目的探討并建立成年小鼠心臟成纖維細(xì)胞原代培養(yǎng)方法。方法采用0.8 g/LⅣ型膠原蛋白酶和1 g/L胰蛋白酶為消化液,以多次短時間水浴振蕩的方式消化成年小鼠心臟組織,差速貼壁法分離純化心臟成纖維細(xì)胞。波形蛋白免疫熒光細(xì)胞化學(xué)染色法鑒定細(xì)胞類型及純度;倒置相差顯微鏡觀察細(xì)胞生長情況,繪制細(xì)胞生長曲線;CCK-8法測定細(xì)胞增殖能力、Western blot法檢測轉(zhuǎn)化生長因子β1（TGF-β1）刺激后細(xì)胞SMAD家族成員2/3（Smad2/3）蛋白及磷酸化水平。結(jié)果差速貼壁后在相差顯微鏡下可見大量球形貼壁細(xì)胞;3 d后細(xì)胞逐漸由圓形伸展為長梭形并迅速增殖,分裂象多見;5 d后細(xì)胞數(shù)量顯著增多,完全匯合無空隙;細(xì)胞生長曲線近似"S"形。波形蛋白陽性率可達(dá)95%。CCK-8法顯示在第3⁵天細(xì)胞增殖能力最顯著,給予第2代心臟成纖維細(xì)胞TGF-β1刺激顯示Smad2/3蛋白磷酸化水平明顯增加。結(jié)論建立了一種快速、經(jīng)濟(jì)、有效獲取成年小鼠心臟成纖維細(xì)胞的方法。 

【文章來源】：細(xì)胞與分子免疫學(xué)雜志. 2017,33(01)北大核心CSCD

【文章頁數(shù)】：5 頁

【文章目錄】：
1 材料和方法
    1.1 材料
    1.2 方法
        1.2.1 取材
        1.2.2 組織細(xì)胞分離培養(yǎng)
        1.2.3 細(xì)胞傳代
        1.2.4 免疫熒光細(xì)胞化學(xué)染色法鑒定心臟成纖維細(xì)胞
        1.2.5 細(xì)胞生長曲線測定
        1.2.6 CCK-8法測定細(xì)胞增殖情況
        1.2.7 Western blot法檢測TGF-β1刺激后心臟成纖維細(xì)胞Smad2/3和p-Smad2/3的表達(dá)
        1.2.8 統(tǒng)計學(xué)分析
2 結(jié)果
    2.1 心臟成纖維細(xì)胞的生物學(xué)特性
    2.2 心臟成纖維細(xì)胞生長曲線及增殖活力
    2.3 心臟成纖維細(xì)胞純度鑒定
    2.4 TGF-β1刺激心臟成纖維細(xì)胞后導(dǎo)致Smad3磷酸化
3 討論


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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本文編號：3482833