本文關(guān)鍵詞：2-甲氧基雌二醇通過GPER受體信號通路抑制人肺動脈平滑肌細胞增殖

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【摘要】：目的:低氧、特殊藥物、異常的血流動力學(xué)狀態(tài)等因素均可以刺激肺動脈平滑肌細胞,使其表現(xiàn)出過度增殖的特性,進而引起肺血管重塑以及肺動脈高壓(pulmonary hypertension,PH)。雌激素代謝產(chǎn)物2-甲氧基雌二醇(2-Methoxyestradiol,2ME)可以通過抑制肺血管炎癥及血管重塑,從而對肺動脈高壓產(chǎn)生保護性作用,然而其具體分子生物學(xué)機制尚不清楚。G蛋白偶聯(lián)雌激素受體(G protein-coupled estrogen receptor,GPER)是近年來發(fā)現(xiàn)的一種雌激素膜型受體,可以介導(dǎo)雌激素在心血管系統(tǒng)疾病中的保護性作用,然而該受體在肺循環(huán)中的表達及意義不清楚。新近研究發(fā)現(xiàn),2ME是GPER受體的一種高親和力激動劑。本研究以人肺動脈平滑肌細(human pulmonary artery smooth muscle cell,hPASMC)胞為研究對象,探討2ME對低氧條件下肺動脈平滑肌細胞增殖活性的影響及其與GPER受體信號通路之間的關(guān)系。方法:1體外培養(yǎng)人肺動脈平滑肌細胞:將購置的人肺動脈平滑肌細胞進行傳代培養(yǎng),取第5-8代處于對數(shù)生長期的傳代細胞作為實驗細胞,隨機分為:A.常氧組、B.低氧組、C.低氧+2ME干預(yù)組、D.低氧+2ME+G15干預(yù)組。常氧組培養(yǎng)于37℃,充有5%CO_2和95%空氣的培養(yǎng)箱內(nèi);各低氧組均培養(yǎng)于37℃,充有3%O_2、5%CO_2和92%N_2的三氣培養(yǎng)箱內(nèi);2ME干預(yù)組培養(yǎng)基中2ME濃度為0.2μM;G15干預(yù)組培養(yǎng)基中加入GPER受體拮抗劑G15濃度為0.01μM,均孵育48h。2通過MTT試驗比較各組實驗細胞給予干預(yù)后48h細胞生長情況。3通過RT-PCR技術(shù)檢測各實驗組細胞中增質(zhì)細胞核抗原(Proliferating Cell Nuclear Antigen,PCNA)及GPER受體mRNA轉(zhuǎn)錄水平。4通過Western blot技術(shù)檢測各實驗組細胞中PCNA和GPER受體蛋白表達水平。結(jié)果:1成功獲得hPASMC傳代培養(yǎng)細胞。2實驗細胞條件干預(yù)48h后,MTT實驗結(jié)果提示低氧組OD值高于其他各組;常氧組與低氧+2ME+G15組之間OD值無統(tǒng)計學(xué)差異;低氧+2ME組OD值最低。3實驗細胞條件干預(yù)48h后,RT-PCR結(jié)果顯示低氧組和低氧+2ME+G15組PCNA基因mRNA轉(zhuǎn)錄水平無統(tǒng)計學(xué)差異,但較其他兩組顯著升高;低氧+2ME組與常氧組間PCNA轉(zhuǎn)錄水平無統(tǒng)計學(xué)差異。常氧組GPER基因mRNA轉(zhuǎn)錄水平顯著高于其他各組,低氧+2ME組和低氧+2ME+G15組GPER轉(zhuǎn)錄水平無統(tǒng)計學(xué)差異,但均高于低氧組。4實驗細胞條件干預(yù)48h后,Western blot結(jié)果顯示常氧組細胞PCNA蛋白水平顯著低于其他三組;低氧組和低氧+2ME+G15組PCNA蛋白水平無統(tǒng)計學(xué)差異;低氧+2ME組PCNA蛋白水平顯著高于常氧組,但低于其他兩個低氧處理組。常氧組GPER受體蛋白表達水平高于其他各組;低氧組和低氧+2ME組GPER受體蛋白表達水平無統(tǒng)計學(xué)差異,但均高于低氧+2ME+G15組。結(jié)論:1低氧刺激可以誘導(dǎo)hPASMC增殖活性增加。2 2ME可以抑制低氧環(huán)境下hPASMC的增殖活性。3 2ME對低氧環(huán)境下hPASMC增殖能力的抑制作用可能是通過活化GPER受體信號實現(xiàn)的。
【關(guān)鍵詞】：2-甲氧基雌二醇 GPER 人肺動脈平滑肌細胞 細胞增殖 肺動脈高壓
【學(xué)位授予單位】：河北醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R544.1
【目錄】：

• 中文摘要4-6
• 英文摘要6-9
• 英文縮寫9-10
• 前言10-11
• 材料與方法11-16
• 結(jié)果16-17
• 附圖17-21
• 附表21-23
• 討論23-25
• 結(jié)論25-26
• 參考文獻26-30
• 綜述 G蛋白偶聯(lián)雌激素受體信號通路與肺臟疾病的相關(guān)性30-48
• 參考文獻38-48
• 致謝48-49
• 個人簡歷49

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1 金鑫;左學(xué)志;田，

本文編號：605191