【背景】心肌梗死是所有心血管疾病患者死亡的主要原因之一,現(xiàn)階段對心肌梗死的治療因種種的局限使治療效果不能令人十分滿意。這些年來,我們努力尋找各種治療方法來促進(jìn)心肌梗死后心肌的修復(fù)和再生;其中移植干細(xì)胞療法備受關(guān)注;當(dāng)前大量研究工作都致力于MSCs及其釋放的外泌體在心肌梗死部位發(fā)揮心肌保護(hù)作用的具體機(jī)制,卻很少關(guān)注外泌體的釋放對MSCs本身發(fā)揮生物學(xué)效應(yīng)的影響。本文就抑制外泌體的釋放對MSCs的增殖能力以及氧化應(yīng)激耐受性的影響做初步研究�！灸康摹刻接懸种仆饷隗w釋放對骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的增殖及氧化應(yīng)激耐受性的影響及其初步機(jī)制研究�！狙芯糠椒ā�1.首先構(gòu)建Rab27a敲除小鼠的構(gòu)建,我們利用TALEN技術(shù)靶向性敲除C57BL/6J小鼠Rab27a基因,隨后通過表型、基因測序以及Rab27a蛋白的表達(dá)來對F1代小鼠進(jìn)行鑒定,以此來挑選敲除Rab27a的純合子小鼠,并用純合子進(jìn)行繁殖,用作后續(xù)的實驗。2.為了驗證敲除Rab27a后對小鼠骨髓來源的間充質(zhì)干細(xì)胞釋放外泌體的影響。我們通過分離并培養(yǎng)野生型小鼠及Rab27a敲除純合子小鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞,采用第3-8代性狀穩(wěn)定的原代間充質(zhì)干細(xì)胞進(jìn)行后續(xù)實... 

【文章來源】：廣州醫(yī)科大學(xué)廣東省

【文章頁數(shù)】：52 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

Rab27a敲除小鼠的構(gòu)建

圖 2.敲除 Rab27a 引起 MSCs 釋放外泌體的變化. 抑制外泌體釋放引起 MSCs 增殖能力降低Edu 實驗結(jié)果顯示在熒光顯微鏡下增殖期的 MSCs 發(fā)紅色熒光(圖 3A)，用 imagero plus 6.0 計算紅色熒光及綠色熒光的數(shù)量，并經(jīng)過 SPSS 19.0 統(tǒng)計可知，KO- MSCs增殖能力顯著低于 WT-MSCs (圖 3B)。同時用 WB 檢測 KO-MSCs 和 WT-MSCs 中殖細(xì)胞核抗原（PCNA）的表達(dá)量(圖 3C 及 3D)。由此可知抑制外泌體釋放引起SCs 增殖能力明顯降低。

圖 2.敲除 Rab27a 引起 MSCs 釋放外泌體的變化抑制外泌體釋放引起 MSCs 增殖能力降低Edu 實驗結(jié)果顯示在熒光顯微鏡下增殖期的 MSCs 發(fā)紅色熒光(圖 3A)，用 imageo plus 6.0 計算紅色熒光及綠色熒光的數(shù)量，并經(jīng)過 SPSS 19.0 統(tǒng)計可知，KO- MSCs增殖能力顯著低于 WT-MSCs (圖 3B)。同時用 WB 檢測 KO-MSCs 和 WT-MSCs 中殖細(xì)胞核抗原（PCNA）的表達(dá)量(圖 3C 及 3D)。由此可知抑制外泌體釋放引起SCs 增殖能力明顯降低。


本文編號：3560350