背景及目的:動脈粥樣硬化（Atherosclerosis,AS）作為心血管疾病最常見的病理改變,目前認(rèn)為其發(fā)生發(fā)展與免疫應(yīng)答及伴隨其發(fā)生的慢性炎癥反應(yīng)有關(guān)。Toll樣受體（toll like receptors,TLRs）在天然免疫反應(yīng)和獲得性免疫反應(yīng)中均具有重要作用,目前關(guān)于TLR9在AS發(fā)病機制中的作用還尚未明確。因此,本研究的目的是探討TLR9是否可通過影響巨噬細(xì)胞的極化狀態(tài)而影響AS的形成。方法:通過TLR9的拮抗劑（IRS869）和激動劑（ODN1826）刺激小鼠RAW264.7細(xì)胞,分為四組:對照組、ODN組、IRS組和ODN+IRS組。Apo E-/-小鼠分為兩組,對照組（生理鹽水組,saline,n=10）和干預(yù)組（IRS869組,n=10）,分別給予腹腔注射生理鹽水（與干預(yù)組等體積）和IRS869（40μg）,每周兩次,連續(xù)注射12周后處死小鼠。用Western blotting檢測RAW264.7細(xì)胞各組TLR9的蛋白含量,及主動脈TLR9及其下游的分子My D88,p-NF-κB和IRF7的蛋白含量;用流式細(xì)胞術(shù)和免疫化學(xué)熒光檢測RAW264.7細(xì)胞各組M1型和M... 

【文章來源】：福建醫(yī)科大學(xué)福建省

【文章頁數(shù)】：48 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
英文縮略詞表
中文摘要
Abstract
前言
1 材料與方法
    1.1 實驗細(xì)胞和動物
    1.2 實驗設(shè)備
    1.3 實驗主要試劑
    1.4 細(xì)胞培養(yǎng)分組及處理
    1.5 實驗動物分組及處理
    1.6 Western blotting檢測RAW264.7 細(xì)胞各組的TLR9蛋白含量
    1.7 Western blotting檢測斑塊TLR9及其下游分子的蛋白表達(dá)
    1.8 巨噬細(xì)胞表型的檢測
    1.9 巨噬細(xì)胞相關(guān)炎癥因子的檢測
    1.10 主動脈根部油紅O染色
    1.11 主動脈大體油紅染色
    1.12 苦味酸天狼猩紅染色
    1.13 免疫組化染色
    1.14 統(tǒng)計學(xué)分析
2 結(jié)果
    2.1 TLR9及其下游信號分子通路的蛋白表達(dá)情況
        2.1.1 RAW264.7 細(xì)胞TLR9蛋白表達(dá)水平的變化
        2.1.2 ApoE~(?/?)小鼠抑制TLR9后對斑塊TLR9蛋白表達(dá)的影響
        2.1.3 ApoE~(?/?)小鼠抑制TLR9后對斑塊TLR9下游分子蛋白表達(dá)的影響
    2.2 巨噬細(xì)胞極化狀態(tài)的改變
        2.2.1 RAW264.7 細(xì)胞通過流式細(xì)胞術(shù)檢測巨噬細(xì)胞(M1/M2型)的比例
        2.2.2 RAW264.7 細(xì)胞用免疫熒光雙標(biāo)化學(xué)染色檢測iNOS和CD206蛋白的表達(dá)
        2.2.3 ApoE~(?/?) 小鼠通過免疫熒光檢測主動脈斑塊巨噬細(xì)胞表型的改變
    2.3 巨噬細(xì)胞（M1/M2）相關(guān)炎癥因子的變化
        2.3.1 RAW264.7 細(xì)胞用RT‐PCR法和ELISA法檢測TNF‐α 的表達(dá)
        2.3.2 ApoE~(?/?) 小鼠通過RT‐PCR檢測各組動脈斑塊巨噬細(xì)胞（M1 /M2型）相關(guān)炎癥因子mRNA的表達(dá)
    2.4 抑制TLR9以后對動脈斑塊面積及其易損性的影響
        2.4.1 通過油紅O染色檢測動脈斑塊面積的變化
        2.4.2 抑制TLR9后對ApoE~(?/?) 小鼠動脈斑塊易損性的影響
3 討論
4 結(jié)論
參考文獻
綜述
    參考文獻
致謝



本文編號：3600965