發(fā)布時(shí)間：2021-11-20 01:40

　　背景：全外顯子測序是近年來逐步興起的一種第二代測序技術(shù)。通過外顯子捕獲芯片以及邊合成邊測序技術(shù),全外顯子測序可在極短時(shí)間內(nèi)獲得海量的測序信息。與傳統(tǒng)的Sanger測序法相比,它具有高效便捷的特點(diǎn),可以以相對低廉的成本同時(shí)完成上萬個(gè)基因的測序。自2009年美國學(xué)者Ng等首次運(yùn)用全外顯子測序分析單基因孟德爾遺傳病以來,目前通過此方法已有數(shù)十個(gè)遺傳病的致病基因被發(fā)現(xiàn)。運(yùn)用全外顯子測序?qū)z傳性心臟病的研究多集中于心肌病,相繼發(fā)現(xiàn)了致心律失常性右室心肌病致病基因DES、肥厚型心肌病致病基因MRPL44、MTO1、AGK、MRPL3、AARS2以及擴(kuò)張性心肌病致病基因BAG3、GATAD1,而有關(guān)心律失常的報(bào)道相對較少。本課題通過全外顯子測序研究了一個(gè)遺傳性心臟傳導(dǎo)疾病家系,旨在找出致病基因,為疾病發(fā)病機(jī)制的研究提供參考資料,同時(shí)也為將來產(chǎn)前診斷、遺傳咨詢以及基因診斷提供幫助。目的：探查一個(gè)遺傳性心臟傳導(dǎo)疾病家系的致病基因。方法：首先通過心電圖與詢問病史對一個(gè)包含5代37人的大家系進(jìn)行心臟傳導(dǎo)疾病的篩查,并采集外周血樣以提取gDNA;接著選取其中的三名患者與一名正常人進(jìn)行全外顯子測序,并利用dbS... 

【文章來源】：中南大學(xué)湖南省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：85 頁

【學(xué)位級別】：博士

【部分圖文】：

“overlap”法示意圖

27 g、0.5 M EDTA(PH8.0)EDTA 10ml,然后加入蒸館水使總體積增至500ml，棒攪拌后震蕩搖勻使硼酸以及Tris溶于蒸館水中形成5XTBE電泳緩沖液，500 ml試劑瓶中保存。使用前再稀釋10倍成0.5 XTBE的工作液。2)瓊脂糖凝膠配制：取一潔凈的100 ml錐形瓶，加入0.8 g瓊脂糖以及70 mlXTBE工作液，于微波爐中中火加熱煮沸2 min，震蕩搖勻使瓊脂糖充分溶解BE中，加入Goldviewl型核酸染色劑6 ^1后搖勾。3)將配好凝膠倒入制膠板上，注意不要溢出，小心插好梳子。在室溫下放置時(shí)，待其固化后轉(zhuǎn)入電泳槽內(nèi)。4)向電泳槽內(nèi)加入0.5XTBE工作液，小心排出凝膠孔內(nèi)氣泡，在凝膠邊緣第一個(gè)孔內(nèi)點(diǎn)入TaKaRa公司生產(chǎn)的DL2000TM DNA MARKER 3 作為分標(biāo)尺，其他孔內(nèi)分別點(diǎn)入3 ^1各樣本PCR擴(kuò)增后的產(chǎn)物。5)加樣完成后,通電100 V恒壓電泳15 min。6)在SYBGREEN燈下，PCR產(chǎn)物存在則顯影為白色，采用凝膠成像系統(tǒng)照相（圖2-3)。

鉀通道（IfCS)。KCNQ1基因突變后可引起Kv7.1通道相應(yīng)氨基酸的改變，導(dǎo)致結(jié)構(gòu)紊亂，進(jìn)而減弱Kv7.1通道的功能，導(dǎo)致Iks通道功能減退而阻礙心室細(xì)胞復(fù)極3期鉀離子的外流，最終造成心室復(fù)極時(shí)間延長，在心電圖上表現(xiàn)為QT間期的延長。常見的LQT1型心電圖改變包括以下三種：（1) T波基底增寬，起點(diǎn)不明顯；（2) T波基底增寬，呈非對稱性高餘；（3) T波形態(tài)正常，出現(xiàn)延遲[26]。另外，由于Iks通道鉀離子外流為心率加快時(shí)的主要復(fù)極電流，因而運(yùn)動(dòng)（尤其是游泳）以及情緒激動(dòng)等加快心率的行為容易誘發(fā)LQT1綜合征患者出現(xiàn)心率失常[27]，而減慢心率的藥物如e -阻滯劑則對LQT1綜合征具有非常好的療效。目前在KCNQ1基因上共有400多個(gè)變異被報(bào)道可引起LQT1綜合征，其中大多數(shù)為錯(cuò)義突變，其次為移碼突變，突變類型分布見圖1。變異的熱點(diǎn)外顯子包括6號、3號以及7號，三者共占到變異總數(shù)的38%。具體到單個(gè)密碼子則7號外顯子上的314密碼子、341密碼子和344密碼子均有大量文獻(xiàn)多次報(bào)道，涉及跨膜區(qū)域的突變往往癥狀較為嚴(yán)重[28]。另有少數(shù)外顯子的突變可引起多個(gè)綜合征。

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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本文編號：3506308