TET2蛋白（ten-eleven-translocation 2）是一種DNA甲基化修飾酶,它是在進(jìn)化上高度保守的TET（ten-eleven-translocation）家族成員之一,通過(guò)將5m C氧化為5hm C而發(fā)揮作用。研究在動(dòng)脈斑塊發(fā)生初期,DNA甲基化譜異常,表明斑塊中自噬異常。本課題組前期研究表明,高脂飲食apo E-/-小鼠動(dòng)脈粥樣硬化病變中自噬障礙、TET2表達(dá)水平下調(diào),推測(cè)TET2可能通過(guò)調(diào)節(jié)自噬途徑從而發(fā)揮抗動(dòng)脈粥樣硬化作用。為證實(shí)該假說(shuō),本研究首先采用apo E-/-小鼠動(dòng)物模型結(jié)合慢病毒轉(zhuǎn)染技術(shù),觀察TET2過(guò)表達(dá)對(duì)apo E-/-小鼠動(dòng)脈粥樣硬化病變以及自噬的影響;在此基礎(chǔ)上,通過(guò)質(zhì)粒轉(zhuǎn)染的方法觀察TET2對(duì)HUVECs（Human umbilical vein endothelial cells）自噬及其潛在的分子機(jī)制。目的:探索TET2對(duì)apo E-/-小鼠動(dòng)脈粥樣硬化病變的影響及其可能潛在分子機(jī)制。方法:8周齡的雄性apo E-/-小鼠40只,適應(yīng)性喂養(yǎng)一周后,隨機(jī)分為兩組:對(duì)照組、過(guò)表達(dá)TET2組,每組20只,分別尾靜脈注射生理鹽水及過(guò)表達(dá)TET2... 

【文章來(lái)源】：南華大學(xué)湖南省

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【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
主要縮略詞中英文索引
第1章 緒論
    1.1 選題背景
    1.2 國(guó)內(nèi)外研究現(xiàn)狀
    1.3 研究目標(biāo)、內(nèi)容及擬解決的關(guān)鍵技術(shù)問(wèn)題
        1.3.1 研究目標(biāo)
        1.3.2 研究?jī)?nèi)容
        1.3.3 研究方法和可行性分析
        1.3.4 擬解決的關(guān)鍵問(wèn)題和創(chuàng)新點(diǎn)
            1.3.4.1 擬解決的關(guān)鍵問(wèn)題
            1.3.4.2 創(chuàng)新點(diǎn)
第2章 實(shí)驗(yàn)材料與研究方法
    2.1 實(shí)驗(yàn)材料與儀器
        2.1.1 實(shí)驗(yàn)所用動(dòng)物、細(xì)胞和試劑
        2.1.2 主要儀器設(shè)備
    2.2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.2.1 動(dòng)物模型的構(gòu)建及實(shí)驗(yàn)分組
            2.2.1.1 動(dòng)物飼養(yǎng)
            2.2.1.2 動(dòng)物組織取材
        2.2.2 血漿血脂水平檢測(cè)
        2.2.3 小鼠主動(dòng)脈竇組織冰凍切片制作
        2.2.4 蘇木素-伊紅（HE）染色
        2.2.5 油紅O染色
        2.2.6 細(xì)胞培養(yǎng)
            2.2.6.1 細(xì)胞復(fù)蘇
            2.2.6.2 細(xì)胞傳代
            2.2.6.3 細(xì)胞的凍存
        2.2.7 質(zhì)粒提取
            2.2.7.1 大腸桿菌感受態(tài)細(xì)胞的制備
            2.2.7.2 質(zhì)粒轉(zhuǎn)化
            2.2.7.3 質(zhì)粒提取
        2.2.8 質(zhì)粒轉(zhuǎn)染
        2.2.9 蛋白質(zhì)免疫印跡
            2.2.9.1 蛋白質(zhì)提取
            2.2.9.2 BCA法測(cè)定樣品蛋白的含量
            2.2.9.3 聚丙烯酰胺凝膠（SDS-PAGE）電泳
            2.2.9.4 轉(zhuǎn)膜
            2.2.9.5 封閉和抗體雜交
        2.2.10 免疫熒光染色
        2.2.11 亞硫酸氫鹽修飾后測(cè)序法(BSP)
            2.2.11.1 提取基因組DNA
            2.2.11.2 基因組DNA亞硫酸氫鈉修飾
            2.2.11.3 PCR擴(kuò)增以及產(chǎn)物的凝膠回收
                2.2.11.3.1 PCR擴(kuò)增
                2.2.11.3.2 PCR產(chǎn)物的瓊脂糖凝膠電泳及回收
        2.2.12 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法
第3章 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
    3.1 APOE~(-/-)小鼠動(dòng)脈粥樣硬化斑塊中TET2表達(dá)下調(diào)
    3.2 LV-TET2上調(diào)APOE~(-/-)小鼠主動(dòng)脈TET2蛋白表達(dá)
    3.3 LV-TET2對(duì)APOE~(-/-)小鼠體重以及血脂水平的影響
    3.4 LV-TET2抑制APOE~(-/-)小鼠動(dòng)脈粥樣硬化病變
    3.5 LV-TET2抑制APOE~(-/-)小鼠主動(dòng)脈竇AS病變
    3.6 LV-TET2上調(diào)APOE~(-/-)小鼠主動(dòng)脈竇AS病變處自噬
    3.7 TET2干預(yù)對(duì)OX-LDL處理的HUVECS TET2蛋白表達(dá)的影響
    3.8 TET2 干預(yù)對(duì) ox-LDL 處理 HUVECs 自噬的影響
    3.9 TET2 干預(yù)對(duì) HUVECs 自噬流的影響
    3.10 TET2抑制內(nèi)皮細(xì)胞BECLIN1基因甲基化
第4章 討論
第5章 結(jié)論與展望
    5.1 結(jié)論
    5.2 不足與展望
參考文獻(xiàn)
文獻(xiàn)綜述 TET2在動(dòng)脈粥樣硬化中的作用研究進(jìn)展
    參考文獻(xiàn)
作者攻讀碩士學(xué)位期間的科研成果
致謝
基金資助


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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本文編號(hào)：3588009