本文關(guān)鍵詞：活化的心臟成纖維細胞TRPC通道的表達及意義

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【摘要】：目的:本實驗主要通過試劑誘導(dǎo)心肌纖維化,觀察心臟纖維細胞活化前后TRPC通道各亞型的表達[1],了解TRPC在纖維化的級聯(lián)瀑布中的作用及相關(guān)亞型表達程度,為人類心肌纖維化相關(guān)疾病的預(yù)防和治療尋找新的靶點和開辟新視野。方法:將10只SD大鼠隨機分為2組,每組5只,即刺激干預(yù)組(A組)和空白對照組(B組),針對A組實驗組大鼠一次性腹腔注射異丙腎上腺素(劑量:5mg/kg.d)[2];B組空白對照組大鼠以一次性腹腔注射生理鹽水(劑量:5mg/kg.d),連續(xù)注射14d,取兩組大鼠心尖部心肌[3],1、取A、B組大鼠心肌少許,每一只大鼠做2個病理切片,分別做HE染色和Masson染色,電子顯微鏡下觀察心肌組織中纖維化程度及膠原纖維的分布,對比實驗組與空白對照組心肌組織的變化[4]。2、取實驗組大鼠的心尖部心肌組織,分離、純化、培養(yǎng)纖維細胞,取的同源性心肌纖維細胞[5]。3、分為M組與N組,M組為空白對照,N組給予TGFβ1試劑刺激,刺激完后給予提取M、N兩組大鼠膠原纖維的m RNA,分離出目的基因,針對目的基因轉(zhuǎn)錄,給予行PCR檢測,給予行Western Blot,了解目的基因的蛋白翻譯情況[6]。結(jié)果:1、實驗對象A、B組大鼠心尖部組織,通過HE染色及Masson染色,均提示A、B組大鼠心肌纖維化程度出現(xiàn)明顯差異(有圖片做對照),A組明顯高于B組,統(tǒng)計學分析指出:A組與B組大鼠心肌纖維化程度有明顯差異(P0.01)[7];2、通過反復(fù)重復(fù)性試驗(5次),應(yīng)用相應(yīng)引物,觀測TRPC1-7各亞型m RNA表達在A、B兩組的差異,繪制柱形圖,應(yīng)用統(tǒng)計學分析示[8]:TRPC1在A、B組無明顯差異(P0.05)、TRPC2為假基因、TRPC3存在明顯差異(P0.05)、TRPC4無明顯差異(P0.05)、TRPC5無明顯差異(P0.05)、TRPC6存在明顯差異(P0.05)、TRPC7無明顯差異(P0.05),綜上所述,纖維化模型處理之后,在纖維化的膠原纖維TRPC3、TRPC6的m RNA的表達出現(xiàn)明顯差異[9];3、應(yīng)用Western Blot技術(shù)進一步驗證PCR的結(jié)果,分析得出TRPC3和TRPC6 m RNA的翻譯具有相關(guān)性,差異性明顯(P0.05),與RT-PCR結(jié)果一致[10]。結(jié)論:心肌纖維母細胞經(jīng)刺激后活化為肌成纖維細胞,由于纖維化級聯(lián)瀑布放大反應(yīng)的存在,纖維化程度大且面積廣,在纖維化進程中,TRPC通道相關(guān)亞型在轉(zhuǎn)錄水平及翻譯水平出現(xiàn)高表達,尤其以TRPC3、TRPC6最為顯著[11],分析得出心肌纖維化及TRPC通道的表達具備相關(guān)性,具有統(tǒng)計學意義,可作為干預(yù)心肌纖維化的新靶點,控制纖維化的級聯(lián)反應(yīng)的進程,為抗纖維化藥物的研發(fā)提供理論依據(jù)[12]。
【關(guān)鍵詞】：TRPC通道 活化的心臟成纖維細胞 鈣離子通透通道 細胞外基質(zhì)蛋白(ECM)
【學位授予單位】：皖南醫(yī)學院
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R54
【目錄】：

• 中英文縮略詞對照表5-7
• 摘要7-9
• ABSTRACT9-11
• 前言11-15
• 研究材料與方法15-31
• 1 實驗材料15-19
• 1.1 實驗動物15
• 1.2 實驗試劑15-16
• 1.3 實驗主要儀器16-18
• 1.4 實驗試劑配制18-19
• 2 實驗方法19-28
• 2.1 建立心肌纖維化模型19
• 2.2 標本的留取與處理19-20
• 2.3 HE染色步驟20-21
• 2.4 膠原纖維快速染色步驟（試劑盒染色法）21-23
• 2.5 心肌纖維細胞的培養(yǎng)23-24
• 2.6 RNA的提取24
• 2.7 逆轉(zhuǎn)錄（RT）反應(yīng)步驟24-25
• 2.8 實時定量qPCR反應(yīng)25-26
• 2.9 蛋白電泳26-28
• 3 統(tǒng)計學分析28-29
• 4 技術(shù)路線圖29-31
• 結(jié)果31-35
• 討論35-40
• 結(jié)論40-41
• 參考文獻41-47
• 綜述 心臟成纖維細胞TRPC通道的研究進展47-58
• 參考文獻55-58
• 附錄58-59
• 作者簡介及讀研期間主要科研成果59-60
• 致謝60

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 陳慧勤;林默君;劉曉如;;慢性低氧對大鼠左右心室的功能及TRPC亞家族表達的影響[J];中國應(yīng)用生理學雜志;2014年03期

2 劉嬋;商黔惠;石耿輝;趙宇;祝之明;;瞬時受體電位通道C亞族和炎癥在高鹽飲食致左心室纖維化中的作用[J];中國病理生理雜志;2013年12期

3 薛婉婉;洪華山;林曉紅;林軍華;方美琴;;自發(fā)性高血壓大鼠左室心肌壁內(nèi)小動脈平滑肌瞬時受體電位通道的表達[J];中國臨床藥理學與治療學;2013年08期

4 劉小菁;李君麗;陳曉瑩;吳文超;李良;;力學敏感TRPC通道介導(dǎo)心肌細胞肥大的力學門控新機制初探[J];醫(yī)用生物力學;2013年S1期

5 林勇;黃衛(wèi)斌;張蓉芳;曾松;劉泰i，

本文編號：594350