發(fā)布時(shí)間：2023-06-02 20:53

　　目的:檢測細(xì)胞因子誘導(dǎo)的凋亡抑制因子1(cytokine induced apoptosis inhibitor 1,CIAPIN1)過表達(dá)對(duì)H9c2心肌細(xì)胞缺氧/復(fù)氧(hypoxia/reoxygenation,H/R)損傷的影響。方法:1.構(gòu)建CIAPIN1過表達(dá)重組慢病毒載體并建立其穩(wěn)定轉(zhuǎn)染H9c2心肌細(xì)胞株通過構(gòu)建包裝CIAPIN1過表達(dá)慢病毒載體,測定其滴度,將其轉(zhuǎn)染H9c2細(xì)胞,檢測轉(zhuǎn)染效率。提取總蛋白,Western Blot檢測CIAPIN1蛋白的表達(dá),判定穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞系是否構(gòu)建成功。2.CIAPIN1過表達(dá)對(duì)H9c2心肌細(xì)胞H/R損傷的影響實(shí)驗(yàn)分組:CIAPIN1過表達(dá)陰性對(duì)照組(NC),CIAPIN1過表達(dá)陰性對(duì)照缺氧/復(fù)氧組(NC+H/R)和CIAPIN1過表達(dá)缺氧/復(fù)氧組(CIAPIN1+H/R)。NC+H/R組和CIAPIN1+H/R組細(xì)胞經(jīng)歷缺氧4 h/復(fù)氧2 h。應(yīng)用MTT法檢測H9c2細(xì)胞存活率,利用比色法來檢測細(xì)胞的上清液內(nèi)乳酸脫氫酶(lactate dehydrogenase,LDH)的活性;Hoechst 33258染色液從形態(tài)學(xué)角度觀察細(xì)胞的凋亡...

【文章頁數(shù)】：88 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
中文摘要
Abstract
縮略語
前言
    研究現(xiàn)狀、成果
    研究目的、方法
一、CIAPIN1過表達(dá)慢病毒載體制備、包裝及其穩(wěn)定轉(zhuǎn)染H9c2細(xì)胞株的建立
    1.1 實(shí)驗(yàn)材料
        1.1.1 慢病毒載體系統(tǒng)
        1.1.2 主要實(shí)驗(yàn)菌株和試劑
        1.1.3 主要儀器和設(shè)備
    1.2 實(shí)驗(yàn)方法
        1.2.1 主要溶液的配制
        1.2.2 制備及鑒定過表達(dá)慢病毒載體
        1.2.3 慢病毒包裝
        1.2.4 H9c2細(xì)胞的培養(yǎng)
        1.2.5 CIAPIN1過表達(dá)重組慢病毒載體轉(zhuǎn)染H9c2細(xì)胞
        1.2.6 Western Blot檢測慢病毒轉(zhuǎn)染的H9c2細(xì)胞中CIAPIN1蛋白表達(dá)
        1.2.7 數(shù)據(jù)處理
    1.3 結(jié)果
        1.3.1 GV358-CIAPIN1過表達(dá)慢病毒陽性克隆鑒定
        1.3.2 CIAPIN1過表達(dá)慢病毒包裝
        1.3.3 CIAPIN1過表達(dá)慢病毒轉(zhuǎn)染H9c2細(xì)胞效率鑒定
        1.3.4 CIAPIN1過表達(dá)慢病毒穩(wěn)定轉(zhuǎn)染H9c2細(xì)胞系鑒定
    1.4 討論
    1.5 小結(jié)
二、CIAPIN1過表達(dá)對(duì)H9c2細(xì)胞H/R損傷的影響
    2.1 實(shí)驗(yàn)材料
        2.1.1 細(xì)胞
        2.1.2 主要器材
        2.1.3 藥品與試劑
    2.2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.2.1 主要溶液的配制
        2.2.2 穩(wěn)定轉(zhuǎn)染H9c2細(xì)胞H/R模型的建立
        2.2.3 實(shí)驗(yàn)分組
        2.2.4 MTT法檢測細(xì)胞存活率
        2.2.5 細(xì)胞培養(yǎng)液中LDH活性測定
        2.2.6 Hoechst 33258染色
        2.2.7 流式細(xì)胞術(shù)檢測細(xì)胞凋亡
        2.2.8 數(shù)據(jù)處理
    2.3 結(jié)果
        2.3.1 細(xì)胞存活率
        2.3.2 細(xì)胞培養(yǎng)液中LDH活性
        2.3.3 Hoechst33258染色
        2.3.4 流式細(xì)胞術(shù)測定凋亡情況
    2.4 討論
    2.5 小結(jié)
結(jié)論
參考文獻(xiàn)
發(fā)表論文和參加科研情況說明
綜述 新基因CIAPIN1的研究進(jìn)展
    綜述參考文獻(xiàn)
致謝
個(gè)人簡歷



本文編號(hào)：3828024