論文一:RNA解旋酶DDX5通過抑制mRNA降解參與氧化低密度脂蛋白（oxLDL）誘導(dǎo)的巨噬細胞清道夫受體1（MSR1）的表達研究背景和目的:動脈粥樣硬化的標志性特征是單核細胞源性巨噬細胞進入血管內(nèi)皮后吞噬脂質(zhì)變成泡沫細胞。在斑塊形成的最初階段,巨噬細胞的吞噬作用有助于消除血管壁內(nèi)的氧化低密度脂蛋白和凋亡細胞,但是在后期階段巨噬細胞形成泡沫細胞,斑塊增長、破裂,最終引起血栓形成。由此可見,研究分析巨噬細胞脂質(zhì)吞噬過程是非常必要的。DDX5（the DEAD box protein 5）是ATP依賴的RNA解旋酶,通過調(diào)控轉(zhuǎn)錄在多種實體腫瘤性疾病中都發(fā)揮了重要調(diào)節(jié)作用。但是關(guān)于DDX5在心血管疾病中的作用知之甚少,所以這里我們主要探究DDX5是否參與巨噬細胞脂質(zhì)吞噬過程,以及它調(diào)控這一過程的具體機制。研究方法:本研究中,我們首先通過對巨噬細胞給予時間梯度和濃度梯度的oxLDL刺激,檢測DDX5總體表達情況的變化,觀察DDX5在胞漿和胞核中的分布是否具有差異。其次,通過構(gòu)建siRNA抑制巨噬細胞內(nèi)DDX5的表達,研究DDX5對于巨噬細胞脂質(zhì)吞噬的影響,探究其潛在的作用機制,即DDX5是否是... 

【文章來源】：浙江大學(xué)浙江省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：111 頁

【學(xué)位級別】：博士

【部分圖文】：

圖１）??圖１所示：ｏｘＬＤＬ刺激巨噬細胞內(nèi)ＤＤＸ５表迗上升不依賴于ＭＡＰＫ和ＮＦ－ｋＢ信??號通路

？＃?ｗｖ，??（圖２＞??圖２所示：ＤＤＸ５部分通過調(diào)節(jié)ＭＳＲｌ的表達促進脂質(zhì)吞噬。（Ａ左）對巨噬細胞給??予?ｓｉＲ－ＤＤＸ５（２ｐｌ?（ｓｉＲ－ＤＤＸ５－ｌ）或?５４?（ｓｉＲ－ＤＤＸ５－２））處理?２４?ｈ?后，通過?ｗｅｓｔｅｍｂｌｏｔ??法檢測ＤＤＸ５蛋白表達情況，ＧＡＰＤＨ作為內(nèi)源性對照（＊ｐ＜０．０５ｖｓ．ＮＣ組）。（Ａ右）??將對照組和處理姐分別與低密度脂蛋白ｄｉｌ－ｏｘＬＤＬ孵育３０?ｍｉｎ后，用胞內(nèi)低密度??脂蛋白熒光強度評價脂質(zhì)攝取情況。（Ｂ）對巨噬細胞分別轉(zhuǎn)染ＮＣ或ｓｉＲ－ＤＤＸ５（２＾１??（ｓｉＲ－ＤＤＸ５－ｌ）或?５ｎｌ（ｓｉＲ－ＤＤＸ５－２））?２４?ｈ?后再給予?ｏｘＬＤＬ（５〇ｎｇ?／ｍｌ）處理?２４?小時。然??后，提取細胞總ｍＲＮＡ，并逆轉(zhuǎn)錄。采用ｑＲＴ－ＰＣＲ檢測與脂質(zhì)吞噬相關(guān)的清道夫受??體?ＭＳＲｌ、ＭＡＲＣＯ、ＣＤ３６、ＳＣＡＲＢ１、ＳＲＣＬ、ＬＯＸ－１、ＣＸＣＬ１６、ＳＣＡＲＦ１?的表??２１??

組和ｓｉＲ－ＤＤＸ５＋ｏｘＬＤＬ組用轉(zhuǎn)錄抑制劑ＡｃｔＤ處理巨噬細胞，發(fā)現(xiàn)ｓｉＲ－??ＤＤＸ５＋ｏｘＬＤＬ?組中?ＭＳＲ１?ｍＲＮＡｔｌ／２?（半衰期）為?１．２ｈ，ｎｃ＋ｏｘＬＤＬ?組為?ｔｌ／２?（半??衰期）＞３．５ｈ（圖３Ｃ）。說明ＤＤＸ５對維持ＭＳＲｌｍＲＮＡ的穩(wěn)定性具有顯著作用。接??著鑒于ＤＤＸ５對維持ＭＳＲ１的ｍＲＮＡ穩(wěn)定性有積極作用，我們隨后檢測了?ＤＤＸ５??是否通過與內(nèi)源性ＭＳＲ１?ｍＲＮＡ直接結(jié)合發(fā)揮作用。這里我們運用ＲＩＰ法發(fā)現(xiàn)??ｏｘＬＤＬ刺激后并不增力口?ＤＤＸ５和ＭＳＲｌｍＲＮＡ結(jié)合率（圖３?Ｄ）。綜上所述，這些結(jié)??果表明ＤＤＸ５不通過與ＭＳＲ１?ｍＲＮＡ直接結(jié)合，間接地對其穩(wěn)定性發(fā)揮積極作用。??２４??


本文編號：3587589