本文關(guān)鍵詞：一個(gè)新的MPL基因異常剪接體MPLL391-V392ins12的鑒定及在骨髓增殖性腫瘤中的突變分析，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的:以不同方法對(duì)新發(fā)現(xiàn)的MPLL391-V392ins12異常剪接體進(jìn)行鑒定,以證實(shí)其真實(shí)存在性;在骨髓增殖性腫瘤(MPN)患者中分析其突變發(fā)生情況,并與JAK2V617F、MPLexon10、CALR突變的患者比較來探討其臨床意義。方法:1、MPLL391-V392ins12剪接體的鑒定對(duì)目的RNA進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR),擴(kuò)增MPL基因CDS序列,凝膠回收擴(kuò)增產(chǎn)物,酶切后連接到T-載體中,轉(zhuǎn)化DH5a感受態(tài)細(xì)胞,涂板,挑取菌落,堿性裂解法提取質(zhì)粒,測(cè)序鑒定。針對(duì)剪接體的序列在不同位置設(shè)計(jì)引物進(jìn)行PCR擴(kuò)增,兩對(duì)引物的擴(kuò)增產(chǎn)物分別經(jīng)聚丙烯酰胺凝膠和瓊脂糖凝膠電泳,用凝膠成像儀對(duì)電泳結(jié)果進(jìn)行掃描分析。2、MPLL391-V392ins12剪接體在MPN中突變情況分析收集MPN患者、正常人、其他血液腫瘤的骨髓或外周血標(biāo)本,以及實(shí)體瘤細(xì)胞株,提取基因組總RNA,將總RNA逆轉(zhuǎn)錄為c DNA;對(duì)c DNA進(jìn)行等位基因特異性聚合酶鏈反應(yīng)(AS-PCR)擴(kuò)增,經(jīng)瓊脂糖凝膠電泳進(jìn)行結(jié)果分析,檢測(cè)其在PV、ET、PMF中的突變情況。收集僅攜帶單一突變MPLL391-V392ins12、JAK2V617F、MPLexon10、CALR陽性的ET、PMF患者的實(shí)驗(yàn)室檢查指標(biāo),分別兩兩進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)比較分析。結(jié)果:1、通過克隆測(cè)序,發(fā)現(xiàn)MPL基因存在一種新的轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物,即MPL基因的第7和8外顯子之間保留了36bp的內(nèi)含子序列,導(dǎo)致蛋白編碼序列氨基酸位點(diǎn)391與392之間插入12個(gè)氨基酸(谷、甘、亮、賴、亮、亮、脯、丙、天冬、異亮、脯、纈),故命名為MPLL391-V392ins12。根據(jù)MPLL391-V392ins12剪接體的序列設(shè)計(jì)不同引物進(jìn)行PCR擴(kuò)增,結(jié)果均得到該剪接體產(chǎn)物,說明了MPLL391-V392ins12的真實(shí)存在性。2、248例MPN患者中檢測(cè)到19例存在MPLL391-V392ins12突變(總突變率7.66%),其中PV 1例,突變率1.92%(1/52);ET 14例,突變率9.66%(14/145);PMF 4例,突變率7.84%(4/51);200例正常人群中未檢測(cè)到突變;71例CML患者中檢測(cè)到2例為陽性,其余腫瘤中均未檢測(cè)到該剪接體。3、MPLL391-V392ins1突變和MPLexon10突變的ET患者性別、年齡、白細(xì)胞計(jì)數(shù)、血小板計(jì)數(shù)及血紅蛋白差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P值均0.05);MPLL391-V392ins12突變的ET患者年齡、白細(xì)胞計(jì)數(shù)低于JAK2V617F突變患者(P0.05),血小板計(jì)數(shù)低于CALR突變患者(P0.05);MPLexon10突變的ET患者年齡、白細(xì)胞計(jì)數(shù)及血紅蛋白低于JAK2V617F突變患者(P0.05),血紅蛋白低于CALR突變患者(P0.05);JAK2V617F突變的ET患者白細(xì)胞計(jì)數(shù)、血紅蛋白高于CALR突變患者(P0.05)。MPLL391-V392ins12突變的PMF患者年齡小于JAK2V617F突變患者(P0.05);JAK2V617F突變的PMF患者白細(xì)胞計(jì)數(shù)高于CALR突變患者(P0.05)。結(jié)論:1、本研究發(fā)現(xiàn)了MPL基因一個(gè)新的異常剪接體MPLL391-V392ins12,經(jīng)查閱文獻(xiàn),目前尚無報(bào)道。病例篩查進(jìn)一步證實(shí)MPLL391-V392ins12剪接體在三種經(jīng)典MPN中均可發(fā)生突變,且主要見于ET、PMF,可能是MPN發(fā)病的潛在原因之一。2、ET患者中,MPLL391-V392ins12突變組呈現(xiàn)與JAK2V617F突變組和CALR突變組較為不同的實(shí)驗(yàn)室特征,而與MPL exon10突變組則較為相似,提示MPLL391-V392ins12突變?cè)贛PN的發(fā)病過程中可能發(fā)揮與MPLexon10突變類似的作用。
【關(guān)鍵詞】：骨髓增殖性腫瘤 MPL基因 異常剪接 MPLL391-V392ins12
【學(xué)位授予單位】：山西醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R551.3
【目錄】：

• 中文摘要5-7
• 英文摘要7-10
• 常用縮寫詞中英文對(duì)照表10-11
• 前言11-13
• 1 研究對(duì)象與方法13-22
• 1.1 研究對(duì)象13
• 1.2 主要試劑13-14
• 1.3 主要儀器14
• 1.4 主要試劑配制14-15
• 1.5 實(shí)驗(yàn)方法和步驟15-20
• 1.6 收集病例20-21
• 1.7 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理21-22
• 2 結(jié)果22-26
• 2.1 MPLL391-V392ins12 剪接體的鑒定22-23
• 2.2 MPLL391-V392ins12 剪接體與MPN的關(guān)系23-26
• 3 討論26-29
• 4 結(jié)論29-30
• 參考文獻(xiàn)30-34
• 綜述34-48
• 參考文獻(xiàn)42-48
• 致謝48-49
• 在學(xué)期間承擔(dān)/參與的科研課題與研究成果49-50
• 個(gè)人簡(jiǎn)介50

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2 許先國(guó);吳俊杰;洪小珍;朱發(fā)明;嚴(yán)力行;;鑒定9個(gè)新的RHD基因mRNA可變剪接體[J];遺傳;2006年10期

3 王學(xué)銘;;第一個(gè)mRNA剪接中間產(chǎn)物[J];國(guó)外醫(yī)學(xué)(分子生物學(xué)分冊(cè));1985年03期

4 張靜;王文亮;晏偉;郭雙平;張志培;李擒龍;王麗;嚴(yán)曉昱;;細(xì)胞凋亡相關(guān)新基因Apr-3轉(zhuǎn)錄剪接體的克隆、測(cè)序及亞細(xì)胞定位[J];臨床與實(shí)驗(yàn)病理學(xué)雜志;2006年03期

5 沈宇清;夏梅;繆鳳琴;謝維;張建瓊;;PML分子不同剪接體的分型及其應(yīng)用[J];南京師大學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版);2009年03期

6 蔡榮欽;沈娟;林克波;邵紅偉;黃樹林;;人外周血單核細(xì)胞B7.2基因的克隆及其可溶剪接體的發(fā)現(xiàn)[J];廣東藥學(xué)院學(xué)報(bào);2008年01期

7 楊慶,楊廣順,衛(wèi)立辛,季軍捷,李東升,賈鳳歧,吳孟超,郭亞軍;兩個(gè)新的人Flt3配體差異剪接體的克隆[J];第二軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào);2002年01期

8 邢向輝,文玲英,金巖組,軒東英,胡世頡;出生后大鼠牙胚組織中nfic基因多種選擇性剪接體的克隆研究[J];實(shí)用口腔醫(yī)學(xué)雜志;2005年03期

9 李剛,馬寶驪;RA和SLE患者中剪接體自身反應(yīng)的初步研究[J];上海免疫學(xué)雜志;1999年03期

10 黨萬太;謝文光;趙明才;蔡燕;李玲琴;周暢;周京國(guó);;痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎患者NLRP3炎性體基因轉(zhuǎn)錄剪接體mRNA表達(dá)與臨床檢測(cè)指標(biāo)的相關(guān)分析[J];第三軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào);2014年16期

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3 王勃;劉瑩;從玉文;李錦;;咪唑啉受體候選蛋白(IRAS)剪接體的確證與功能研究[A];第十二屆全國(guó)神經(jīng)精神藥理學(xué)學(xué)術(shù)交流會(huì)論文集[C];2006年

4 沈栩;聶慶華;張細(xì)權(quán);;雞GARNL1基因一種新的選擇性剪接體的鑒定和組織表達(dá)分析[A];中國(guó)家禽科學(xué)研究進(jìn)展——第十四次全國(guó)家禽科學(xué)學(xué)術(shù)討論會(huì)論文集[C];2009年

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