本文關鍵詞：一個新的MPL基因異常剪接體MPLL391-V392ins12的鑒定及在骨髓增殖性腫瘤中的突變分析，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的:以不同方法對新發(fā)現(xiàn)的MPLL391-V392ins12異常剪接體進行鑒定,以證實其真實存在性;在骨髓增殖性腫瘤(MPN)患者中分析其突變發(fā)生情況,并與JAK2V617F、MPLexon10、CALR突變的患者比較來探討其臨床意義。方法:1、MPLL391-V392ins12剪接體的鑒定對目的RNA進行逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(RT-PCR),擴增MPL基因CDS序列,凝膠回收擴增產(chǎn)物,酶切后連接到T-載體中,轉(zhuǎn)化DH5a感受態(tài)細胞,涂板,挑取菌落,堿性裂解法提取質(zhì)粒,測序鑒定。針對剪接體的序列在不同位置設計引物進行PCR擴增,兩對引物的擴增產(chǎn)物分別經(jīng)聚丙烯酰胺凝膠和瓊脂糖凝膠電泳,用凝膠成像儀對電泳結(jié)果進行掃描分析。2、MPLL391-V392ins12剪接體在MPN中突變情況分析收集MPN患者、正常人、其他血液腫瘤的骨髓或外周血標本,以及實體瘤細胞株,提取基因組總RNA,將總RNA逆轉(zhuǎn)錄為c DNA;對c DNA進行等位基因特異性聚合酶鏈反應(AS-PCR)擴增,經(jīng)瓊脂糖凝膠電泳進行結(jié)果分析,檢測其在PV、ET、PMF中的突變情況。收集僅攜帶單一突變MPLL391-V392ins12、JAK2V617F、MPLexon10、CALR陽性的ET、PMF患者的實驗室檢查指標,分別兩兩進行統(tǒng)計學比較分析。結(jié)果:1、通過克隆測序,發(fā)現(xiàn)MPL基因存在一種新的轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物,即MPL基因的第7和8外顯子之間保留了36bp的內(nèi)含子序列,導致蛋白編碼序列氨基酸位點391與392之間插入12個氨基酸(谷、甘、亮、賴、亮、亮、脯、丙、天冬、異亮、脯、纈),故命名為MPLL391-V392ins12。根據(jù)MPLL391-V392ins12剪接體的序列設計不同引物進行PCR擴增,結(jié)果均得到該剪接體產(chǎn)物,說明了MPLL391-V392ins12的真實存在性。2、248例MPN患者中檢測到19例存在MPLL391-V392ins12突變(總突變率7.66%),其中PV 1例,突變率1.92%(1/52);ET 14例,突變率9.66%(14/145);PMF 4例,突變率7.84%(4/51);200例正常人群中未檢測到突變;71例CML患者中檢測到2例為陽性,其余腫瘤中均未檢測到該剪接體。3、MPLL391-V392ins1突變和MPLexon10突變的ET患者性別、年齡、白細胞計數(shù)、血小板計數(shù)及血紅蛋白差異均無統(tǒng)計學意義(P值均0.05);MPLL391-V392ins12突變的ET患者年齡、白細胞計數(shù)低于JAK2V617F突變患者(P0.05),血小板計數(shù)低于CALR突變患者(P0.05);MPLexon10突變的ET患者年齡、白細胞計數(shù)及血紅蛋白低于JAK2V617F突變患者(P0.05),血紅蛋白低于CALR突變患者(P0.05);JAK2V617F突變的ET患者白細胞計數(shù)、血紅蛋白高于CALR突變患者(P0.05)。MPLL391-V392ins12突變的PMF患者年齡小于JAK2V617F突變患者(P0.05);JAK2V617F突變的PMF患者白細胞計數(shù)高于CALR突變患者(P0.05)。結(jié)論:1、本研究發(fā)現(xiàn)了MPL基因一個新的異常剪接體MPLL391-V392ins12,經(jīng)查閱文獻,目前尚無報道。病例篩查進一步證實MPLL391-V392ins12剪接體在三種經(jīng)典MPN中均可發(fā)生突變,且主要見于ET、PMF,可能是MPN發(fā)病的潛在原因之一。2、ET患者中,MPLL391-V392ins12突變組呈現(xiàn)與JAK2V617F突變組和CALR突變組較為不同的實驗室特征,而與MPL exon10突變組則較為相似,提示MPLL391-V392ins12突變在MPN的發(fā)病過程中可能發(fā)揮與MPLexon10突變類似的作用。
【關鍵詞】：骨髓增殖性腫瘤 MPL基因 異常剪接 MPLL391-V392ins12
【學位授予單位】：山西醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R551.3
【目錄】：

• 中文摘要5-7
• 英文摘要7-10
• 常用縮寫詞中英文對照表10-11
• 前言11-13
• 1 研究對象與方法13-22
• 1.1 研究對象13
• 1.2 主要試劑13-14
• 1.3 主要儀器14
• 1.4 主要試劑配制14-15
• 1.5 實驗方法和步驟15-20
• 1.6 收集病例20-21
• 1.7 統(tǒng)計學處理21-22
• 2 結(jié)果22-26
• 2.1 MPLL391-V392ins12 剪接體的鑒定22-23
• 2.2 MPLL391-V392ins12 剪接體與MPN的關系23-26
• 3 討論26-29
• 4 結(jié)論29-30
• 參考文獻30-34
• 綜述34-48
• 參考文獻42-48
• 致謝48-49
• 在學期間承擔/參與的科研課題與研究成果49-50
• 個人簡介50

【相似文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 黨萬太;周京國;謝文光;;基因轉(zhuǎn)錄剪接體:潛在的病變位點[J];中華臨床醫(yī)師雜志(電子版);2013年23期

2 許先國;吳俊杰;洪小珍;朱發(fā)明;嚴力行;;鑒定9個新的RHD基因mRNA可變剪接體[J];遺傳;2006年10期

3 王學銘;;第一個mRNA剪接中間產(chǎn)物[J];國外醫(yī)學(分子生物學分冊);1985年03期

4 張靜;王文亮;晏偉;郭雙平;張志培;李擒龍;王麗;嚴曉昱;;細胞凋亡相關新基因Apr-3轉(zhuǎn)錄剪接體的克隆、測序及亞細胞定位[J];臨床與實驗病理學雜志;2006年03期

5 沈宇清;夏梅;繆鳳琴;謝維;張建瓊;;PML分子不同剪接體的分型及其應用[J];南京師大學報(自然科學版);2009年03期

6 蔡榮欽;沈娟;林克波;邵紅偉;黃樹林;;人外周血單核細胞B7.2基因的克隆及其可溶剪接體的發(fā)現(xiàn)[J];廣東藥學院學報;2008年01期

7 楊慶,楊廣順,衛(wèi)立辛,季軍捷,李東升,賈鳳歧,吳孟超,郭亞軍;兩個新的人Flt3配體差異剪接體的克隆[J];第二軍醫(yī)大學學報;2002年01期

8 邢向輝,文玲英,金巖組,軒東英,胡世頡;出生后大鼠牙胚組織中nfic基因多種選擇性剪接體的克隆研究[J];實用口腔醫(yī)學雜志;2005年03期

9 李剛,馬寶驪;RA和SLE患者中剪接體自身反應的初步研究[J];上海免疫學雜志;1999年03期

10 黨萬太;謝文光;趙明才;蔡燕;李玲琴;周暢;周京國;;痛風性關節(jié)炎患者NLRP3炎性體基因轉(zhuǎn)錄剪接體mRNA表達與臨床檢測指標的相關分析[J];第三軍醫(yī)大學學報;2014年16期

中國重要會議論文全文數(shù)據(jù)庫 前6條

1 張靜;;細胞凋亡相關新基因Apr-3的一個轉(zhuǎn)錄剪接體的克隆、初步表達及純化[A];中華醫(yī)學會病理學分會2006年學術年會論文匯編[C];2006年

2 黃曉燕;陸麗;徐珉;肖俊華;朱虎;李建民;周作民;沙家豪;;運用cDNA芯片鑒定人睪丸新的與發(fā)育相關的選擇性剪接體[A];21世紀男科學——中華醫(yī)學會第五次全國男科學學術會議論文集[C];2004年

3 王勃;劉瑩;從玉文;李錦;;咪唑啉受體候選蛋白(IRAS)剪接體的確證與功能研究[A];第十二屆全國神經(jīng)精神藥理學學術交流會論文集[C];2006年

4 沈栩;聶慶華;張細權;;雞GARNL1基因一種新的選擇性剪接體的鑒定和組織表達分析[A];中國家禽科學研究進展——第十四次全國家禽科學學術討論會論文集[C];2009年

5 王宇;楊晨;陳葳;李旭;;IncRNA-UCA1不同剪接體的促癌作用機制[A];中國的遺傳學研究——遺傳學進步推動中國西部經(jīng)濟與社會發(fā)展——2011年中國遺傳學會大會論文摘要匯編[C];2011年

6 祝峙;李詠梅;羅志剛;陳穎;朱明華;;抑癌基因ING1不同剪接體差異性調(diào)節(jié)肝癌細胞HepG2生長[A];中華醫(yī)學會病理學分會2009年學術年會論文匯編[C];2009年

中國碩士學位論文全文數(shù)據(jù)庫 前8條

1 田瑞媛;一個新的MPL基因異常剪接體MPLL391-V392ins12的鑒定及在骨髓增殖性腫瘤中的突變分析[D];山西醫(yī)科大學;2015年

2 吳雙;孕酮誘導阻斷因子剪接體在肝細胞性肝癌中的表達及臨床意義[D];第三軍醫(yī)大學;2014年

3 劉靈;PRMT2及其剪接體對雌激素受體β轉(zhuǎn)錄活性的影響[D];南華大學;2011年

4 劉薇;PRMT2及其剪接體對雌激素受體ERα轉(zhuǎn)錄活性影響的相關研究[D];南華大學;2010年

5 成迎端;人類多剪接體新基因ZNF415的克隆及功能研究[D];湖南師范大學;2007年

6 王秋實;豬PILRs變異剪接體的克隆和功能分析[D];東北農(nóng)業(yè)大學;2014年

7 馬媛媛;白血病細胞來源突變型P2X_7受體及其剪接體的實驗研究[D];中國協(xié)和醫(yī)科大學;2008年

8 羅弟祥;人GIDRP88選擇性剪接體的鑒定和功能研究[D];四川大學;2005年

  本文關鍵詞：一個新的MPL基因異常剪接體MPLL391-V392ins12的鑒定及在骨髓增殖性腫瘤中的突變分析，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：492004