目的探討冠心病患者外周血CD14+單核細胞基因組DNA總體甲基化水平以及特異基因TLR4（toll-like receptor4）啟動子甲基化水平,為闡明冠心病患者外周血CD14+單核細胞的異�；罨峁├碚撘罁�(jù)。方法密度梯度離心法和磁珠分選法分離20例冠心病患者和11例冠脈造影陰性對照的外周血CD14+單核細胞,抽提基因組DNA、總RNA和總蛋白,采用基因組總體甲基化定量試劑盒檢測冠心病組和對照組DNA總體甲基化水平；采用實時熒光定量聚合酶鏈反應（real-time PCR）檢測甲基化相關(guān)基因包括DNA甲基轉(zhuǎn)移酶（DNAmethyltransferases, DNMTs）和甲基結(jié)合蛋白2（methyl binding protein2, MBD2）以及TLR4的mRNA表達水平；Westem-blot檢測TLR4的蛋白表達水平；亞硫酸氫鈉測序檢測TLR4基因啟動子的甲基化水平；ELISA法檢測血漿中炎癥因子腫瘤壞死因子α（tumor necrosis factor alpha,TNF-α）、IL-6及單核細胞趨化蛋白-1（monocyte chemotactic protein1,MC... 

【文章來源】：中南大學湖南省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：68 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
目錄
1 前言
2 材料與方法
    2.1 材料
        2.1.1 主要儀器設備、試劑及耗材
        2.1.2 其他常用試劑
        2.1.3 常用試劑配制
    2.2 方法
        2.2.1 CD14+單核細胞的分離
        2.2.2 酶聯(lián)免疫吸附法ELISA檢測血漿中炎癥因子TNF-α、IL-6及MCP-1的水平
        2.2.3 RNA的抽提
        2.2.4 逆轉(zhuǎn)錄
        2.2.5 實時定量Realtime-PCR反應
        2.2.6 CD14+單核細胞基因組DNA提取及鑒定
        2.2.7 CD14+單核細胞基因組總體甲基化水平測定
        2.2.8 Westernblot檢測TLR4蛋白水平的表達
        2.2.9 亞硫酸鹽測序
    2.3 統(tǒng)計學方法
3 結(jié)果
    3.1 實驗對象
    3.2 冠心病患者血漿炎癥因子TNF-A、IL-6、MCP-1的表達水平
    3.3 冠心病患者外周血CD14+單核細胞基因組總體甲基化水平
    3.4 冠心病患者外周血CD14+單核細胞DNMTs及MBD2MRNA表達水平
    3.5 冠心病患者外周血CD14+單核細胞的總體甲基化與DNMTs和MBD2的相關(guān)性分析
    3.6 冠心病患者外周血CD14+單核細胞TLR4MRNA和蛋白表達
    3.7 冠心病患者外周血CD14+單核細胞TLR4啟動子甲基化水平
    3.8 冠心病患者外周血CD14+單核細胞TLR4啟動子甲基化水平與TLR4 MRNA表達的相關(guān)性分析
    3.9 冠心病患者外周血中CD14+單核細胞TLR4 MRNA表達和DNMT1MRNA表達的相關(guān)性分析
4 討論
參考文獻
附錄
綜述
    References
攻讀學位期間學術(shù)成果
致謝


【參考文獻】：
期刊論文
[1]DNA甲基化與動脈粥樣硬化[J]. 賈鐳,王曉建,惠汝太.  中國分子心臟病學雜志. 2011(03)
[2]Toll樣受體4信號轉(zhuǎn)導研究進展[J]. 張宇,孫瑞利,胡錦躍.  國際病理科學與臨床雜志. 2009(01)



本文編號：3580847