文獻(xiàn)37-40
• 發(fā)表論文和參加科研情況說(shuō)明40-41
• 綜述 PD-1及其配體與動(dòng)脈粥樣硬化關(guān)系研究進(jìn)展41-56
• 綜述參考文獻(xiàn)49-56
• 致謝56

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1 譚澤輝，郭靜萱，劉艷云，，孫尊;血粘度及其有關(guān)因素對(duì)高脂喂養(yǎng)家兔動(dòng)脈粥樣硬化形成的影響[J];北京醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào);1995年02期

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6 王園園;龍民慧;朱賀;王e

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