研究目的:血液循環(huán)的重建是治療心肌梗死（myocardial infarction,MI）的有效方法。據(jù)報道,源自血管內(nèi)皮生長因子（vascular endothelial growth factor,VEGF）的特異性血管生成肽（VEGF mimic peptides,VMP）可以激活其受體,具有與VEGF相似的促進血管生成的活性。然而,它是否可在心肌梗死的治療中發(fā)揮有效作用并不清楚。在本研究中,為了提高在缺血區(qū)的有效治療濃度,我們構(gòu)建了可與膠原蛋白特異性結(jié)合的靶向肽CBD-VMP肽,該靶向肽由于膠原結(jié)合域（collagen binding domain,CBD）的存在可與膠原特異性結(jié)合而不影響VMP的促進血管生成作用。隨后,我們將其與脫細(xì)胞的心臟細(xì)胞外基質(zhì)（cardiac extracellular matrix,c-ECM）膠原蛋白水凝膠結(jié)合后,共同注射到大鼠心肌梗死部位,研究CBD-VMP/c-ECM膠原蛋白水凝膠在心肌梗死中的治療效果。研究內(nèi)容和方法:1.通過一系列脫細(xì)胞基質(zhì)操作獲得可注射的c-ECM凝膠,并使c-ECM凝膠與膠原蛋白凝膠以1:1的比例混合得到c-ECM膠原蛋... 

【文章來源】：青島大學(xué)山東省

【文章頁數(shù)】：52 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

脫細(xì)胞c-ECM的形態(tài)和結(jié)構(gòu)特征

青島大學(xué)碩士學(xué)位論文12CBD-VMP肽和VMP肽的濃度上調(diào)，與VMP肽相比，更多的CBD-VMP肽保留在膠原凝膠上，使較大濃度的肽保留在心肌梗死區(qū)成為可能。圖3.CBD-VMP肽與膠原蛋白的特異性結(jié)合Fig.3SpecificbindingofCBD-VMPpeptidewithcollagenSpecificbindingofCBD-VMPpeptidewithtypeIcollagenwereestimatedbyELISAmethod.**p<0.01,comparedwiththe0pMgroupforthesamesubstance.#p<0.05,theCBD-VMPgroupcomparedwiththeVMPgroup.n=5ineachgroup.4.CBD-VMP肽在皮下移植中促進血管生成能力的檢測在體外的細(xì)胞實驗中CBD-VMP肽具有刺激HUVEC增殖的能力，故將各種肽加載到膠原蛋白支架上（如圖1A），并皮下植入大鼠體內(nèi)。植入后兩周，肉眼可觀察到：與對照組（PBS/collagen）和VMP/collagen組相比，CBD-VMP/collagen組（F=11.83，q=6.875，n=5，P<0.01）有更多的細(xì)胞浸潤和血管形成（圖4A），這些結(jié)果可被HE染色所證實（圖4B,D）。此外，α-SMA是血管的特異性標(biāo)志物，α-SMA的免疫染色表明支架內(nèi)的新生血管形成是由VMP肽誘導(dǎo)的。并且與PBS/collagen組相比，VMP/collagen和CBD-VMP/collagen組（F=20.55，q=8.795，n=5，P<0.01）誘導(dǎo)的新生血管生成更顯著。但是由于CBD的存在，CBD-VMP肽能特異性結(jié)合至膠原蛋白支架上，使更多的肽保留在支架中以提高肽的有效濃度，從而更有效的促進支架材料上血管新生（圖4C,E）。

結(jié)果13圖4.大鼠皮下移植CBD-VMP肽對血管生成的影響Fig.4EffectsofCBD-VMPpeptidescombiningcollagenscaffoldsonangiogenesisinasubcutaneouslytransplantedratmodel(A)Morphologyofscaffoldaftersubcutaneouslytransplantedinrat;(B)HEstainingofscaffolds；(C)Immunostainingofspecificmarkerofarterioleα-SMAinthescaffolds;(D)Numberofcellsinthescaffolds;(E)Numbersofarteriolesinthescaffolds.n=5ineachgroup.**P<0.01comparedwiththecontrolgroup.5.TTC染色法驗證大鼠心肌梗死模型制備成功在制備大鼠心肌梗死模型過程中，用6-0絲線閉塞左冠狀動脈前降支（leftanteriordescendingcoronaryartery,LAD）后，肉眼可見心臟左室壁明顯變白或形成暗灰色。TTC染色結(jié)果如圖5所示：紅色部分為非梗死區(qū)，白色部分為心肌梗死區(qū)，證明大鼠心肌梗死模型制備成功。

【參考文獻】：
期刊論文
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本文編號：3560465