本文關(guān)鍵詞：小鼠骨髓來源的祖細(xì)胞亞群分化能力及心梗修復(fù)能力的比較研究

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【摘要】：目的:研究小鼠骨髓來源的Sca-1~+/CD31~+亞群與Sca-1~+/CD31~-亞群在向心肌細(xì)胞和血管內(nèi)皮細(xì)胞的分化能力及其心梗修復(fù)能力的差異。方法:從小鼠骨髓中分離出具有多向分化潛能的骨髓單個核細(xì)胞(Bone Mononuclear Cells,BMNCs),進(jìn)一步通過流式細(xì)胞術(shù)分選出Sca-1~+/CD31~+亞群與Sca-1~+/CD31~-亞群。在添加血管內(nèi)皮細(xì)胞生長因子(VEGF),成纖維細(xì)胞生長因子(h FGF-B),表皮細(xì)胞生長因子(EGF),胰島素生長因子(R3-IGF-1)和抗壞血酸(Ascorbic acid)的5%FBS/EBM-2中培養(yǎng)14天,進(jìn)而通過免疫熒光染色和RT-PCR檢測內(nèi)皮細(xì)胞標(biāo)志物v WF,VE-cadherin和CD31的表達(dá)。以此來比較骨髓來源的不同祖細(xì)胞亞群向血管內(nèi)皮細(xì)胞定向分化能力的差異。在添加Wnt通路拮抗劑DKK-1,二甲基亞砜(DMSO),骨形態(tài)發(fā)生蛋白(BMP-2),成纖維細(xì)胞生長因子(FGF-4和FGF-8),以及5-氮胞苷(第一至第三天)的基礎(chǔ)培養(yǎng)基中培養(yǎng)14天,進(jìn)而通過免疫熒光染色和RT-PCR檢測心肌細(xì)胞標(biāo)志物Nkx2.5,c TnT和GATA-4等的表達(dá)。從而比較小鼠骨髓來源的不同祖細(xì)胞亞群向心肌定向分化能力的差異。氣管插管開胸行小鼠冠狀動脈前降支(LAD)結(jié)扎,建立小鼠心肌梗死的模型。將Sca-1~+/CD31~+亞群、Sca-1~+/CD31~-亞群和單個核細(xì)胞(MNCs)注射入梗死心肌周圍,7天和28天后分別檢測心臟超聲并于28天取心臟組織,檢測細(xì)胞存活、血管再生和心肌纖維化程度。結(jié)果:免疫熒光染色和RT-PCR的結(jié)果表明,在血管內(nèi)皮細(xì)胞誘導(dǎo)培養(yǎng)基中,Sca-1~+/CD31~+亞群更易于分化成血管內(nèi)皮細(xì)胞,而Sca-1~+/CD31~-亞群增殖緩慢,內(nèi)皮細(xì)胞的標(biāo)志物表達(dá)很低;在心肌細(xì)胞誘導(dǎo)培養(yǎng)基中,Sca-1~+/CD31~-亞群更易于分化成心肌細(xì)胞,c Tn T的陽性表達(dá)率高于Sca-1~+/CD31~+亞群和MNCs。體內(nèi)注射骨髓來源的祖細(xì)胞亞群,心臟彩超提示:7天和28天時(shí)Sca-1~+/CD31~+亞群對心功能的改善顯著優(yōu)于Sca-1~+/CD31~-亞群和MNCs。而且28天時(shí)Sca-1~+/CD31~+亞群在心梗周邊區(qū)域存活數(shù)目多,顯著提高了心梗周邊區(qū)域的毛細(xì)血管密度,顯著降低了心梗后心肌的纖維化程度。結(jié)論:骨髓來源的Sca-1~+/CD31~+亞群在體外更易于分化成血管內(nèi)皮細(xì)胞,在體內(nèi)對心梗后心功能的改善顯著優(yōu)于Sca-1~+/CD31~-亞群和MNCs。
【關(guān)鍵詞】：骨髓來源的祖細(xì)胞亞群 內(nèi)皮細(xì)胞 心肌細(xì)胞 分化
【學(xué)位授予單位】：蘇州大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R542.22
【目錄】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-9
• 前言9-11
• 材料和方法11-19
• 1、材料與儀器11-12
• 2、實(shí)驗(yàn)方法12-18
• 3、統(tǒng)計(jì)學(xué)方法18-19
• 結(jié)果19-28
• （一）小鼠骨髓來源的祖細(xì)胞的分離及流式鑒定19
• （二）內(nèi)皮細(xì)胞誘導(dǎo)分化實(shí)驗(yàn)19-22
• （三）心肌細(xì)胞誘導(dǎo)分化實(shí)驗(yàn)22-24
• （四）體內(nèi)實(shí)驗(yàn)24-28
• 討論28-33
• 結(jié)論33-34
• 參考文獻(xiàn)34-37
• 綜述37-46
• 參考文獻(xiàn)43-46
• 中英文對照縮略詞表46-47
• 致謝47-48

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5 孫燕,王R，

本文編號：608599