目的研究瞬時受體電位通道1(TRPC1)/基質(zhì)交聯(lián)分子1(STIM1)復(fù)合體在人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞(HUVEC)鈣池操縱性鈣通道(SOCC)和受體操縱性鈣通道(ROCC)介導(dǎo)的鈣內(nèi)流和NO生成中的作用。方法取2³代HUVEC,將構(gòu)建的TRPC1和STIM1干擾質(zhì)粒分別轉(zhuǎn)染HUVEC,觀察細(xì)胞轉(zhuǎn)染效果的同時采用real-time PCR和Western blot檢測TRPC1、STIM1 mRNA和蛋白的表達(dá)。將細(xì)胞分別與鈣敏感受體(CaR)激動劑精胺、ROCC模擬劑(TPA)+CaR負(fù)性變構(gòu)調(diào)節(jié)劑Calhex231、蛋白激酶C(PKC)抑制劑Ro31-8220及經(jīng)典型PKCs和PKCμ抑制劑Go6967孵育后,用熒光探針Fura-2/AM及DAF-FM負(fù)載方法同步檢測[Ca2+]i和NO生成的變化;隨后用TRPC1和STIM1干擾質(zhì)粒同時轉(zhuǎn)染HUVEC,與精胺孵育后檢測[Ca2+]i和NO生成,免疫共沉淀法檢測TRPC1和STIM1的相互作用。結(jié)果與Control組相比,TRPC1轉(zhuǎn)染組和STIM1轉(zhuǎn)染組TRPC1、STIM1 mRNA和蛋白表達(dá)均明顯降低(P<...

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【文章目錄】：
1 材料和方法
    1.1 實驗材料
    1.2 主要試劑
    1.3 HUVEC的培養(yǎng)與鑒定
    1.4 基因的shRNA構(gòu)建及轉(zhuǎn)染
    1.5 real-time PCR檢測HUVEC中TRPC1、STIM1mRNA的表達(dá)
    1.6 免疫印跡法檢測HUVEC中TRPC1、STIM1的蛋白表達(dá)
    1.7 HUVEC中Ca2+濃度的測定
    1.8 HUVEC中NO含量的檢測
    1.9 免疫共沉淀檢測HUVEC中TRPC1、STIM1的相互作用
    1.1 0 統(tǒng)計學(xué)分析
2 結(jié)果
    2.1 shRNA轉(zhuǎn)染HUVEC及HUVEC中TRPC1、STIM1 mRNA的表達(dá)
    2.2 HUVEC中TRPC1、STIM1的蛋白表達(dá)
    2.3 TRPC1基因沉默對SOCC和ROCC通路介導(dǎo)的[Ca2+]i和NO生成的作用
    2.4 STIM1基因沉默對SOCC和ROCC通路介導(dǎo)的[Ca2+]i和NO生成的作用
    2.5 TRPC1、STIM1基因同時沉默對HUVEC中[Ca2+]i和NO生成的影響
    2.6 HUVEC中TRPC1與STIM1的相互作用
3 討論



本文編號：3828554