本文關(guān)鍵詞：HSP22對ox-LDL誘導的內(nèi)皮細胞損傷及相關(guān)的保護機制研究

  更多相關(guān)文章： HSP22 HUVECs ox-LDL PPARγ eNOS

【摘要】：目的:觀察HSP22與PPARγ激動劑在氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)對人臍靜脈內(nèi)皮細胞(HUVECs)功能和單核細胞的粘附中的影響,并研究其可能機制。方法:(1)用不同濃度的ox-LDL處理HUVECs 24h,用免疫印記技術(shù)(Western blot)分別檢測HUVECs e NOS、ICAM1、HSP22、PPARγ蛋白表達情況,觀察劑量效應。(2)用HSP22shRNA干擾組、HSP22質(zhì)粒過表達組、HSP22空載組轉(zhuǎn)染HUVECs 48h,再加入80ug/mL ox-LDL處理24h,檢測指標同前(1),同時用熒光顯微鏡和酶標儀檢測單核細胞的粘附情況。(3)PBS空白組、不同濃度(0μM/L,1μM/L,10μM/L,30μM/L)PPARγ激動劑比格列酮預處理HUVECs12h,再加入80ug/mL ox-LDL處理24h,Western blot檢測HSP22蛋白,了解HSP22與PPARγ的可能關(guān)系。(4)用HSP22質(zhì)粒過表達轉(zhuǎn)染兩組HUVECs 48h,分別用PPARγ抑制劑T0070907 10nM/L、PBS預處理12h,再加入80ug/m L ox-LDL處理24h,用Western blot分別檢測HUVECs eNOS、ICAM1蛋白表達情況,用熒光顯微鏡和酶標儀檢測單核細胞的粘附情況。結(jié)果:1、ox-LDL合適的干預濃度:隨著ox-LDL處理濃度的增加,eNOS蛋白表達顯著下降(P0.05)、HSP22、PPARγ蛋白表達升高(P0.05)、ICAM1表達明顯升高(P0.05)。2、HSP22蛋白對內(nèi)皮功能及單核細胞粘附的影響:在相同干預條件下,HSP22蛋白過表達組ICAM1蛋白明顯低于空載組與HSP22shRNA組(P0.05),eNOS蛋白明顯高于其他兩組(P0.05),對單核細胞的粘附明顯低于其他兩組(P0.05),各組PPARγ蛋白及mRNA無明顯變化。3、HUVEC中HSP22與PPARγ的關(guān)系:隨著PPARγ激動劑比格列酮處理濃度的增加,ICAM1表達下降(P0.05),eNOS表達升高(P0.05),HSP22表達下降(P0.05)。4、HSP22對ox-LDL處理的HUVEC的內(nèi)皮功能及對單核細胞粘附影響的可能機制:在相同干預條件下,HSP22過表達+PPARγ抑制劑組的炎癥因子ICAM1蛋白較HSP22過表達組增加,對單核細胞的粘附增加,無統(tǒng)計學意義(P0.05)。eNOS蛋白無明顯變化。結(jié)論:1、ox-LDL損傷HUVECs并可誘導HSP22、PPARγ、ICAM1表達增加,降低eNOS表達。2、HSP22可抑制在ox-LDL誘導環(huán)境下HUVEC炎癥因子ICAM1產(chǎn)生和對單核細胞的粘附并促進eNOS表達,改善內(nèi)皮功能,對PPARγ表達未見明顯影響。3、PPARγ激動劑比格列酮可抑制ox-LDL誘導環(huán)境下HUVEC炎癥因子ICAM1產(chǎn)生并促進eNOS表達,對HSP22的表達未見明顯影響。4、HSP22對ox-LDL誘導的內(nèi)皮細胞功能損傷的所起的保護作用可能與PPARγ的抗炎通路關(guān)系不大。
【關(guān)鍵詞】：HSP22 HUVECs ox-LDL PPARγ eNOS
【學位授予單位】：南昌大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R54
【目錄】：

• 摘要3-5
• ABSTRACT5-9
• 中英文縮略詞表9-11
• 第1章 引言11-14
• 第2章 材料與方法14-27
• 2.1 主要實驗材料和試劑14-16
• 2.1.1 實驗細胞株14
• 2.1.2 主要儀器設備14-15
• 2.1.3 主要試劑15-16
• 2.1.4 試劑配制16
• 2.2 實驗方法16-26
• 2.2.1 培養(yǎng)人臍靜脈內(nèi)皮細胞與人外周血單核細胞系16-17
• 2.2.2 ox-LDL及PPARγ 抑制劑、激動劑分別與HUVECs孵育17
• 2.2.3 質(zhì)粒DNA提取17-19
• 2.2.4 DNA的產(chǎn)量與質(zhì)量檢測：19
• 2.2.5 轉(zhuǎn)染19
• 2.2.6 分組培養(yǎng)19
• 2.2.7 Western blot操作步驟19-23
• 2.2.8 熒光定量RT-PCR檢測mRNA表達23-25
• 2.2.9 單核細胞粘附實驗25-26
• 2.3 數(shù)據(jù)處理26-27
• 第3章 結(jié)果27-37
• 3.1 不同濃度ox-LDL對HUVEC中ICAM1、eNOS、HSP22及PPARγ 蛋白表達的影響27-28
• 3.2 HSP22對內(nèi)皮功能與其激活及對單核細胞的粘附的影響28-33
• 3.2.1 HSP22質(zhì)粒轉(zhuǎn)染后的效率及HSP22表達28-30
• 3.2.2 HSP22對HUVEC中PPARγmRNA的影響30-31
• 3.2.3 HSP22對ox-LDL誘導的內(nèi)皮功能及其激活的影響31-32
• 3.2.4 HSP22的表達對ox-LDL誘導內(nèi)皮對單核細胞粘附的影響32-33
• 3.3 PPARγ 激動劑比格列酮對HSP22表達的影響33-34
• 3.4 HSP22蛋白對ox-LDL處理的HUVEC細胞內(nèi)皮功能與激活及其對單核細胞粘附影響的可能機制34-37
• 3.4.1 HSP22蛋白對ox-LDL處理的HUVEC細胞ICAM1和eNOS表達影響的機制34-36
• 3.4.2 HSP22的表達對ox-LDL誘導的HUVEC對THP1細胞粘附的影響36-37
• 第4章 討論37-41
• 4.1 HSP22在ox-LDL誘導環(huán)境下的表達37-38
• 4.2 HSP22與ICAM1、eNOS38-39
• 4.3 PPARγ 與ICAM1、eNOS39-40
• 4.4 HSP22與PPARγ40-41
• 第5章 結(jié)論與展望41-42
• 5.1 結(jié)論41
• 5.2 不足之處41-42
• 致謝42-43
• 參考文獻43-47
• 綜述 Sirt1與動脈粥樣硬化的研究進展47-56
• 參考文獻54-56

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