發(fā)布時間：2022-06-03 21:55

　　目的:探討由Kv1.3通道基因介導(dǎo)的Treg細(xì)胞活化與心肌成纖維（CFs）細(xì)胞間的相互作用關(guān)系,明確Kv1.3通道基因在Treg細(xì)胞活化并促進(jìn)心肌纖維化過程中的關(guān)鍵地位。方法通過基因工程方法構(gòu)建靶向RNA干擾（RNAi）KCNA3（Kv1.3）基因的慢病毒載體,體外轉(zhuǎn)染Treg細(xì)胞后與CFs共培養(yǎng),RT-qPCR法和全細(xì)胞膜片鉗法檢測轉(zhuǎn)染Treg細(xì)胞基因沉默效率;ELISA法檢測共培養(yǎng)細(xì)胞分泌因子的變化;CCK-8法檢測共培養(yǎng)體系細(xì)胞的增殖變化;In cell western法檢測共培養(yǎng)體系Treg細(xì)胞上的Kv1.3通道蛋白的表達(dá)。結(jié)果:1.成功構(gòu)建基因干擾的慢病毒載體并轉(zhuǎn)染Treg細(xì)胞:與正常組相比,沉默組Treg細(xì)胞Kv1.3 mRNA表達(dá)明顯降低（P<0.01）,抑制率為78.0%;與正常組相比,沉默組Treg細(xì)胞Kv1.3鉀通道+40mV的峰值電流密度明顯降低（P<0.01）,其抑制率為71.3%;2.CCK-8實(shí)驗(yàn)表明:CFs+Tregs組較CFs組增殖最明顯（P<0.01）;CFs+Tregs+EPL組較CFs+Tregs組增殖明顯降低（P<0.01... 

【文章頁數(shù)】：61 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
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摘要
ABSTRACT
前言
研究內(nèi)容與方法
    1 研究對象
        1.1 CD4~+CD25~+Treg細(xì)胞
        1.2 共培養(yǎng)體系纖維化研究
    2 實(shí)驗(yàn)儀器與設(shè)備
        2.1 儀器和設(shè)備
        2.2 藥品與試劑
    3 相關(guān)實(shí)驗(yàn)試劑配置
        3.1 PBS緩沖液的配置
        3.2 細(xì)胞因子(IL-2,TGF-β)溶解稀釋
        3.3 完全培養(yǎng)基的配置
        3.4 免疫磁珠分選緩沖溶液配置
        3.5 全細(xì)胞膜片鉗記錄Kv1.3鉀離子通道電流相關(guān)溶液配置
        3.6 依普利酮的配置
        3.7 轉(zhuǎn)染試劑稀釋及配置
        3.8 In Cell Western實(shí)驗(yàn)相關(guān)試劑的配置
    4 實(shí)驗(yàn)方法
        4.1 CD4~+CD25~+Treg細(xì)胞
        4.2 CD4~+CD25~+Treg細(xì)胞體外刺激活化
        4.3 使用慢病毒系統(tǒng)包裝Kv1.3基因轉(zhuǎn)染目的細(xì)胞
        4.4 實(shí)時定量PCR檢測目的細(xì)胞Kv1.3通道基因m RNA
        4.5 全細(xì)胞膜片鉗檢測正常組及轉(zhuǎn)染組電流密度
        4.6 SD大鼠乳鼠CFs的分選
        4.7 構(gòu)建Treg細(xì)胞與CF細(xì)胞體外共培養(yǎng)模型
    5 統(tǒng)計方法
    6 技術(shù)路線圖
結(jié)果
討論
小結(jié)
致謝
參考文獻(xiàn)
綜述 心肌纖維化的發(fā)病機(jī)制與研究進(jìn)展
    參考文獻(xiàn)
攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文
導(dǎo)師評閱表


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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本文編號：3653549