目的:通過研究5-羥甲基胞嘧啶(5-hydroxymethylcytosine,5hmC)在全基因組中的分布情況,探討DNA羥甲基化(DNA hydroxymethylation)對早發(fā)冠心病(premature coronary heart disease,PCHD)血瘀證相關(guān)易感基因的影響,以期為早發(fā)冠心病血瘀證發(fā)病機制的表觀遺傳學(xué)研究提供基礎(chǔ)。方法:1.采用DNA羥甲基化免疫共沉淀芯片(hMeDIP-Chip)Arraystar Human 4x180K Refseq Promoter Microarray檢測5hmC在早發(fā)冠心病血瘀證組(簡稱PCHD血瘀證組)、早發(fā)冠心病非血瘀證組(簡稱PCHD非血瘀證組)、非早發(fā)冠心病血瘀證組(簡稱非PCHD血瘀證組)及正常組中全基因組DNA啟動子區(qū)CpG島的分布情況,通過組間比較得出早發(fā)冠心病血瘀證全基因組DNA差異羥甲基化分布譜;2.對篩選出的早發(fā)冠心病血瘀證相關(guān)差異羥甲基化基因ARF6(ADP-ribosylation factor 6,ADP-核糖基化因子6)、PSD2(pleckstrin and Sec7 domain contai...

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【學(xué)位級別】：碩士

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圖1-1全基因組DNA提取后瓊脂糖凝膠電泳

圖1-1全基因組DNA提取后瓊脂糖凝膠電泳3.2.2ShearedDNA質(zhì)控全基因組DNA片段化后，NanoDrop定量，瓊脂糖凝膠電泳分析來檢查片段化DNA大小，如圖1-2a、1-2b可知大多數(shù)DNA片段大小范圍為：200~1000bp。

圖1-2aShearedDNA瓊脂糖凝膠電泳

圖1-2aShearedDNA瓊脂糖凝膠電泳

圖1-2bShearedDNA瓊脂糖凝膠電泳

圖1-2bShearedDNA瓊脂糖凝膠電泳3.2.3羥甲基化DNA免疫共沉淀（hMeDIP）質(zhì)量評估hMeDIP倍數(shù)富集qPCR評估：采用△△Ct法分析數(shù)據(jù)。qPCR引物：F:5'AGAAGCTCGACCGTCTTGGC3'，R:5'AAACCGAACC....

圖1-4a正常組vsPCHD血瘀證組差異羥甲基化基因GO功能分布圖（前十位）

14圖1-4a正常組vsPCHD血瘀證組差異羥甲基化基因GO功能分布圖（前十位）

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