目的： 明確Hes1在心肌缺血后適應(yīng)中的保護(hù)作用，探討其內(nèi)源性心肌保護(hù)作用的分子機(jī)制。 方法： 構(gòu)建Hes1基因表達(dá)(Ad-Hes1)和干擾(Ad-Hes1-shRNA)重組腺病毒載體，Sprague-Dawley (SD)大鼠心肌細(xì)胞原代培養(yǎng)，分別感染Ad-Hes1及Ad-Hes1-shRNA，建立心肌缺血/再灌注(H/R)、缺血后適應(yīng)模型(IPost)體外模型，按實(shí)驗(yàn)分為六組：對照組(Control)、空載組(Mock)、缺血再灌注組(H/R)、缺血再灌注Hes1表達(dá)組(H/R+Hes1)、缺血后適應(yīng)組(IPost)、缺血后適應(yīng)Hes1干擾組(IPost+Hes1-shRNA)。檢測各組細(xì)胞活力、凋亡、活性氧及線粒體膜電位，Westernblottingting檢測Hes1、PTEN、Akt/p-Akt、Stat3/p-Stat3、GSK-3β/p-GSK-3β。 結(jié)果： 心肌細(xì)胞缺氧性損傷時，Hes1表達(dá)顯著增高。Hes1的表達(dá)增高后可顯著提高H/R組細(xì)胞的活力，穩(wěn)定細(xì)胞線粒體膜電位，抑制胞質(zhì)內(nèi)的ROS生成，下調(diào)PTEN的表達(dá)，上調(diào)p-Akt、p-GSK-3β、p-Stat3表達(dá)...

【文章頁數(shù)】：53 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
中英文縮略詞表
第1章 引言
第2章 材料與方法
    2.1 材料
        2.1.1 細(xì)胞及菌株
        2.1.2 腺病毒載體系統(tǒng)
        2.1.3 主要試劑
        2.1.4 主要儀器
    2.2 重組腺病毒的構(gòu)建
        2.2.1 Ad-Hes1 腺病毒載體構(gòu)建
        2.2.2 Hes1 干擾片段腺病毒載體構(gòu)建
        2.2.3 重組腺病毒 Ad-Hes1 及 Ad-Hes1-shRNA 的擴(kuò)增與純化
        2.2.4 重組腺病毒滴度測定（TCID50 法）
        2.2.5 重組腺病毒 Ad-Hes1 在轉(zhuǎn)染細(xì)胞后表達(dá)驗(yàn)證
        2.2.6 重組腺病毒 Ad-Hes1-shRNA 干擾質(zhì)粒的篩選
    2.3 實(shí)驗(yàn)方法
        2.3.1 SD(Sprague Dawley)大鼠原代心肌細(xì)胞的培養(yǎng)
        2.3.2 實(shí)驗(yàn)分組
        2.3.3 SD 大鼠原代心肌細(xì)胞腺病毒感染
        2.3.4 氣體混配器調(diào)配
        2.3.5 H/R、IPost 體外模型液體配置成分表
        2.3.6 H/R、IPost 體外模型構(gòu)建
        2.3.7 細(xì)胞增殖活性的檢測
        2.3.8 細(xì)胞凋亡率的檢測
        2.3.9 細(xì)胞內(nèi)活性氧（ROS）檢測
        2.3.10 △Ψm 的檢測
        2.3.11 Western blotting 檢測
        2.3.12 統(tǒng)計學(xué)分析
第3章 結(jié)果
    3.1 Ad-Hes1 及 Ad-Hes1-shRNA 在原代心肌細(xì)胞中的作用
        3.1.1 腺病毒載體在心肌細(xì)胞最佳 MOI 的確定
        3.1.2 Ad-Hes1 在原代心肌細(xì)胞中的正常表達(dá)
        3.1.3 Ad-Hes1-shRNA 在原代心肌細(xì)胞內(nèi)的干擾作用
    3.2 Hes1 在體各組外心肌細(xì)胞模型中的表達(dá)
    3.3 Hes1 表達(dá)量增加提高缺血后心肌細(xì)胞活力
    3.4 Hes1 表達(dá)量增加降低缺血后心肌細(xì)胞凋亡
    3.5 Hes1 表達(dá)量升高減少缺血后心肌細(xì)胞內(nèi) ROS 形成
    3.6 Hes1 表達(dá)量增加可穩(wěn)定缺血后心肌細(xì)胞△Ψm
    3.7 Hes1 激活 PI3K/Akt 信號通路
    3.8 Hes1 激活 JAK/Stat3 信號通路
第4章 討論
第5章 結(jié)論與展望
    5.1 結(jié)論
    5.2 展望
致謝
參考文獻(xiàn)
攻讀學(xué)位期間的研究成果
綜述
    參考文獻(xiàn)



本文編號：3933133