發(fā)布時間：2022-01-14 06:38

　　TET2蛋白（ten-eleven-translocation 2）是一種DNA甲基化修飾酶,它是在進化上高度保守的TET（ten-eleven-translocation）家族成員之一,通過將5m C氧化為5hm C而發(fā)揮作用。研究在動脈斑塊發(fā)生初期,DNA甲基化譜異常,表明斑塊中自噬異常。本課題組前期研究表明,高脂飲食apo E-/-小鼠動脈粥樣硬化病變中自噬障礙、TET2表達水平下調(diào),推測TET2可能通過調(diào)節(jié)自噬途徑從而發(fā)揮抗動脈粥樣硬化作用。為證實該假說,本研究首先采用apo E-/-小鼠動物模型結合慢病毒轉染技術,觀察TET2過表達對apo E-/-小鼠動脈粥樣硬化病變以及自噬的影響;在此基礎上,通過質粒轉染的方法觀察TET2對HUVECs（Human umbilical vein endothelial cells）自噬及其潛在的分子機制。目的:探索TET2對apo E-/-小鼠動脈粥樣硬化病變的影響及其可能潛在分子機制。方法:8周齡的雄性apo E-/-小鼠40只,適應性喂養(yǎng)一周后,隨機分為兩組:對照組、過表達TET2組,每組20只,分別尾靜脈注射生理鹽水及過表達TET2... 

【文章來源】：南華大學湖南省

【文章頁數(shù)】：77 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
主要縮略詞中英文索引
第1章 緒論
    1.1 選題背景
    1.2 國內(nèi)外研究現(xiàn)狀
    1.3 研究目標、內(nèi)容及擬解決的關鍵技術問題
        1.3.1 研究目標
        1.3.2 研究內(nèi)容
        1.3.3 研究方法和可行性分析
        1.3.4 擬解決的關鍵問題和創(chuàng)新點
            1.3.4.1 擬解決的關鍵問題
            1.3.4.2 創(chuàng)新點
第2章 實驗材料與研究方法
    2.1 實驗材料與儀器
        2.1.1 實驗所用動物、細胞和試劑
        2.1.2 主要儀器設備
    2.2 實驗方法
        2.2.1 動物模型的構建及實驗分組
            2.2.1.1 動物飼養(yǎng)
            2.2.1.2 動物組織取材
        2.2.2 血漿血脂水平檢測
        2.2.3 小鼠主動脈竇組織冰凍切片制作
        2.2.4 蘇木素-伊紅（HE）染色
        2.2.5 油紅O染色
        2.2.6 細胞培養(yǎng)
            2.2.6.1 細胞復蘇
            2.2.6.2 細胞傳代
            2.2.6.3 細胞的凍存
        2.2.7 質粒提取
            2.2.7.1 大腸桿菌感受態(tài)細胞的制備
            2.2.7.2 質粒轉化
            2.2.7.3 質粒提取
        2.2.8 質粒轉染
        2.2.9 蛋白質免疫印跡
            2.2.9.1 蛋白質提取
            2.2.9.2 BCA法測定樣品蛋白的含量
            2.2.9.3 聚丙烯酰胺凝膠（SDS-PAGE）電泳
            2.2.9.4 轉膜
            2.2.9.5 封閉和抗體雜交
        2.2.10 免疫熒光染色
        2.2.11 亞硫酸氫鹽修飾后測序法(BSP)
            2.2.11.1 提取基因組DNA
            2.2.11.2 基因組DNA亞硫酸氫鈉修飾
            2.2.11.3 PCR擴增以及產(chǎn)物的凝膠回收
                2.2.11.3.1 PCR擴增
                2.2.11.3.2 PCR產(chǎn)物的瓊脂糖凝膠電泳及回收
        2.2.12 統(tǒng)計學方法
第3章 實驗結果
    3.1 APOE~(-/-)小鼠動脈粥樣硬化斑塊中TET2表達下調(diào)
    3.2 LV-TET2上調(diào)APOE~(-/-)小鼠主動脈TET2蛋白表達
    3.3 LV-TET2對APOE~(-/-)小鼠體重以及血脂水平的影響
    3.4 LV-TET2抑制APOE~(-/-)小鼠動脈粥樣硬化病變
    3.5 LV-TET2抑制APOE~(-/-)小鼠主動脈竇AS病變
    3.6 LV-TET2上調(diào)APOE~(-/-)小鼠主動脈竇AS病變處自噬
    3.7 TET2干預對OX-LDL處理的HUVECS TET2蛋白表達的影響
    3.8 TET2 干預對 ox-LDL 處理 HUVECs 自噬的影響
    3.9 TET2 干預對 HUVECs 自噬流的影響
    3.10 TET2抑制內(nèi)皮細胞BECLIN1基因甲基化
第4章 討論
第5章 結論與展望
    5.1 結論
    5.2 不足與展望
參考文獻
文獻綜述 TET2在動脈粥樣硬化中的作用研究進展
    參考文獻
作者攻讀碩士學位期間的科研成果
致謝
基金資助


【參考文獻】：
期刊論文
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[2]Autophagy in colorectal cancer:An important switch from physiology to pathology[J]. Florin Burada,Elena Raluca Nicoli,Marius Eugen Ciurea,Daniel Constantin Uscatu,Mihai Ioana,Dan Ionut Gheonea.  World Journal of Gastrointestinal Oncology. 2015(11)
[3]細胞自噬與腫瘤的關系研究進展[J]. 楊晨,李萍,梁廷明.  生命科學. 2015(02)
[4]TET蛋白的去甲基化機制及其在調(diào)控小鼠發(fā)育過程中的作用[J]. 賈振偉,高樹新,張永春,張顯華.  遺傳. 2015(01)
[5]表觀遺傳新標志物5hmC的研究進展[J]. 葛苗苗,蔡春.  生物化學與生物物理進展. 2014(09)
[6]TET2蛋白在惡性腫瘤中的調(diào)控因素研究進展[J]. 劉心玉,楊衛(wèi)平,景曉乾.  中國藥物與臨床. 2014(03)



本文編號：3588009