誘導(dǎo)多能干細(xì)胞來(lái)源的外泌體在體外心肌細(xì)胞損傷中的作用及miRNA組學(xué)分析
發(fā)布時(shí)間:2021-11-12 19:52
[目的]急性心肌梗死(acute myocardial infarction,AMI)是由于急性持續(xù)性冠狀動(dòng)脈缺血缺氧引起的心肌壞死,最終導(dǎo)致心肌重構(gòu)及難以逆轉(zhuǎn)的心功能下降。目前,對(duì)于心肌梗死的治療方法主要包括藥物、溶栓治療、介入及手術(shù)治療等,但這些措施不能從根本上解決心肌修復(fù)的問(wèn)題,因此再生和修復(fù)療法對(duì)于心肌梗死起著至關(guān)重要的作用。而目前,干細(xì)胞療法被認(rèn)為是治療心肌梗死具有前景的方法,同時(shí),基于干細(xì)胞的旁分泌功能,目前干細(xì)胞來(lái)源的外泌體在急性心肌損傷中的修復(fù)作用成為了研究的熱點(diǎn)。誘導(dǎo)多能干細(xì)胞(induced pluripotent stem cell,iPSC)是利用重編程技術(shù)將重編程因子轉(zhuǎn)入成體細(xì)胞得到的具有與胚胎干細(xì)胞相似的全能性的一類干細(xì)胞,基于其來(lái)源廣泛,同時(shí)可以排除免疫排斥及倫理等問(wèn)題,其在修復(fù)損傷組織和器官的治療中具有廣泛的應(yīng)用前景,但基于其細(xì)胞治療中仍然面臨著致瘤性的影響。在外泌體的研究中,基于誘導(dǎo)多能干細(xì)胞與胚胎干細(xì)胞的相似性,目前有研究已經(jīng)發(fā)現(xiàn)誘導(dǎo)多能干細(xì)胞來(lái)源的外泌體(induced pluripotent stem cells derived exosome,...
【文章來(lái)源】:昆明醫(yī)科大學(xué)云南省
【文章頁(yè)數(shù)】:93 頁(yè)
【學(xué)位級(jí)別】:碩士
【部分圖文】:
圖1A.外泌體透射電鏡觀察a.HFF_Exo在透射電鏡下的形態(tài)b.iPSC-Exo在透射電鏡下的形??
D??Oh?'?6h??12h?24h??圖3.不同濃度H202干預(yù)不同時(shí)間對(duì)H9C2細(xì)胞存活率的影響A.不同濃度H202干預(yù)6h??后H9C2細(xì)胞存活率;B.不同濃度H202干預(yù)12h后H9C2細(xì)胞存活率;C.不同濃度H202??干預(yù)24h后H9C2細(xì)胞存活率;D.用200?u?mol/L作用H9C2細(xì)胞Oh、6h、12h、24h后觀察??細(xì)胞凋亡情況。柱狀圖分析用不同濃度H202千預(yù)H9C2后,采用配對(duì)t檢驗(yàn)分析,其中??**P<0.01,"*P<0.001。??4.iPSC-Exo及HFF-Exo對(duì)心肌損傷的治療效果。??4.1?iPSC-Exo及HFF-Exo對(duì)受損的H9C2細(xì)胞存活率的影響??向200?umol/L的H202干預(yù)12小時(shí)的H9C2細(xì)胞中分別加入2〇hLPBS、??HFF-Exo、iPSC-Exo(約3X丨〇7?1〇8?jìng)(gè)囊泡)共培養(yǎng)24h后,加入CCK8工作液,??在酶聯(lián)免疫檢測(cè)儀上450nm處測(cè)定吸光度,結(jié)果顯示加入iPSC-Exo、HFF-Exo??后各組細(xì)胞存活率較PBS組均上升,iPSC-Exo效果更為顯著,統(tǒng)計(jì)學(xué)差異有顯??著性意義(P<〇.〇5)(圖4)。??24??
HFF-Exo組、iPSC-Exo??組,H202干預(yù)12小時(shí)后換無(wú)血清培養(yǎng)基,分別加入100?uL?PBS、HFF-Exo組、??iPSC-Exo組(約1.5X10*?1〇9小囊泡)干預(yù)24小時(shí)后,消化提。龋梗茫布(xì)胞??蛋白經(jīng)Western?blot檢測(cè),分析結(jié)果可見(jiàn)iPSC-Exo及HFF-Exo處理組與PBS對(duì)??照組相比,Cleaved?caspase-3蛋白表達(dá)減少,但iPSC-Exo效果更為顯著,說(shuō)明??外泌體能夠減輕受損H9C2細(xì)胞凋亡,但iPSC-Exo效果更為顯著(圖5)。??A?B?j??1????^?1.51?1???1??i?j?j?11.0-?A?'??Cleaved?caspase-3?gHk?17Kd??g〇s.?■??P-actln?46Kd??i?參?y??|?務(wù)?4s??圖5.iPSC-Exo及HFF-Exo對(duì)受損H9C2細(xì)胞凋亡相關(guān)蛋白表達(dá)的影響A.Westem?blot檢??測(cè)Caspase-3的表達(dá)水平B.采用配對(duì)t檢驗(yàn)統(tǒng)計(jì)分析,**P<0.01,?****?P<0.0001。??4.3?TUNEL凋亡染色檢測(cè)??向200?P?mol/L的H2〇2干預(yù)12h的H9C2細(xì)胞中分別加入2〇nLPBS、??HFF-Exo、iPSC-Exo(約1.5X?1〇8?1〇9小囊泡)共培養(yǎng)24h后,用TUNEL凋亡染色??25??
【參考文獻(xiàn)】:
期刊論文
[1]CircRNA_005647通過(guò)結(jié)合miR-27b-3p抑制小鼠心肌成纖維細(xì)胞中纖維化相關(guān)基因表達(dá)[J]. 袁淑菁,梁景南,張銘,朱杰寧,潘蓉,李暉,曾妮,溫藝紅,易芷瑤,單志新. 南方醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào). 2019(11)
[2]Stem cell-derived exosomes as a therapeutic tool for cardiovascular disease[J]. Etsu Suzuki,Daishi Fujita,Masao Takahashi,Shigeyoshi Oba,Hiroaki Nishimatsu. World Journal of Stem Cells. 2016(09)
本文編號(hào):3491555
【文章來(lái)源】:昆明醫(yī)科大學(xué)云南省
【文章頁(yè)數(shù)】:93 頁(yè)
【學(xué)位級(jí)別】:碩士
【部分圖文】:
圖1A.外泌體透射電鏡觀察a.HFF_Exo在透射電鏡下的形態(tài)b.iPSC-Exo在透射電鏡下的形??
D??Oh?'?6h??12h?24h??圖3.不同濃度H202干預(yù)不同時(shí)間對(duì)H9C2細(xì)胞存活率的影響A.不同濃度H202干預(yù)6h??后H9C2細(xì)胞存活率;B.不同濃度H202干預(yù)12h后H9C2細(xì)胞存活率;C.不同濃度H202??干預(yù)24h后H9C2細(xì)胞存活率;D.用200?u?mol/L作用H9C2細(xì)胞Oh、6h、12h、24h后觀察??細(xì)胞凋亡情況。柱狀圖分析用不同濃度H202千預(yù)H9C2后,采用配對(duì)t檢驗(yàn)分析,其中??**P<0.01,"*P<0.001。??4.iPSC-Exo及HFF-Exo對(duì)心肌損傷的治療效果。??4.1?iPSC-Exo及HFF-Exo對(duì)受損的H9C2細(xì)胞存活率的影響??向200?umol/L的H202干預(yù)12小時(shí)的H9C2細(xì)胞中分別加入2〇hLPBS、??HFF-Exo、iPSC-Exo(約3X丨〇7?1〇8?jìng)(gè)囊泡)共培養(yǎng)24h后,加入CCK8工作液,??在酶聯(lián)免疫檢測(cè)儀上450nm處測(cè)定吸光度,結(jié)果顯示加入iPSC-Exo、HFF-Exo??后各組細(xì)胞存活率較PBS組均上升,iPSC-Exo效果更為顯著,統(tǒng)計(jì)學(xué)差異有顯??著性意義(P<〇.〇5)(圖4)。??24??
HFF-Exo組、iPSC-Exo??組,H202干預(yù)12小時(shí)后換無(wú)血清培養(yǎng)基,分別加入100?uL?PBS、HFF-Exo組、??iPSC-Exo組(約1.5X10*?1〇9小囊泡)干預(yù)24小時(shí)后,消化提。龋梗茫布(xì)胞??蛋白經(jīng)Western?blot檢測(cè),分析結(jié)果可見(jiàn)iPSC-Exo及HFF-Exo處理組與PBS對(duì)??照組相比,Cleaved?caspase-3蛋白表達(dá)減少,但iPSC-Exo效果更為顯著,說(shuō)明??外泌體能夠減輕受損H9C2細(xì)胞凋亡,但iPSC-Exo效果更為顯著(圖5)。??A?B?j??1????^?1.51?1???1??i?j?j?11.0-?A?'??Cleaved?caspase-3?gHk?17Kd??g〇s.?■??P-actln?46Kd??i?參?y??|?務(wù)?4s??圖5.iPSC-Exo及HFF-Exo對(duì)受損H9C2細(xì)胞凋亡相關(guān)蛋白表達(dá)的影響A.Westem?blot檢??測(cè)Caspase-3的表達(dá)水平B.采用配對(duì)t檢驗(yàn)統(tǒng)計(jì)分析,**P<0.01,?****?P<0.0001。??4.3?TUNEL凋亡染色檢測(cè)??向200?P?mol/L的H2〇2干預(yù)12h的H9C2細(xì)胞中分別加入2〇nLPBS、??HFF-Exo、iPSC-Exo(約1.5X?1〇8?1〇9小囊泡)共培養(yǎng)24h后,用TUNEL凋亡染色??25??
【參考文獻(xiàn)】:
期刊論文
[1]CircRNA_005647通過(guò)結(jié)合miR-27b-3p抑制小鼠心肌成纖維細(xì)胞中纖維化相關(guān)基因表達(dá)[J]. 袁淑菁,梁景南,張銘,朱杰寧,潘蓉,李暉,曾妮,溫藝紅,易芷瑤,單志新. 南方醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào). 2019(11)
[2]Stem cell-derived exosomes as a therapeutic tool for cardiovascular disease[J]. Etsu Suzuki,Daishi Fujita,Masao Takahashi,Shigeyoshi Oba,Hiroaki Nishimatsu. World Journal of Stem Cells. 2016(09)
本文編號(hào):3491555
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