目的:探討SRF在低氧誘導(dǎo)大鼠肺動脈平滑肌細(xì)胞增殖中的作用方法:1.大鼠肺動脈平滑肌細(xì)胞(PASMCs)的原代培養(yǎng):采用酶消化法從健康SD大鼠體內(nèi)分離出PASMCs進(jìn)行體外培養(yǎng),采用免疫細(xì)胞化學(xué)鑒定PASMCs,取3-4代細(xì)胞用于后續(xù)的實(shí)驗(yàn)。2.低氧對細(xì)胞增殖的影響:設(shè)置常氧對照組(21%),以及低氧組,低氧組通過低氧培養(yǎng)箱設(shè)置四個(gè)不同氧濃度,分別為10%,5%,2%,1%,培養(yǎng)大鼠PASMCs。設(shè)定24h、48h和72h不同時(shí)間段。描繪各組細(xì)胞生長曲線,并用MTT法來觀察細(xì)胞生長情況,檢測其細(xì)胞增殖活性。3.低氧條件下SRF對細(xì)胞增殖的影響:設(shè)計(jì)出針對大鼠SRF基因的si RNA序列,實(shí)驗(yàn)分成四組,分別為常氧組、常氧干預(yù)組、低氧組及低氧干預(yù)組。常氧培養(yǎng)條件為:21%O2、74%N2和5%CO2,低氧組培養(yǎng)條件為:1%02、94%N2、5%CO2。干預(yù)組采用的是設(shè)計(jì)SRF干擾序列即si RNA,將SRF si RNA轉(zhuǎn)染至干預(yù)組PASMCs中,分別設(shè)定24h、48h和72h三個(gè)不同的時(shí)間點(diǎn)。采用免疫細(xì)胞化學(xué)染色法,觀察SRF在PASMCs中表達(dá)情況。并采用real-time PCR和W...

【文章頁數(shù)】：50 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
英文縮略詞表
中文摘要
英文摘要
1.前言
2.材料與方法
3.實(shí)驗(yàn)結(jié)果
4.討論
5.結(jié)論
參考文獻(xiàn)
附錄
致謝
綜述
    參考文獻(xiàn)



本文編號：3759422