目的:本實(shí)驗(yàn)體外分離培養(yǎng)大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞,并用5-氮胞苷誘導(dǎo)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞向心肌樣細(xì)胞分化,為骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞移植治療心肌纖維化提供良好的種子細(xì)胞。方法:（1）通過全骨髓貼壁培養(yǎng)法從wistar大鼠骨髓中分離骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞,在37℃5%CO₂培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng),當(dāng)貼壁細(xì)胞接近大部分融合時(shí)反復(fù)傳代擴(kuò)增,在倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞情況,通過MTT法檢測第2代骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的吸光度值并繪制生長曲線,同時(shí)通過流式細(xì)胞儀測定第3代細(xì)胞表面CD29和CD45的表達(dá)。（2）取生長狀態(tài)良好的第3代骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞使用不同濃度的5-氮胞苷（對照組、5umol/l、10umol/l、15umol/l）誘導(dǎo)24h后換液,在CO₂培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng),倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞形態(tài)變化,在第28天行免疫細(xì)胞化學(xué)染色檢測肌鈣蛋白T（cTnT）、連接蛋白-43（CX-43）、ɑ-平滑肌肌動蛋白（ɑ-SMA）的表達(dá)。結(jié)果:1.在倒置顯微鏡下觀察原代細(xì)胞呈多邊形,有集落生長的趨勢,約7-10天長滿至80%-90%。傳代細(xì)胞逐代伸展呈長梭形,排列具有方向性,呈漩渦狀生長,約4-5天傳代一次... 

【文章來源】：內(nèi)蒙古醫(yī)科大學(xué)內(nèi)蒙古自治區(qū)

【文章頁數(shù)】：44 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

小時(shí)換液后（×100）

原代細(xì)胞第五天（×100）

原代細(xì)胞第七天（×100）

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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本文編號：3501535