目的:血管重構(gòu)、血管平滑肌表型轉(zhuǎn)換是動脈粥樣硬化、血管成形術(shù)后再狹窄、高血壓等多種心血管疾病的發(fā)病基礎(chǔ)。本實驗的目的是探究盲肌樣蛋白1（MBNL1）在血管重構(gòu)以及血管平滑肌細(xì)胞（VSMCs）表型轉(zhuǎn)換中的作用和意義。方法:建立大鼠頸動脈球囊損傷模型,HE染色觀察內(nèi)膜新生情況,蛋白免疫印跡及免疫熒光技術(shù)檢測損傷組和對照組MBNL1表達(dá)水平。PDGF-bb刺激大鼠VSMCs建立血管平滑肌細(xì)胞表型轉(zhuǎn)換模型,蛋白免疫印跡檢測不同濃度及不同時間點MBNL1蛋白水平變化。予以慢病毒（Lv-MBNL1）過表達(dá)MBNL1,予以siRNA（siRNA-MBNL1）敲低MBNL1,蛋白免疫印跡檢測收縮基因（a-SMA、MYH11、SM22）表達(dá)變化,Transwell檢測VSMCs遷移能力,Edu檢測VSMCs增殖能力。結(jié)果:MBNL1在損傷組血管中表達(dá)量增加,且MBNL1主要表達(dá)于血管平滑肌當(dāng)中。在PDGF-bb作用下,大鼠VSMCs中MBNL1表達(dá)上調(diào)。過表達(dá)MBNL1,大鼠VSMCs收縮基因表達(dá)上調(diào),敲低MBNL1結(jié)果相反。過表達(dá)MBNL1抑制VSMCs的遷移能力,敲低MBNL1促進(jìn)遷移。過表達(dá)或者敲... 

【文章來源】：華中科技大學(xué)湖北省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

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【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

大鼠頸動脈損傷模型中MBNL1的表達(dá)量變化

圖 2.C PDGF-bb 刺激大鼠 VSMCs 后 MBNL1 表達(dá)量變化。（A）大鼠 VSMCs 免疫熒光，紅光代表 a-SMA，藍(lán)光代表細(xì)胞核；（B）予以 20ng/ml PDGF-bb 刺激大鼠 VSMCs,檢測 0h、24h、48h、72h 后 MBNL1 表達(dá)量，選取 a-Tubulin 作為內(nèi)參；（C）分別予以 10ng/ml、20ng/ml、40 ng/ml、80 ng/ml PDGF-bb 作用于大鼠 VSMCs， 48h 后 western blot 檢測各組 MBNL1、a-SMA 表達(dá)量，選取 a-Tubulin 作為內(nèi)參，*代表各組與對照組相比有統(tǒng)計學(xué)差異，p<0.05。3.3 過表達(dá)及敲低 MBNL1 效率檢測構(gòu)建并包裝 MBNL1 過表達(dá)慢病毒及對照慢病毒后感染大鼠 VSMCs，提取總蛋白檢測 MBNL1 表達(dá)量，提示慢病毒過表達(dá)成功（圖 3.A）。分別轉(zhuǎn)染 siRNA-nc 及三條 MBNL1 siRNA，提取總蛋白檢測 MBNL1 表達(dá)量，結(jié)果顯示三條 siRNA 均可敲低 MBNL1,其中 siRNA-1 敲低效率為 49.2%，siRNA-2 敲低效率為 75.1%，siRNA-3敲低效率為 53.3%（圖 3.B），因此后續(xù)實驗選用第二條序列。

達(dá)及敲低 MBNL1 效率檢測（A）western blot 檢測慢病毒感染 VSMCs 7，選用 a-Tubulin 作為內(nèi)參；（B）siRNA-nc、siRNA-1、siRNA-2、s鼠 VSMCs，48h 后提取總蛋白，檢測 MBNL1 表達(dá)量，選用 a-Tubulin NL1 促進(jìn)大鼠 VSMCs 收縮基因表達(dá)達(dá) MBNL1，檢測 VSMCs 中 a-SMA、MYH11 及 SM22 表達(dá)量，過表收縮蛋白表達(dá)均上調(diào)（圖 4.A-C），其中 a-SMA 表達(dá)量為對照c 組和 Lv-MBNL1 組：1 vs 1.41±0.11，p=0.024），MYH11 為Lv-nc 組和 Lv-MBNL1 組：1 vs 1.94±0.33，p=0.040），SM的 1.41 倍（Lv-nc 組和 Lv-MBNL1 組：1 vs 1.41±0.11，pL1之后，a-SMA表達(dá)量下降31%，但是兩組差異沒有統(tǒng)計學(xué)意義（NA-MBNL1 組：1 vs 0.68±0.22，p=0.068，圖 4.D），MYH11nc 組和 siRNA-MBNL1 組：1 vs 0.46±0.05，p=0.000，圖 4


本文編號：3534123