本文關(guān)鍵詞：miR-328對高糖誘導人臍靜脈內(nèi)皮細胞間質(zhì)轉(zhuǎn)分化的調(diào)控及信號機制，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的:通過高糖誘導構(gòu)建人臍靜脈內(nèi)皮細胞間質(zhì)轉(zhuǎn)分化模型,探討miR-328在內(nèi)皮細胞間質(zhì)轉(zhuǎn)分化中的調(diào)控作用以及MEK1/2-ERK1/2信號通路在其中的作用。方法:培養(yǎng)人臍靜脈內(nèi)皮細胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs),高糖誘導間質(zhì)轉(zhuǎn)分化;構(gòu)建攜帶miR-328和antagomiR-328基因的重組慢病毒,轉(zhuǎn)染HUVECs。將實驗分為九組:(1):HUVECs+正常葡萄糖(5.5mmol/L),(2):HUVECs+甘露醇對照組(30mmol/L),(3):HUVECs+高濃度葡萄糖(30mmol/L),(4):HUVECs+miR-328,(5):HUVECs+miR-328病毒陰性對照,(6):HUVECs+高濃度葡萄糖+antagomiR-328,(7):HUVECs+高濃度葡萄糖+antagomiR-328病毒陰性對照,(8):HUVECs+高濃度葡萄糖+U0126(10μmol/L),(9):HUVECs+miR-328+U0126(10μmol/L)。免疫熒光雙染色鑒定HUVECs發(fā)生間質(zhì)轉(zhuǎn)分化;RT-PCR檢測miR-328表達水平;Western blot檢測Ⅰ、Ⅲ型膠原蛋白,p-MEK1/2、p-ERK1/2表達水平。結(jié)果:1.免疫熒光雙染色結(jié)果顯示,經(jīng)高糖處理的HUVECs呈CD31、α-SMA染色雙陽性;2.與正常葡萄糖組相比,高糖組miR-328表達明顯增高(p0.05),差異具有統(tǒng)計學意義;與高糖組及miR-328組相比,經(jīng)U0126處理后miR-328表達明顯降低(p0.05),差異有統(tǒng)計學意義;3.與正常葡萄糖組相比,高糖及miR-328處理的HUVECsⅠ、Ⅲ型膠原蛋白表達明顯增多(p0.05),差異具有統(tǒng)計學意義;與高糖組相比,antagomiR-328組Ⅰ、Ⅲ型膠原蛋白表達明顯減少(p0.05),差異具有統(tǒng)計學意義;與高糖組及miR-328組相比,經(jīng)U0126處理后Ⅰ、Ⅲ型膠原蛋白表達明顯減少(p0.05),差異具有統(tǒng)計學意義;4.與正常葡萄糖組相比,高糖及miR-328處理的HUVECs,p-MEK1/2、p-ERK1/2表達水平明顯增高(p0.05),差異具有統(tǒng)計學意義;與高糖組相比,經(jīng)antagomiR-328處理的HUVECs,p-MEK1/2、p-ERK1/2表達水平明顯降低(p0.05),差異具有統(tǒng)計學意義,經(jīng)過U0126處理后p-MEK1/2、p-ERK1/2水平較高糖組明顯降低(p0.05),差異具有統(tǒng)計學意義。結(jié)論:(1)高糖可誘導HUVECs發(fā)生間質(zhì)轉(zhuǎn)分化,同時miR-328表達增高;(2)過表達miR-328可誘導HUVECs發(fā)生間質(zhì)轉(zhuǎn)分化,而antagomiR-328可抑制內(nèi)皮細胞間質(zhì)轉(zhuǎn)分化;(3)miR-328誘導HUVECs間質(zhì)轉(zhuǎn)分化和MEK1/2-ERK1/2信號通路有關(guān)。
【關(guān)鍵詞】：人臍靜脈內(nèi)皮細胞 高糖 miR-328 內(nèi)皮細胞間質(zhì)轉(zhuǎn)分化 MEK1/2-ERK1/2
【學位授予單位】：南昌大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R587.2;R542.2
【目錄】：

• 摘要3-5
• ABSTRACT5-9
• 中英文縮略詞表9-10
• 第1章 引言10-12
• 第2章 材料與方法12-24
• 2.1 實驗材料12-13
• 2.1.1 人臍靜脈內(nèi)皮細胞（HUVECs）12
• 2.1.2 主要試劑和藥品12
• 2.1.3 主要實驗儀器12-13
• 2.2 實驗方法13-23
• 2.2.1 實驗器材準備13-14
• 2.2.2 主要試劑的配制14-15
• 2.2.3 HUVECs體外培養(yǎng)15-16
• 2.2.4 實驗分組16-17
• 2.2.5 慢病毒感染實驗17
• 2.2.6 免疫熒光雙染色鑒定HUVECs間質(zhì)轉(zhuǎn)分化17-18
• 2.2.7 qRT-PCR檢測miR-328表達18-20
• 2.2.8 Western blot檢測Ⅰ、Ⅲ型膠原蛋白、p-MEK1/2、p-ERK1/2 表達20-23
• 2.3 統(tǒng)計學方法23-24
• 第3章 結(jié)果24-31
• 3.1 HUVECs的生長特點24
• 3.2 慢病毒感染HUVECs結(jié)果24-25
• 3.3 免疫熒光雙染色鑒定HUVECs間質(zhì)轉(zhuǎn)分化情況25-26
• 3.4 各組細胞miR-328相對表達量比較26-28
• 3.5 Western blot檢測各組細胞ⅠⅢ型膠原蛋白相對表達量比較28-29
• 3.6 Western blot檢測各組細胞p-MEK1/2、p-ERK1/2 相對表達量比較29-31
• 第4章 討論31-37
• 4.1 心肌纖維化與糖尿病心肌病31-32
• 4.2 內(nèi)皮細胞間質(zhì)轉(zhuǎn)分化與心肌纖維化32-33
• 4.3 miR-328與內(nèi)皮細胞間質(zhì)轉(zhuǎn)分化33-34
• 4.4 MEK1/2-ERK1/2 信號通路與內(nèi)皮細胞間質(zhì)轉(zhuǎn)分化34-37
• 第5章 結(jié)論與展望37-38
• 5.1 結(jié)論37
• 5.2 展望37-38
• 致謝38-39
• 參考文獻39-43
• 綜述 miR-328在心血管疾病中研究的進展43-54
• 參考文獻51-54

【相似文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 蘇震,鄭法雷,李艷,段琳;轉(zhuǎn)化生長因子-β1和表皮生長因子在誘導人腎小管上皮細胞轉(zhuǎn)分化中的作用[J];中華檢驗醫(yī)學雜志;2002年05期

2 梅煜明,張t，

本文編號：433010