本文關(guān)鍵詞：探討TRPV1受體對M2型巨噬細(xì)胞功能的調(diào)控作用及吳茱萸堿的干預(yù)作用

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【摘要】：背景:近年來的研究證實(shí),在高血壓、冠心病等心血管疾病發(fā)生與發(fā)展的不同階段,炎癥是一個主要的、共同的病理生理學(xué)特征。心血管疾病往往是一種以血管內(nèi)皮細(xì)胞損傷、單核/巨噬細(xì)胞浸潤為特征的慢性炎癥反應(yīng)性疾病。因此控制炎癥可能是當(dāng)今治療這些疾病的有前途的方法之一。目前研究表明,瞬時受體電位香草醛亞型1受體(transient receptor potential vanilloid type1 channel,TRPV1)能夠抑制炎癥,在炎癥狀態(tài)下對機(jī)體有保護(hù)作用。中藥吳茱萸作為治療心血管疾病的常用中藥已有一定歷史,多方面的研究結(jié)果提示其有效成分吳茱萸(Evodiamine,EVO)可能為TRPV1受體激動劑。因此,進(jìn)一步揭示TRV1受體在炎癥中的作用,探討TRPV1受體對M2型巨噬細(xì)胞功能的調(diào)控作用及吳茱萸堿的干預(yù)作用,對心血管疾病等慢性炎癥反應(yīng)性疾病的治療具有重要的臨床意義。目的:本實(shí)驗(yàn)在人單核細(xì)胞白血病細(xì)胞(humanmonocyticleukemiacellline,THP-1)培養(yǎng)模型上,利用白介素-4(interleukin-4,IL-4)誘導(dǎo)THP-1分化為M2型巨噬細(xì)胞,通過觀察TRPV1受體對M2型巨噬細(xì)胞表型相關(guān)指標(biāo)的影響,以及吳茱萸堿對該過程的影響作用,從而闡明TRPV1受體對M2型巨噬細(xì)胞功能的調(diào)控作用及吳茱萸堿的干預(yù)作用,為進(jìn)一步揭示TRPV1受體及吳茱萸堿的抗炎作用奠定基礎(chǔ)。方法:1.實(shí)驗(yàn)分組及干預(yù):將對數(shù)生長期的THP-1以3×105個/孔密度鋪細(xì)胞于6孔板,以2mlRPMI1640+10%FBS培養(yǎng)基培養(yǎng)。待細(xì)胞長至80%以上開始進(jìn)行分組加藥刺激,具體分組如下:1)Vehicle組:加入vehicle使其終濃度為1/20002)IL-4組:加入IL-4使其終濃度為10ng/ml3)CAP+IL-4組:分別加入Capsaicin和IL-4使其終濃度分別10umol/L和10ng/ml4)CAPZ+CAP+IL-4組:分別加入Capsazepin、Capsaicin和IL-4使其終濃度分別為10umol/L、10umol/L和10ng/ml5)EVO+IL-4組:分別加入EVO和IL-4使其終濃度分別為10umol/L和10ng/ml6)capz+evo+il-4組:分別加入capsazepin、evo和il-4使其終濃度分別為10umol/l、10umol/l和10ng/ml各組細(xì)胞在37℃5%c02條件下培養(yǎng)12h。培養(yǎng)處理后,取上清液及細(xì)胞成分,進(jìn)行相關(guān)指標(biāo)測定。2.觀察指標(biāo)1)酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(elisa)檢測tgf-β1的產(chǎn)生2)rt-pcr檢測細(xì)胞目的基因arginase-1、mannosereceptormrna的表達(dá)3)westernblot檢測arginase-1、mannosereceptor蛋白的表達(dá)結(jié)果:1.酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(elisa)檢測tgf-β1的產(chǎn)生與vehicle組相比,經(jīng)il-4誘導(dǎo)的m2型巨噬細(xì)胞,其細(xì)胞因子tgf-β1的產(chǎn)生明顯增加(p0.05),利用cap特異性激活trpv1受體后能明顯降低tgf-β1的產(chǎn)生(p0.05),且該作用可被trpv1受體拮抗劑capz部分拮抗(p0.05)。2.rt-pcr檢測細(xì)胞目的基因arginase-1、mannosereceptormrna的表達(dá)與vehicle組相比,經(jīng)il-4誘導(dǎo)的m2型巨噬細(xì)胞,其表面特定標(biāo)志分子arginase-1、mannosereceptormrna的表達(dá)明顯增加(p0.05),利用cap特異性激活trpv1受體后能明顯降低arginase-1、mannosereceptormrna的表達(dá)水平(p0.05),且該抑制作用可被trpv1受體拮抗劑capz所拮抗(p0.05)。3.westernblot檢測arginase-1、mannosereceptor蛋白的表達(dá)與vehicle組相比,經(jīng)il-4誘導(dǎo)的m2型巨噬細(xì)胞,其表面特定標(biāo)志分子arginase-1、mannosereceptor蛋白的表達(dá)明顯增加(p0.05),利用cap特異性激活trpv1受體后能明顯降低arginase-1、mannosereceptor蛋白的表達(dá)水平(p0.05),且該抑制作用可被trpv1受體拮抗劑capz所拮抗(p0.05)。4.通過吳茱萸堿干預(yù)后可明顯降低il-4所誘導(dǎo)的m2型巨噬細(xì)胞的功能,其主要表現(xiàn)為tgf-β1產(chǎn)生下降、arginase-1、mannosereceptormrna和蛋白表達(dá)水平下降(p0.05),并且該抑制作用可被trpv1受體拮抗劑capz所拮抗(p0.05)。1.在THP-1細(xì)胞培養(yǎng)模型上,激活TRPV1受體后能明顯降低IL-4誘導(dǎo)的M2型巨噬細(xì)胞表型相關(guān)指標(biāo)的表達(dá),且該作用可被TRPV1受體拮抗劑所阻斷,提示TRPV1受體可調(diào)控M2型巨噬細(xì)胞的功能。2.在THP-1細(xì)胞培養(yǎng)模型上,吳茱萸堿能明顯降低IL-4誘導(dǎo)的M2型巨噬細(xì)胞表型相關(guān)指標(biāo)的表達(dá),且該作用可被TRPV1受體拮抗劑所阻斷,提示吳茱萸堿可能通過激活TRPV1受體調(diào)控M2型巨噬細(xì)胞的功能。
【關(guān)鍵詞】：瞬時受體電位香草醛亞型1(TRPV1) M2型巨噬細(xì)胞 吳茱萸堿(EVO) 炎癥
【學(xué)位授予單位】：河南中醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R54
【目錄】：

• 中文摘要7-10
• Abstract10-13
• 前言13-16
• 材料與方法16-26
• 1. 實(shí)驗(yàn)材料16-19
• 1.1 細(xì)胞16
• 1.2 試劑與耗材16-17
• 1.3 實(shí)驗(yàn)儀器17-18
• 1.4 試劑配制18-19
• 2. 實(shí)驗(yàn)方法19-25
• 2.1 細(xì)胞株復(fù)蘇、傳代、凍存19-20
• 2.2 實(shí)驗(yàn)分組及干預(yù)20
• 2.3 指標(biāo)測定20-25
• 3. 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理25-26
• 結(jié)果26-33
• 1. 酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）檢測TGF-β1的產(chǎn)生26-27
• 2. RT-PCR檢測細(xì)胞目的基因Arginase-1、MannoseReceptormRNA的表達(dá)27-29
• 3. Westernblot檢測Arginase-1、MannoseReceptor蛋白的表達(dá)29-33
• 討論33-38
• 1. 巨噬細(xì)胞的異質(zhì)性及其表型特點(diǎn)33-34
• 2. 巨噬細(xì)胞的異質(zhì)性與炎癥性疾病的相關(guān)性34
• 3. TRPV1的分子結(jié)構(gòu)及生物學(xué)特性34-35
• 4. TRPV1在炎癥中的作用35-36
• 5. 中醫(yī)藥對炎癥的認(rèn)識36
• 6. 本實(shí)驗(yàn)的研究討論36-38
• 結(jié)論38-39
• 致謝39-40
• 參考文獻(xiàn)40-45
• 附錄45-52
• 附錄1 文獻(xiàn)綜述45-52
• 參考文獻(xiàn)49-52
• 附錄2 在校期間科研情況和論文著作52

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本文編號：590724