本文關鍵詞：CYP4A11代謝生成的20-HETE對小鼠血壓的影響及其血管張力的調(diào)控，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：細胞色素P450 4A11(Cytochrome P450 4A11,CYP4A11),主要在人體肝臟和腎臟表達,通過羥化作用將花生四烯酸(arachidonicacid,AA)代謝為20-羥基二十碳四烯(20-hydroxyeicosatetraenoic acid,20-HETE)。CYP4A11是代謝生成20-HETE最重要的酶之一,20-HETE作用在體內(nèi)不同的部位和位點,起到升血壓和抗高血壓的作用從而參與高血壓的發(fā)生發(fā)展。CYP4A11羥基化AA生成20-HETE,20-HETE參與到血壓的調(diào)控,其中涉及到多個代謝通路,極其復雜,但其具體的作用機制并不清楚。為了研究CYP4A11代謝生成的20-HETE與小鼠血壓之間的關系,本研究首先通過高鹽高脂飼料飼養(yǎng)建立野生型(WT)雄性C57BL/6J小鼠和雄性eNOS小鼠高血壓模型,并給予CYP4A11的酶活性抑制劑HET0016,測定模型小鼠的血壓變化及血清、尿液中的20-HETE的含量,初步研究20-HETE及HET0016與雄性C57BL/6J小鼠和雄性eNOS小鼠血壓之間的關系;然后通過構建與人體CYP4A11同源的Cyp4a10過表達的慢病毒,通過尾靜脈注射轉(zhuǎn)染到WT雄性C57BL/6J小鼠和雄性eNOS小鼠構建Cyp4a10過表達小鼠模型,測定轉(zhuǎn)染后小鼠血壓變化及血清、尿液中20-HETE含量,研究Cyp4a10代謝生成20-HETE對小鼠血壓的影響,初步研究Cyp4a10、20-HETE及HET0016與雄性C57BL/6J小鼠和雄性eNOS小鼠血壓之間的關系;為研究Cyp4a10代謝生成20-HETE及抑制劑HET0016對小鼠血管張力的調(diào)控,通過測定20-HETE和HET0016對小鼠的腎內(nèi)動脈和主動脈張力的影響,研究20-HETE及HET0016血管張力的作用并初步探討其作用機制。本研究通過高鹽高脂飼料喂養(yǎng)和慢病毒轉(zhuǎn)染的方式,構建了不同類型的高血壓小鼠模型,并通過測定小鼠的腎內(nèi)動脈和主動脈的張力,從器官水平和整體水平研究CYP4A11代謝生成的20-HETE對小鼠血壓的影響,初步明確了CYP4A11代謝生成20-HETE對小鼠血壓的調(diào)節(jié)作用,證明了在小鼠體內(nèi)20-HETE的升血壓作用和HET0016的抗高血壓作用,并對20-HETE及HET0016對血管張力的調(diào)節(jié)機制做了初步研究。本次研究為進一步探索CYP4A11和20-HETE對高血壓的調(diào)節(jié)作用打下了基礎,能夠成為分析CYP4A11及其代謝產(chǎn)物20-HETE對血壓的調(diào)節(jié)作用及機制的重要手段。
【關鍵詞】：CYP4A11 20-HETE 小鼠 高血壓 張力
【學位授予單位】：華南理工大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R544.1
【目錄】：

• 摘要5-6
• ABSTRACT6-10
• 英文縮略詞表10-13
• 第一章 緒論13-22
• 1.1 CYP及CYP4A11基本概述13-14
• 1.2 CYP4A11多態(tài)性與高血壓相關性研究14-15
• 1.3 AA及其代謝產(chǎn)物 20-HETE概述15-17
• 1.3.1 AA及其代謝途徑概述15-16
• 1.3.2 20-HETE及其功能概述16-17
• 1.4 高血壓及其研究方法概述17-20
• 1.4.1 高血壓簡介17-18
• 1.4.2CYP4s相關高血壓動物模型18-19
• 1.4.3 離體血管張力測定在高血壓研究中的應用19-20
• 1.5 本課題的研究意義和主要內(nèi)容20-22
• 1.5.1 本課題的研究意義20-21
• 1.5.2 本課題的主要內(nèi)容21-22
• 第二章 高血壓小鼠模型的構建與研究22-64
• 2.1 前言22
• 2.2 實驗材料22-27
• 2.2.1 實驗對象22
• 2.2.2 主要實驗儀器和耗材22-23
• 2.2.3 細胞、菌株和質(zhì)粒23-25
• 2.2.4 主要試劑25-26
• 2.2.5 溶液和培養(yǎng)基26-27
• 2.3 實驗一：飲食誘導構建高血壓小鼠模型與研究27-30
• 2.3.1 小鼠飼養(yǎng)方法27
• 2.3.2 小鼠分組27-28
• 2.3.3 小鼠血壓的測定28
• 2.3.4 HET0016對小鼠血壓的影響研究28-29
• 2.3.5 小鼠血清和尿液 20-HETE含量測定29-30
• 2.4 實驗二：過表達Cyp4a10小鼠的構建與研究30-45
• 2.4.1 重組質(zhì)粒的構建30-39
• 2.4.2 過表達Cyp4a10慢病毒的包裝39-43
• 2.4.3 慢病毒轉(zhuǎn)染小鼠43-44
• 2.4.4 HET0016對小鼠血壓的影響研究44
• 2.4.5 小鼠血清和尿液 20-HETE含量測定44
• 2.4.6 活體熒光檢測慢病毒表達44
• 2.4.7 離體小鼠器官熒光檢測慢病毒表達44-45
• 2.5 結果與分析45-62
• 2.5.1 實驗一：飲食誘導構建高血壓小鼠模型與研究45-48
• 3.5.1.1 飲食誘導構建高血壓小鼠模型45-46
• 2.5.1.2 HET0016對小鼠血壓的影響46-47
• 2.5.1.3 小鼠血清和尿液 20-HETE含量測定47-48
• 2.5.2 實驗二：過表達Cyp4a10小鼠的構建與研究48-62
• 2.5.2.1 重組質(zhì)粒的構建48-53
• 2.5.2.2 過表達Cyp4a10慢病毒的包裝53-56
• 2.5.2.3 轉(zhuǎn)染慢病毒后小鼠血壓的變化56-57
• 2.5.2.4 活體熒光檢測慢病毒表達57-58
• 2.5.2.5 離體器官檢測慢病毒表達58-59
• 2.5.2.6 HET0016對小鼠血壓的影響59-60
• 2.5.2.7 小鼠血清和尿液 20-HETE含量測定60-62
• 2.6 討論62-64
• 第三章 20-HETE及其抑制劑HET0016對離體小鼠血管張力的影響64-77
• 3.1 前言64
• 3.2 實驗材料64-65
• 3.2.1 實驗藥物64
• 3.2.2 實驗儀器與耗材64
• 3.2.3 實驗動物64-65
• 3.2.4 實驗溶液65
• 3.3 實驗一：小鼠離體腎內(nèi)動脈血管張力測定實驗65-68
• 3.3.1 小鼠腎內(nèi)動脈的分離65
• 3.3.2 腎內(nèi)動脈環(huán)的固定與平衡65-66
• 3.3.3 小鼠離體腎內(nèi)動脈環(huán)的功能性檢測66-67
• 3.3.4 HET0016對離體小鼠腎內(nèi)動脈張力的影響67-68
• 3.4 實驗二：小鼠離體主動脈血管張力測定實驗68-69
• 3.4.1 小鼠主動脈的分離68
• 3.4.2 主動脈環(huán)的固定與平衡68
• 3.4.3 小鼠離體主動脈環(huán)的功能性檢測68-69
• 3.4.4 HET0016對離體小鼠主動脈張力的影響69
• 3.4.5 20-HETE對離體小鼠主動脈張力的影響69
• 3.5 結果與分析69-75
• 3.5.1 HET0016對高鉀預收縮的離體小鼠腎內(nèi)動脈張力的影響69-70
• 3.5.2 HET0016對Phe預收縮的離體小鼠腎內(nèi)動脈張力的影響70-71
• 3.5.3 HET0016對高鉀預收縮的離體小鼠主動脈張力的影響71-72
• 3.5.4 Phe對不同小鼠離體主動脈張力的影響72
• 3.5.5 HET0016對Phe預收縮不同小鼠的主動脈張力的影響72-73
• 3.5.6 HET0016對不同藥物處理后Phe預收縮主動脈張力的影響73-74
• 3.5.7 20-HETE對離體小鼠主動脈張力的影響74-75
• 3.6 討論75-77
• 結論與展望77-79
• 參考文獻79-83
• 攻讀碩士學位期間取得的研究成果83-84
• 致謝84-85
• 附件85

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