目的探究酪氨酸激酶BTK在心臟纖維化發(fā)生發(fā)展過程中的調(diào)控的作用并探索其具體機制,豐富心臟纖維化的發(fā)生機制,為高血壓或瓣膜病等心肌損傷相關(guān)疾病的治療策略提供新的潛在靶點。方法1.構(gòu)建心臟纖維化模型:取8-10周的btk-/-（KO）小鼠和野生型小鼠（WT）分別皮下注射ISO（5mg/kg/d,連續(xù)7天）或皮下植入AngⅡ泵（1000ng/kg/min,連續(xù)28天）。2.觀察BTK分子在WT心臟纖維化模型的心臟組織以及TGF-β活化的心臟成纖維細胞中的表達情況。3.觀察WT和KO小鼠心臟纖維化模型的心功能、心臟重構(gòu)和心肌纖維化的差異;檢測纖維化相關(guān)信號通路活化的差異。4.體外分離WT和KO胎鼠的心臟成纖維細胞,TGF-b刺激后觀察觀察纖維化相關(guān)分子表達、信號通路活化以及肌成纖維細胞的轉(zhuǎn)化情況差異。5.體外分離WT胎鼠心臟成纖維細胞,使用BTK抑制劑Acalabrutinib處理,觀察纖維化相關(guān)分子的表達、信號通路活化以及肌成纖維細胞轉(zhuǎn)化情況差異。6.利用免疫共沉淀技術(shù),尋找BTK作用的靶分子并研究其作用機制。結(jié)果1.BTK的表達水平在心臟纖維化小鼠模型的心臟組織中顯著升高,在TGF-b活化... 

【文章頁數(shù)】：80 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
abstract
英文縮寫索引
第一章 緒論
    1.1 心臟纖維化
        1.1.1 心臟纖維化的概述
        1.1.2 心臟纖維化分子機制研究
    1.2 肌成纖維細胞
        1.2.1 肌成纖維細胞的定義
        1.2.2 肌成纖維細胞的起源
        1.2.3 介導肌成纖維細胞轉(zhuǎn)化和激活的分子機制
    1.3 TGF-β
        1.3.1 TGF-β家族概述
        1.3.2 TGF-β對心臟成纖維細胞表型和功能的調(diào)節(jié)
        1.3.3 在心臟纖維化中TGF-β介導的信號通路
    1.4 BTK
        1.4.1 BTK的概述
        1.4.2 BTK的結(jié)構(gòu)和功能
        1.4.3 BTK的信號通路
        1.4.4 目前BTK在纖維化中的研究
    1.5 本實驗研究目的、方法、實驗設(shè)計和意義
        1.5.1 研究目的
        1.5.2 研究方法
        1.5.3 實驗設(shè)計
        1.5.4 研究意義
第二章 BTK分子在小鼠心臟纖維化過程中表達升高
    2.1 實驗材料
        2.1.1 實驗動物
        2.1.2 實驗儀器
        2.1.3 實驗耗材與試劑
    2.2 實驗方法
        2.2.1 分離小鼠心臟成纖維細胞
        2.2.2 刺激體外分離的野生型小鼠心臟成纖維細胞后的BTK表達
        2.2.3 構(gòu)建小鼠心臟纖維化模型
        2.2.4 PCR
        2.2.5 Western Blot
    2.3 實驗結(jié)果
    2.4 討論
第三章 BTK缺失顯著改善小鼠ISO/AngII模型中心肌纖維化水平及心功能
    3.1 實驗材料
        3.1.1 實驗動物
        3.1.2 實驗儀器
        3.1.3 實驗耗材與試劑
    3.2 實驗方法
        3.2.1 構(gòu)建纖維化模型
        3.2.2 心臟組織切片masson染色
        3.2.3 小鼠心臟超聲檢測
        3.2.4 PCR
        3.2.5 Western Blot
        3.2.6 體外抑制成纖維細胞BTK活性
        3.2.7 免疫熒光
    3.3 實驗結(jié)果
    3.4 討論
第四章 BTK促進心肌纖維化相關(guān)信號通路的活化
    4.1 實驗材料
        4.1.1 實驗動物
        4.1.2 實驗儀器
        4.1.3 實驗耗材與試劑
    4.2 實驗方法
        4.2.1 構(gòu)建纖維化模型
        4.2.2 體外分離心臟成纖維細胞
        4.2.3 免疫共沉淀技術(shù)
    4.3 實驗結(jié)果
    4.4 討論
第五章 主要結(jié)論和展望
    5.1 主要結(jié)論
    5.2 展望
參考文獻
文獻綜述
    參考文獻
致謝
攻讀碩士期間發(fā)表的論文



本文編號：3671819