發(fā)布時間：2024-05-19 08:58

　　目的研究抗衰老Klotho蛋白對過氧化氫(H2O2)氧化損傷的人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞(HUVEC)的影響及其作用機制。方法用H2O2誘導(dǎo)HUVEC構(gòu)建氧化損傷模型。將HUVEC設(shè)置對照組、H2O2損傷組、不同濃度(1、10、100μg/L)Klotho蛋白組、絲氨酸-蘇氨酸蛋白激酶(AKT)作用組。噻唑藍(lán)法檢測細(xì)胞存活率;特定試劑盒檢測乳酸脫氫酶(LDH)、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、還原型谷胱甘肽(GSH)含量;酶聯(lián)免疫吸附法檢測一氧化氮(NO)、內(nèi)皮素1(ET-1)、細(xì)胞間黏附分子1(ICAM-1)、血管細(xì)胞黏附分子1(VCAM-1)、核因子κB(NF-κB)的含量;SA-β-半乳糖苷酶染色檢測細(xì)胞衰老情況;流式細(xì)胞術(shù)檢測活性氧(ROS)和細(xì)胞凋亡;Western blot檢測Bcl-2、Bax、NF-κB p65及p-AKT的表達(dá)變化。結(jié)果與對照組相比,H2O2損傷組細(xì)胞存活率顯著下降,LDH、MDA含量顯著增加,SOD、GSH活性顯著下降,NO含量下降,ET-1、ICAM-1、VCAM-1、NF-κB、細(xì)胞衰老率、ROS含量和細(xì)胞凋亡率顯著增加,Bax蛋白表達(dá)上升而B...

【文章頁數(shù)】：8 頁

【部分圖文】：

圖1．Klotho蛋白對H2O2氧化損傷后HUVEC存活率的影響(n=6)A為對照組，B為H2O2損傷組，C為1μg/LKlotho

蔅p65及β-actin一抗，4℃過夜。TBST洗滌3次，室溫孵育山羊抗兔IgG二抗2h。孵育結(jié)束后TSBT洗滌3次，利用ECL化學(xué)發(fā)光法顯影檢測。QuantityOne軟件分析各目的蛋白的相對表達(dá)量。1．8統(tǒng)計學(xué)分析所有數(shù)據(jù)采用SPSS17．0進行統(tǒng)計分析，數(shù)據(jù)用x±s表示。在....

圖5．Klotho蛋白對H2O2氧化損傷后HUVEC蛋白表達(dá)的影響(n=6)A為Westernblot檢測蛋白表達(dá);B為蛋白相對表達(dá)的統(tǒng)計圖

作為強氧化劑，可使血管內(nèi)皮細(xì)胞引發(fā)脂質(zhì)過氧化反應(yīng)，造成細(xì)胞氧化損傷，進而促進As的發(fā)生和發(fā)展［5］。因此，研究減輕血管內(nèi)皮細(xì)胞氧化損傷對于防治As具有重要應(yīng)用價值。最新研究表明，抗衰老Klotho蛋白在動物體內(nèi)的缺失會導(dǎo)致各種類似衰老的表現(xiàn)如As、壽命減短、器官萎縮、能量代謝異常....

圖1．Klotho蛋白對H2O2氧化損傷后HUVEC存活率的影響(n=6)A為對照組，B為H2O2損傷組，C為1μg/LKlotho

蔅p65及β-actin一抗，4℃過夜。TBST洗滌3次，室溫孵育山羊抗兔IgG二抗2h。孵育結(jié)束后TSBT洗滌3次，利用ECL化學(xué)發(fā)光法顯影檢測。QuantityOne軟件分析各目的蛋白的相對表達(dá)量。1．8統(tǒng)計學(xué)分析所有數(shù)據(jù)采用SPSS17．0進行統(tǒng)計分析，數(shù)據(jù)用x±s表示。在....

圖5．Klotho蛋白對H2O2氧化損傷后HUVEC蛋白表達(dá)的影響(n=6)A為Westernblot檢測蛋白表達(dá);B為蛋白相對表達(dá)的統(tǒng)計圖

作為強氧化劑，可使血管內(nèi)皮細(xì)胞引發(fā)脂質(zhì)過氧化反應(yīng)，造成細(xì)胞氧化損傷，進而促進As的發(fā)生和發(fā)展［5］。因此，研究減輕血管內(nèi)皮細(xì)胞氧化損傷對于防治As具有重要應(yīng)用價值。最新研究表明，抗衰老Klotho蛋白在動物體內(nèi)的缺失會導(dǎo)致各種類似衰老的表現(xiàn)如As、壽命減短、器官萎縮、能量代謝異常....

本文編號：3977888