本文關(guān)鍵詞：云南傣族原發(fā)性高血壓易感基因的初步研究

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【摘要】：原發(fā)性高血壓是一種嚴(yán)重危害人類健康的心血管系統(tǒng)疾病。近35年來高血壓在云南傣族中的患病率顯著上升,探索云南傣族中原發(fā)性高血壓的易感基因以及等位基因之間的相互作用,有助于揭示傣族原發(fā)性高血壓的發(fā)病機(jī)制、進(jìn)一步闡明環(huán)境選擇因素、遺傳因素和疾病三者的相互作用和關(guān)系。由于原發(fā)性高血壓高度的遺傳異質(zhì)性,原發(fā)性高血壓的關(guān)聯(lián)基因在不同群體中會(huì)有所不同。其他人群中已報(bào)道的候選基因在傣族群體中與高血壓的關(guān)系還不清楚。對(duì)這些基因進(jìn)行研究有助于我們找出傣族原發(fā)性高血壓的相關(guān)致病基因,揭示發(fā)病機(jī)制。鈉離子作為重要的環(huán)境因素與高血壓的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)。根據(jù)對(duì)傣族飲食習(xí)慣的了解,對(duì)傣族的鈉離子敏感候選基因進(jìn)行研究,是探索傣族近35年來高血壓患病率明顯增高的分子機(jī)制的切入點(diǎn)。原發(fā)性高血壓是多基因遺傳疾病,其遺傳機(jī)制依賴于多個(gè)微效基因的共同作用,基因間存在的上位效應(yīng)將對(duì)高血壓發(fā)病產(chǎn)生影響,但目前此類研究還較少。分析兩個(gè)候選基因的上位效應(yīng)可以為高血壓易感基因研究提供更多的線索。根據(jù)高血壓調(diào)節(jié)的生物學(xué)過程,本研究選擇腎素-血管緊張素-醛固酮系統(tǒng)中的基因及與該代謝途徑相關(guān)的基因進(jìn)行關(guān)聯(lián)分析及基因位點(diǎn)的上位效應(yīng)分析。本研究首先對(duì)運(yùn)用DNA池焦磷酸測序法初步篩選候選位點(diǎn)進(jìn)行方法學(xué)研究,然后基于DNA池焦磷酸測序法初步篩選的候選位點(diǎn),選取云南傣族425例正常對(duì)照樣本及412例原發(fā)性高血壓患者樣本,采用SNaPshot單堿基延伸測序法、Taqman探針法、PCR-長度多態(tài)法和基因測序這幾種基因分型方法對(duì)ADD1、ACE和CYP11B2三個(gè)基因的7個(gè)熱點(diǎn)多態(tài)性位點(diǎn)(ADD1_rs4963、ADD1_rs4961、 ADD1_rs12503220、ACE_rs4291、ACE_rs4343、ACE_I/D、CYP11B2_rs1799998)進(jìn)行逐一個(gè)體基因分型,再進(jìn)一步研究ACE和ADD1這兩個(gè)候選基因與高血壓的關(guān)系及多態(tài)性位點(diǎn)之間可能存在的上位效應(yīng)作用。利用已知頻率位點(diǎn)建立優(yōu)化DNA池焦磷酸測序法并進(jìn)行高通量基因分型,對(duì)所得結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析和關(guān)聯(lián)分析,結(jié)果顯示,DNA池焦磷酸測序法可初步測定群體中高頻率及非復(fù)雜性的SNPs等位基因頻率,與SNaPshot法逐一分型所得頻率誤差在0.9%-2.3%之間,DNA池焦磷酸測序法對(duì)等位基因頻率估計(jì)較為準(zhǔn)確。在傣族群體中,我們所選擇的7個(gè)高血壓候選位點(diǎn)經(jīng)過χ2檢驗(yàn)并進(jìn)行Bonferroni統(tǒng)計(jì)學(xué)校正后,沒有發(fā)現(xiàn)傣族高血壓關(guān)聯(lián)位點(diǎn)。進(jìn)行上位效應(yīng)分析結(jié)果顯示,單個(gè)位點(diǎn)多態(tài)性與高血壓相關(guān)性不明顯,但將功能相關(guān)基因進(jìn)行上位效應(yīng)分析后,與高血壓相關(guān)性顯著增強(qiáng)。ACE基因缺失(D)與ADD1基因的G等位基因聯(lián)合出現(xiàn)時(shí),高血壓患病風(fēng)險(xiǎn)顯著增加(p=0.0014,OR=1.567,95%CI:1.189-2.067);ACE基因缺失(D)與CYP11B2基因的T等位基因聯(lián)合出現(xiàn)時(shí),高血壓風(fēng)險(xiǎn)顯著增加(p=1.58E-08,OR=2.320,95%CI:1.728-3.116)。即在顯性-顯性模式下ACE-D/ADD1-G和ACE-D/CYP11B2-T上位效應(yīng)均為傣族原發(fā)性高血壓風(fēng)險(xiǎn)因素。Logist回歸分析的研究結(jié)果顯示年齡、BMI、總膽固醇、飲酒等因素也與高血壓發(fā)病相關(guān)聯(lián)。排除這些影響因素作用后,本研究中的上位效應(yīng)仍與高血壓關(guān)聯(lián)顯著。綜上,本研究首先進(jìn)行了方法學(xué)方面的研究,結(jié)果顯示,DNA池焦磷酸測序法適用于中頻和高頻的非復(fù)雜性SNPs關(guān)聯(lián)分析,運(yùn)用該方法篩選候選基因,可快速得到混合樣本等位基因頻率；本研究的7個(gè)候選位點(diǎn)：ADD1_rs4963、ADD1_rs4961、 ADD1_rs12503220、ACE_rs4291、ACE_rs4343、ACE_I/D、CYP11B2_rs1799998與傣族原發(fā)性高血壓沒有顯著關(guān)聯(lián)性,但ACE-D與ADD1-G及ACE-D與CYP11B2-T間存在上位效應(yīng),并且二者的上位效應(yīng)均與傣族原發(fā)性高血壓有顯著關(guān)聯(lián)性；另外,環(huán)境因素如BMI,總膽固醇,飲酒等也與傣族原發(fā)性高血壓有顯著關(guān)聯(lián)性。本研究顯示,高血壓關(guān)聯(lián)基因有群體差異,不同人群地區(qū)高血壓發(fā)病機(jī)制有所不同。在易感基因研究時(shí),由于微效基因的特性,對(duì)基因上位分析是一個(gè)較好的高血壓分析策略。對(duì)更多的傣族原發(fā)性高血壓易感基因進(jìn)行研究以及綜合考慮飲食等環(huán)境因素與遺傳相互作用將為其發(fā)病機(jī)制研究提供更多線索。
【關(guān)鍵詞】：高血壓 易感基因 傣族 上位效應(yīng) 焦磷酸測序
【學(xué)位授予單位】：北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R544.11
【目錄】：

• 摘要4-6
• 英文摘要6-8
• 前言8-11
• 一. 實(shí)驗(yàn)材料11-15
• 1. 實(shí)驗(yàn)對(duì)象11-12
• 2. 主要試劑及耗材12-14
• 3. 主要儀器設(shè)備14-15
• 二. 研究方法15-27
• 1. 外周血的DNA的提取與定量15-16
• 2. DNA池焦磷酸測序(DNA pooling-PSQ)16-18
• 3. 候選SNPs等位基因頻率檢測18-26
• 4. 上位效應(yīng)分析26
• 5. 數(shù)據(jù)分析26-27
• 三、研究結(jié)果27-43
• 1. DNA pooling-PSQ與逐一分型頻率比較27-29
• 2. 利用DNA池焦磷酸測序法篩選傣族原發(fā)性高血壓候選基因29-31
• 3. 候選SNPs真實(shí)等位基因頻率檢測31-39
• 4. 上位效應(yīng)39-43
• 四、討論43-50
• 1. 候選基因篩選的策略43-45
• 2. 候選基因ACE、ADD1的關(guān)聯(lián)分析45-47
• 3.上位效應(yīng)分析47-50
• 五、本文總結(jié)與展望50-51
• 小結(jié)50
• 展望50-51
• 參考文獻(xiàn)51-56
• 附錄 縮略語表56-57
• 致謝57-58
• 研究生簡歷58-59

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前3條

1 劉英;;醛固酮在心血管疾病中的作用[J];河北醫(yī)藥;2007年07期

2 牛文全;王建炳;李素潔;周文郁;趙景波;邱長春;;北方漢族人群醛固酮合成酶基因多態(tài)性與高血壓的關(guān)系[J];中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院學(xué)報(bào);2007年03期

3 孫浩;楊昭慶;劉舒媛;于亮;林克勤;黃鎧;褚嘉yP;黃小琴;;中國傣族及蒙古族群體中3個(gè)GWAS陽性轉(zhuǎn)錄因子基因與高血壓的相關(guān)性的驗(yàn)證研究[J];中國優(yōu)生與遺傳雜志;2014年03期

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本文編號(hào)：556962