研究目的:自噬是一個(gè)在生物進(jìn)化上相對(duì)保守的過程,涉及長壽蛋白的降解;它在細(xì)胞的生長、發(fā)育、穩(wěn)態(tài)平衡中發(fā)揮了重要的作用。氧化應(yīng)激可以誘導(dǎo)自噬活動(dòng)的發(fā)生,從而促進(jìn)細(xì)胞內(nèi)受損及有害物質(zhì)的降解。在我們的研究中,主要探討氧化型低密度脂蛋白（ox-LDL）在人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞（HUVECs）自噬中的作用及其對(duì)Akt/m TOR/p70S6K信號(hào)通路的影響。研究方法:傳代培養(yǎng)HUVECs,選用透氣的細(xì)胞培養(yǎng)瓶、DMEM培養(yǎng)基（含10%胎牛血清+100U/ml青霉素和100U/ml鏈霉素）,細(xì)胞呈現(xiàn)出貼壁生長狀態(tài),放置于37℃、5%CO2的恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng),24小時(shí)后換液繼續(xù)培養(yǎng),并注意觀察細(xì)胞生長情況,約兩天傳一代,選用第四代HUVECs,以10*10^4/ml的細(xì)胞密度接種于六孔板中,每個(gè)孔內(nèi)接種2ml,然后取對(duì)數(shù)生長期的細(xì)胞,將培養(yǎng)的HUVECs分為ox-LDL組和對(duì)照組,分別加入100ug/ml ox-LDL和等體積的磷酸鹽緩沖液（PBS）,培養(yǎng)6h、12h后,收集細(xì)胞,應(yīng)用透射電子顯微鏡觀察自噬體,實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（Real-time PCR）方法檢測(cè)LC3、p62 m RNA表達(dá)水... 

【文章來源】：青島大學(xué)山東省

【文章頁數(shù)】：44 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
abstract
引言
實(shí)驗(yàn)材料
    1.1 實(shí)驗(yàn)細(xì)胞
    1.2 主要試劑
    1.3 主要儀器
    1.4 液體及試劑配制
實(shí)驗(yàn)方法
    2.1 細(xì)胞培養(yǎng)及分組
        2.1.1 細(xì)胞培養(yǎng)
        2.1.2 分組
    2.2 細(xì)胞復(fù)蘇和凍存
        2.2.1 細(xì)胞復(fù)蘇
        2.2.2 細(xì)胞凍存
    2.3 細(xì)胞傳代
    2.4 反轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)檢測(cè)MRNA表達(dá)
        2.4.1 細(xì)胞總RNA的trizol法提取
        2.4.2 將總RNA從樣品逆轉(zhuǎn)錄成cDNA
        2.4.3 實(shí)時(shí)定量RT-PCR
    2.5 細(xì)胞蛋白的提取、定量及WESTERN-BIOTTING檢測(cè)
        2.5.1 細(xì)胞總蛋白的提取
        2.5.2 配制濃縮膠和分離膠
        2.5.3 上樣及SDS-PAGE凝膠電泳
        2.5.4 轉(zhuǎn)膜
        2.5.5 封閉
        2.5.6 孵育抗體
        2.5.7 顯色
        2.5.8 條帶分析
    2.6 透射電鏡觀察
    2.7 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法
實(shí)驗(yàn)結(jié)果
    3.1 OX-LDL誘導(dǎo)HUVECS自噬的電鏡表現(xiàn)
    3.2 OX-LDL對(duì)HUVECS中LC3、P62表達(dá)的影響
    3.3 OX-LDL對(duì)HUVECS中AKT/MTOR/P70S6K信號(hào)通路表達(dá)的影響
討論
結(jié)論
參考文獻(xiàn)
綜述
    綜述的參考文獻(xiàn)
攻讀學(xué)位期間的研究成果
縮略詞表
致謝


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]自噬與心肌缺血/再灌注損傷[J]. 劉友斌,楊樹森,樊瑛,甘潤韜.  中國病理生理雜志. 2009(12)
[2]氧化型低密度脂蛋白與動(dòng)脈粥樣硬化研究進(jìn)展[J]. 王建禮,徐興華,林娜.  醫(yī)學(xué)綜述. 2009(09)



本文編號(hào)：3635708