[目的]內(nèi)皮細(xì)胞向間充質(zhì)細(xì)胞轉(zhuǎn)變（EndMT）的過程中伴隨著轉(zhuǎn)錄因子和細(xì)胞因子表達的變化,這與血管內(nèi)皮細(xì)胞受損緊密相關(guān)。據(jù)相關(guān)研究報道,轉(zhuǎn)化生長因子β1（TGF-β1）在誘導(dǎo)EndMT形成過程中起到關(guān)鍵作用。而且最近研究指出,EndMT可以促進動脈粥樣硬化（As）的發(fā)生發(fā)展。流行病學(xué)研究表明,載脂蛋白A-I（ApoA-I）水平與心血管疾病風(fēng)險呈負(fù)相關(guān)。據(jù)本課題組前期研究及與相關(guān)文獻報道已證實,ApoA-I表現(xiàn)出顯著的抗As作用,過表達ApoA-I能夠顯著抑制As的進展。ApoA-I能夠抑制TGF-β1誘導(dǎo)的EndMT,但關(guān)于ApoA-I在TGF-β1誘導(dǎo)的EndMT中確切作用尚未完全清楚。鋅指蛋白36（TTP）可以識別并且與相應(yīng)mRNA 3’UTR富含AU元件（AREs）結(jié)合,導(dǎo)致其相應(yīng)mRNA不穩(wěn)定性增加,促進其降解,并且有研究發(fā)現(xiàn)ApoA-I可以影響TTP的功能。ApoA-I是否調(diào)控其他通路抑制TGF-β1誘導(dǎo)的EndMT尚不清楚。因此,本研究的目的是ApoA-I是否可以通過TTP調(diào)控Snail/Slug mRNA的降解,抑制EndMT。[方法]在加入或不加入ApoA-I（50μg... 

【文章來源】：南華大學(xué)湖南省

【文章頁數(shù)】：69 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

ApoA-I抑制HCAEC中TGF-β誘導(dǎo)的EndMTA.用CD31（綠色）和α-SMA（紅色）抗體進行雙重免疫熒光染色

南華大學(xué)碩士學(xué)位論文14揮作用，我們檢測SnailmRNA、SlugmRNA與Snail及Slug蛋白水平。結(jié)果顯示，TGF-β1顯著增加了HUVECs中Snail和Slug的mRNA和蛋白表達。然而，ApoA-I抑制了TGF-β1對Snail和Slug的mRNA和蛋白表達上調(diào)作用（圖4.2A和4.2B）。因此綜上所述，我們得出ApoA-I通過降低Slug和Snail抑制TGF-β1誘導(dǎo)的EndMT。圖4.2ApoA-I抑制TGF-β1誘導(dǎo)的EndMT中Snail和Slug的變化情況。用TGF-β1和/或ApoA-I在不同的時間段（0、6、12和24小時）處理HCAEC。用TGF-β1或ApoA-I處理HCAEC24小時，提取RNA和蛋白質(zhì)并進行PCR（A）和Westernblot（B）。*P<0.05;**P<0.01（n=3）4.2ApoA-I通過TTP降解Snail和SlugmRNA抑制TGF-β1誘導(dǎo)的EndMT。已有研究表明，ApoA-I能夠抑制TGF-β1誘導(dǎo)的EndMT，TTP在人類巨噬細(xì)胞中與ApoA-I相關(guān)的抗炎反應(yīng)中發(fā)揮關(guān)鍵作用[22]。TTP可以識別并結(jié)合在相關(guān)基因mRNA3’UTR的ARE結(jié)構(gòu)，促進mRNA降解。且有研究發(fā)現(xiàn)ApoA-I可以影響TTP的功能[23]。我們從上述實驗結(jié)果得出ApoA-I通過降低Snail和Slug

的作用。為了研究 TTP 是否參與 ApoA-I 通過降低 Slug 和 Snail 抑制 TGF-β1 誘導(dǎo)的 EndMT 過程并在其中在其中起到的作用。首先我們?yōu)榱舜_定 TTP 在 ApoA-I抑制 TGF-β1 誘導(dǎo)的 EndMT 過程中表達情況，我們使用 Western Blot 和 PCR 檢測 HUVECs 的 Control 組、TGF-β1 組和 TGF-β1+apoA-I 組的三組 TTP 及 TTP mRNA 水平。發(fā)現(xiàn)與 Control 組相比，TGF-β1 組 TTP 蛋白及 mRNA 水平有上升趨勢但無統(tǒng)計學(xué)意義。與 TGF-β1 組相比，TGF-β1+apoA-I 組中 TTP 及 TTP mRNA 水平顯著升高（圖 4.3）。由此我們得出 ApoA-I 促進 TTP 表達抑制 TGF-β1誘導(dǎo)的 EndMT 過程。


本文編號：3571954