目的:檢測細胞因子誘導的凋亡抑制因子1(cytokine induced apoptosis inhibitor 1,CIAPIN1)過表達對H9c2心肌細胞缺氧/復氧(hypoxia/reoxygenation,H/R)損傷的影響。方法:1.構建CIAPIN1過表達重組慢病毒載體并建立其穩(wěn)定轉染H9c2心肌細胞株通過構建包裝CIAPIN1過表達慢病毒載體,測定其滴度,將其轉染H9c2細胞,檢測轉染效率。提取總蛋白,Western Blot檢測CIAPIN1蛋白的表達,判定穩(wěn)定轉染細胞系是否構建成功。2.CIAPIN1過表達對H9c2心肌細胞H/R損傷的影響實驗分組:CIAPIN1過表達陰性對照組(NC),CIAPIN1過表達陰性對照缺氧/復氧組(NC+H/R)和CIAPIN1過表達缺氧/復氧組(CIAPIN1+H/R)。NC+H/R組和CIAPIN1+H/R組細胞經歷缺氧4 h/復氧2 h。應用MTT法檢測H9c2細胞存活率,利用比色法來檢測細胞的上清液內乳酸脫氫酶(lactate dehydrogenase,LDH)的活性;Hoechst 33258染色液從形態(tài)學角度觀察細胞的凋亡...

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【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
中文摘要
Abstract
縮略語
前言
    研究現(xiàn)狀、成果
    研究目的、方法
一、CIAPIN1過表達慢病毒載體制備、包裝及其穩(wěn)定轉染H9c2細胞株的建立
    1.1 實驗材料
        1.1.1 慢病毒載體系統(tǒng)
        1.1.2 主要實驗菌株和試劑
        1.1.3 主要儀器和設備
    1.2 實驗方法
        1.2.1 主要溶液的配制
        1.2.2 制備及鑒定過表達慢病毒載體
        1.2.3 慢病毒包裝
        1.2.4 H9c2細胞的培養(yǎng)
        1.2.5 CIAPIN1過表達重組慢病毒載體轉染H9c2細胞
        1.2.6 Western Blot檢測慢病毒轉染的H9c2細胞中CIAPIN1蛋白表達
        1.2.7 數(shù)據(jù)處理
    1.3 結果
        1.3.1 GV358-CIAPIN1過表達慢病毒陽性克隆鑒定
        1.3.2 CIAPIN1過表達慢病毒包裝
        1.3.3 CIAPIN1過表達慢病毒轉染H9c2細胞效率鑒定
        1.3.4 CIAPIN1過表達慢病毒穩(wěn)定轉染H9c2細胞系鑒定
    1.4 討論
    1.5 小結
二、CIAPIN1過表達對H9c2細胞H/R損傷的影響
    2.1 實驗材料
        2.1.1 細胞
        2.1.2 主要器材
        2.1.3 藥品與試劑
    2.2 實驗方法
        2.2.1 主要溶液的配制
        2.2.2 穩(wěn)定轉染H9c2細胞H/R模型的建立
        2.2.3 實驗分組
        2.2.4 MTT法檢測細胞存活率
        2.2.5 細胞培養(yǎng)液中LDH活性測定
        2.2.6 Hoechst 33258染色
        2.2.7 流式細胞術檢測細胞凋亡
        2.2.8 數(shù)據(jù)處理
    2.3 結果
        2.3.1 細胞存活率
        2.3.2 細胞培養(yǎng)液中LDH活性
        2.3.3 Hoechst33258染色
        2.3.4 流式細胞術測定凋亡情況
    2.4 討論
    2.5 小結
結論
參考文獻
發(fā)表論文和參加科研情況說明
綜述 新基因CIAPIN1的研究進展
    綜述參考文獻
致謝
個人簡歷



本文編號：3828024