心肌梗死的臨床研究已余百年，雖已取得迅猛卓著進(jìn)展，但其治療仍是心血管醫(yī)生面臨的嚴(yán)峻挑戰(zhàn)。經(jīng)皮冠狀動脈介入治療（PCI）是急性心梗再灌注治療的主要措施，且安全有效。但冠脈再通后常會出現(xiàn)心肌缺血再灌注損傷（IschamicReperfusion Injury,IRI），臨床表現(xiàn)為急性心肌梗死患者冠脈再通，梗死心肌再灌注后段時間，有的患者卻出現(xiàn)心律失常、心力衰竭甚至心源性猝死等系列病情反而惡化的表現(xiàn)，嚴(yán)重影響患者預(yù)后，成為目前阻礙急性心�；颊呒痹\再灌注治療獲益的主要難題。IRI是臨床常見的病理生理過程，但其機(jī)制尚未完全闡明。研究認(rèn)為，氧自由基增加、鈣超載、心肌能量代謝異常、中性粒細(xì)胞激活、血管內(nèi)皮細(xì)胞功能障礙等均參與了心肌IRI，并互為因果，最終導(dǎo)致心肌細(xì)胞凋亡和壞死。在心肌IRI中，細(xì)胞凋亡起到了重要作用，介導(dǎo)心肌IRI細(xì)胞凋亡的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑復(fù)雜多樣，也是目前的研究熱點之。深入了解心肌IRI及其致心肌細(xì)胞凋亡的分子生物學(xué)機(jī)制，阻斷促發(fā)心肌IRI特別是細(xì)胞凋亡的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路，抑制心肌IRI，減少心肌細(xì)胞的缺失，改善心臟功能具有極其重要的臨床意義。近年來研究證實腎素—血管緊張素系統(tǒng)(renin...

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【學(xué)位級別】：博士

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第一部分 缺氧復(fù)氧導(dǎo)致腎素（前體）受體在 H9c2 胚胎大鼠心肌細(xì)胞中的表達(dá)變化
    （一） 前言
    （二） 材料和方法
        1、 實驗材料
        2、 H9c2 細(xì)胞培養(yǎng)及傳代
        3、 免疫細(xì)胞化學(xué)方法和步驟
        4、 免疫熒光方法和步驟
        5、 RT-PCR 檢測 (P)RR mRNA 表達(dá)
        6、 siRNA 干擾實驗
        7、 Real-Time PCR 檢測(P)RR mRNA 的表達(dá)
        8、 心肌細(xì)胞缺氧/復(fù)氧模型的建立
        9、 實驗分組
        10、 Western blot 方法測定(P)RR 蛋白表達(dá)
    （三） 數(shù)據(jù)統(tǒng)計方法
    （四） 結(jié)果
        1、 (P)RR 在 H9c2 胚胎大鼠心肌細(xì)胞中的表達(dá)
        2、 (P)RR 干擾的效率檢測結(jié)果
        3、 缺氧復(fù)氧致(P)RR 蛋白表達(dá)的變化
    （五） 討論
    （六） 結(jié)論
    （七） 參考文獻(xiàn)
第二部分 缺氧復(fù)氧致 H9c2 心肌細(xì)胞凋亡及炎癥因子表達(dá)增加
    （一） 前言
    （二） 材料和方法
        1、 實驗材料
        2、 H9c2 細(xì)胞培養(yǎng)及傳代
        3、 心肌細(xì)胞缺氧/復(fù)氧模型的建立
        4、 Annexin V-FITC／PI 雙染法檢測細(xì)胞凋亡步驟
        5、 Western blot 方法檢測 Caspase-3 蛋白表達(dá)
        6、 ELISA 方法測定炎癥因子表達(dá)
    （三） 數(shù)據(jù)統(tǒng)計方法
    （四） 結(jié)果
        1、 Annexin V-FITC/PI 法檢測缺氧復(fù)氧組 H9c2 細(xì)胞凋亡率
        2、 缺氧復(fù)氧致 H9c2 細(xì)胞 Caspase-3 蛋白表達(dá)水平增加
        3、 缺氧復(fù)氧致 H9c2 細(xì)胞分泌炎癥因子增加
    （五） 討論
    （六） 結(jié)論
    （七） 參考文獻(xiàn)
第三部分 腎素（前體）受體介導(dǎo)的 H9c2 心肌細(xì)胞缺氧復(fù)氧損傷的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)機(jī)制
    （一） 前言
    （二） 材料和方法
        1、 實驗材料
        2、 H9c2 細(xì)胞培養(yǎng)及傳代
        3、 心肌細(xì)胞缺氧/復(fù)氧模型的建立
        4、 實驗分組
        5、 Western blot 檢測 p-p38 及 Caspase-3 蛋白表達(dá)量
        6、 siRNA 干擾實驗
        7、 ELISA 方法檢測炎癥因子表達(dá)水平
    （三） 數(shù)據(jù)統(tǒng)計方法
    （四） 結(jié)果
        1、 缺氧復(fù)氧致 p38MAPK 磷酸化水平增加
        2、 siRNA 干擾(P)RR 致 p-p38MAPK 表達(dá)下調(diào)
        3、 siRNA 干擾(P)RR 單獨或合并阻斷 p38MAPK 能夠減輕缺氧復(fù)氧所致細(xì)胞凋亡
        4、 siRNA 干擾(P)RR 單獨或合并阻斷 p38MAPK 對缺氧復(fù)氧所致炎癥因子IL-6、TNF-a、TGF-β表達(dá)的影響
    （五） 討論
    （六） 結(jié)論
    （七） 參考文獻(xiàn)
綜述
    參考文獻(xiàn)
攻讀學(xué)位期間發(fā)表文章情況
致謝



本文編號：3973037