本文關(guān)鍵詞：自噬在尼古丁誘導(dǎo)的血管內(nèi)皮細胞損傷中的作用研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的:本研究以原代人臍靜脈內(nèi)皮細胞(HUVEC)為對象,采用尼古丁干預(yù),明確尼古丁刺激對人臍靜脈內(nèi)皮細胞自噬功能影響,探討自噬在尼古丁誘導(dǎo)的內(nèi)皮細胞損傷中的作用及其可能機制。方法:人臍靜脈內(nèi)皮細胞經(jīng)不同濃度尼古丁干預(yù)6h,采用Western Blot蛋白免疫印跡技術(shù)檢測細胞中自噬標記蛋白LC3Ⅱ及自噬相關(guān)蛋白Beclin-1、SQSTM1/p62和LAMP-2蛋白表達水平;Western Blot檢測6×10-8M及6×10-6M尼古丁作用于HUVEC不同時間(0h、1.5h、3h、6h、12h)時LC3Ⅱ、SQSTM1/p62和LAMP-2蛋白表達變化;采用流式細胞術(shù)檢測6×10-6M、6×10-8M尼古丁干預(yù)人臍靜脈內(nèi)皮細胞6h時的凋亡率;運用基因沉默技術(shù)敲除HUVECs中AMPKα基因,利用Western Blot技術(shù)檢測LC3Ⅱ和AMPKα蛋白表達,運用流式細胞術(shù)檢測細胞凋亡率。結(jié)果:1.不同濃度尼古丁干預(yù)HUVECs時,LC3Ⅱ蛋白表達具有濃度依賴性呈上調(diào)趨勢,6×10-6M尼古丁作用下LC3Ⅱ蛋白表達顯著升高(P0.01)。然而,Beclin-1表達與LC3Ⅱ的變化并不完全一致:低濃度尼古丁(6×10-9M、6×10-8M)作用下Beclin-1與對照組相比升高(P0.01),高濃度下(6×10-7M和6×10-6M)Beclin-1與對照組相比降低(P0.01)。LAMP-2蛋白表達與Beclin-1變化一致。有趣的是,SQSTM1/p62蛋白表達與Beclin-1、LAMP-2完全相反。2.6×10-8M、6×10-6M尼古丁分別干預(yù)HUVEC不同時間段,LC3Ⅱ蛋白在6h處表達水平升高顯著(P0.01)。同時,6×10-6M尼古丁干預(yù)下LAMP-2表達下調(diào)明顯,SQSTM1/p62蛋白表達升高顯著(P0.01),然而,6×10-8M尼古丁干預(yù)下LAMP-2與SQSTM1/p62蛋白表達變化與6×10-8M尼古丁干預(yù)時相反。3.6×10-8M尼古丁處理組與對照組相比,凋亡率差異不具有統(tǒng)計學(xué)意義(P?0.05);6×10-6M尼古丁處理組與對照組相比,凋亡率顯著升高(P0.001);6×10-6M尼古丁處理組與6×10-8M尼古丁處理組相比,凋亡率顯著升高(P0.001)。4.尼古丁可磷酸化AMPKα�；虺聊珹MPKα后發(fā)現(xiàn),6×10-8M尼古丁+AMPKαsiRNA(AMPKsiRNA)實驗組與6×10-8M(consiRNA)尼古丁實驗組相比,LC3Ⅱ表達明顯下調(diào)(P0.001),凋亡率顯著升高(P0.001)。結(jié)論:1.尼古丁可影響人臍靜脈內(nèi)皮細胞自噬,具有濃度和時間依賴性。2.自噬水平升高可拮抗尼古丁誘導(dǎo)的內(nèi)皮細胞凋亡,相反,自噬功能紊亂不利于內(nèi)皮細胞存活。3.AMPK介導(dǎo)的自噬在抑制尼古丁誘導(dǎo)的內(nèi)皮細胞凋亡中起關(guān)鍵作用。
【關(guān)鍵詞】：自噬 尼古丁 人臍靜脈內(nèi)皮細胞 AMPKα LC3Ⅱ
【學(xué)位授予單位】：山西醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R54
【目錄】：

• 摘要6-8
• Abstract8-11
• 常用縮寫詞中英文對照表11-13
• 前言13-15
• 第一部分 尼古丁對HUVEC自噬影響及自噬與凋亡關(guān)系15-33
• 1 材料與方法15-25
• 1.1 主要材料15-17
• 1.2 實驗主要儀器17
• 1.3 主要實驗試劑配制17-18
• 1.4 細胞培養(yǎng)與實驗18
• 1.5 細胞總蛋白提取18-19
• 1.6 BCA法測蛋白濃度19-20
• 1.7 Western Blot實驗方法20-23
• 1.8 流式細胞術(shù)23
• 1.9 統(tǒng)計分析23-25
• 2 結(jié)果25-30
• 2.1 不同濃度尼古丁對HUVECs自噬相關(guān)蛋白表達影響25-27
• 2.2 6×10~(-8)M尼古丁濃度下不同時間內(nèi)皮細胞自噬相關(guān)蛋白表達變化影響27-28
• 2.3 6×10~(-6)M尼古丁濃度下不同時間內(nèi)皮細胞自噬相關(guān)蛋白表達變化28
• 2.4 自噬增強、自噬紊亂時細胞凋亡率的變化28-30
• 3 討論30-32
• 4 結(jié)論32-33
• 第二部分AMPK調(diào)節(jié)尼古丁誘導(dǎo)的自噬33-40
• 1 材料與方法33-35
• 1.1 主要試劑33
• 1.2 主要儀器33
• 1.3 AMPKα 基因沉默33-34
• 1.4 流式細胞術(shù)測HUVECs凋亡率34
• 1.5 Western Blot34
• 1.6 統(tǒng)計分析34-35
• 2 結(jié)果35-38
• 2.1 尼古丁可誘導(dǎo)AMPKα 蛋白磷酸化35
• 2.2 敲除AMPKα 后尼古丁誘導(dǎo)的細胞自噬及細胞凋亡率變化35-38
• 3 討論38-39
• 4 結(jié)論39-40
• 參考文獻40-43
• 綜述43-55
• 參考文獻50-55
• 致謝55-56
• 在學(xué)期間承擔(dān)/參與的科研課題與研究成果56-57
• 個人簡歷57

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1 葉青;鄭民華;;自噬的分子機制與病理生理意義[J];國際病理科學(xué)與臨床雜志;2007年04期

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3 張志才;邵增務(wù);;自噬分子機制的研究進展[J];現(xiàn)代生物醫(yī)學(xué)進展;2008年01期

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5 王梅;李慶林;;自噬與癌癥的治療[J];安徽醫(yī)藥;2010年08期

6 伍靜;趙勇;師長宏;張海;;自噬的形態(tài)特征及分子調(diào)控[J];現(xiàn)代生物醫(yī)學(xué)進展;2010年20期

7 王雄;譚璐;;自噬研究進展[J];亞太傳統(tǒng)醫(yī)藥;2010年10期

8 卞龍艷;;運動與自噬的關(guān)系進展研究[J];齊齊哈爾醫(yī)學(xué)院學(xué)報;2011年07期

9 王偉;徐忠東;陶瑞松;;腫瘤發(fā)生過程中自噬與凋亡關(guān)系的研究[J];合肥師范學(xué)院學(xué)報;2011年06期

10 王光輝;;自噬與疾病[J];生物化學(xué)與生物物理進展;2012年03期

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1 韋雪;漆永梅;張迎梅;;鎘、活性氧自由基與自噬發(fā)生的分子機制[A];中國活性氧生物學(xué)效應(yīng)學(xué)術(shù)會議論文集（第一冊）[C];2011年

2 秦正紅;粱中琴;陶陸陽;黃強;劉春風(fēng);蔣星紅;倪宏;邢春根;;自噬在細胞生存與死亡中的作用[A];中國藥理學(xué)會第九次全國會員代表大會暨全國藥理學(xué)術(shù)會議論文集[C];2007年

3 秦正紅;;自噬與腫瘤和神經(jīng)細胞生存——藥物作用的新靶位[A];全國生化與分子藥理學(xué)藥物靶點研討會論文摘要集[C];2008年

4 李芹;丁壯;;自噬功能研究進展[A];中國畜牧獸醫(yī)學(xué)會家畜傳染病學(xué)分會第八屆全國會員代表大會暨第十五次學(xué)術(shù)研討會論文集[C];2013年

5 胡晨;張璇;滕衍斌;胡海汐;周叢照;;家蠶中自噬相關(guān)蛋白Atg8的結(jié)構(gòu)研究[A];華東六省一市生物化學(xué)與分子生物學(xué)會2009年學(xué)術(shù)交流會論文摘要匯編[C];2009年

6 陳希;李民;Xiao-Ming Yin;李林潔;;通過不同途徑誘導(dǎo)自噬的化合物對Atg9的依賴性不同[A];細胞—生命的基礎(chǔ)——中國細胞生物學(xué)學(xué)會2013年全國學(xué)術(shù)大會·武漢論文摘要集[C];2013年

7 陳涓涓;敬靜;蔡元博;張俊龍;;針對活體細胞自噬行為的發(fā)光金屬配合物的設(shè)計[A];中國化學(xué)會第28屆學(xué)術(shù)年會第8分會場摘要集[C];2012年

8 寧曉潔;鐘自彪;王彥峰;付貞;葉啟發(fā);;缺血再灌注誘導(dǎo)小鼠肝細胞自噬[A];2013中國器官移植大會論文匯編[C];2013年

9 吳曉琦;李丹丹;鄧蓉;江山;楊芬;馮公侃;朱孝峰;;CaMKKβ磷酸化Beclin 1調(diào)控自噬及其在腫瘤治療中的作用[A];2011醫(yī)學(xué)科學(xué)前沿論壇第十二屆全國腫瘤藥理與化療學(xué)術(shù)會議論文集[C];2011年

10 周鴻雁;裴中;陳杰;申存周;錢浩;劉妍梅;冼文彪;鄭一帆;陳玲;;線粒體動力改變參與了LRRK2突變導(dǎo)致的自噬[A];中華醫(yī)學(xué)會第十三次全國神經(jīng)病學(xué)學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2010年

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1 生命學(xué)院;俞立課題組在《科學(xué)》發(fā)文揭示自噬調(diào)控的重要機制[N];新清華;2012年

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5 陳江偉;自噬在椎間盤退變中的作用及機制研究[D];上海交通大學(xué);2014年

6 李榮榮;自噬在布比卡因肌毒性中的作用及機制研究[D];南京醫(yī)科大學(xué);2015年

7 王維;NF-κB信號通路參與介導(dǎo)的自噬在高血壓大鼠心血管重構(gòu)的作用研究[D];山東大學(xué);2015年

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1 匡紅;Jnk2通過smARF的降解來調(diào)控壓力誘導(dǎo)的線粒體自噬及組織損傷[D];浙江理工大學(xué);2015年

2 洪永桃;自噬在類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎滑膜成纖維細胞中的作用及甲氨蝶呤對自噬的影響[D];川北醫(yī)學(xué)院;2015年

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6 張宇程;泛素連接酶HOIL-1L在線粒體自噬中的功能與機制研究[D];中國人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院;2015年

7 唐芙蓉;自噬對奶山羊雄性生殖干細胞生物學(xué)特性的影響[D];西北農(nóng)林科技大學(xué);2015年

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9 包勇;Kap1在LBH589誘導(dǎo)的乳腺癌細胞MCF-7自噬形成中的作用[D];復(fù)旦大學(xué);2013年

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