目的冠狀動脈粥樣硬化是冠心病的發(fā)病基礎,高血脂作為重要的環(huán)境因素,通過引起冠狀動脈內皮細胞功能障礙促進動脈粥樣硬化的發(fā)生。低密度脂蛋白（ox-LDL）對冠脈內皮的損傷發(fā)生貫穿于冠心病的發(fā)病整個過程中,最終導致心梗的發(fā)生。減少和預防ox-LDL誘導的冠脈內皮細胞損傷對于預防冠心病的發(fā)生,降低冠心病的致死率有重要意義。目前,已發(fā)現多種Micro-RNA參與冠狀動脈粥樣硬化的發(fā)生和發(fā)展,以往發(fā)現miR-130a在冠心病患者中表達異常,且在急性心肌梗死后的心肌細胞損傷的作用已明確,我們推測它可能在冠脈內皮功能障礙中同樣發(fā)揮作用。本研究旨在探討miR-130a對靶基因PPAR-γ的調控在冠脈內皮細胞的炎癥反應的影響,從分子水平為冠狀動脈粥樣硬化性心臟病的診療提供新的研究方向。方法體外培養(yǎng)傳代原代人冠脈內皮細胞（HCAECs）,（1）使用不同濃度的ox-LDL刺激正常HCAECs 24h,誘導損傷,通過細胞形態(tài)學的觀察確定損傷模型的建立,使用RTq PCR和蛋白質免疫印跡法（Western blot）檢測不同濃度ox-LDL刺激誘導損傷后冠脈內皮細胞中miR-130a的表達差異及PPAR-γ的mR... 

【文章來源】：青島大學山東省

【文章頁數】：48 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

正常冠脈內皮形態(tài)學表現（×100）；Box-LDL刺激后冠脈內皮損傷形態(tài)學表現（×100）

青島大學碩士學位論文193.miR-130a抑制PPAR-γ的表達使用miR-130amimic、miR-130ainhibitor、miR-NC轉染細胞48h后，使用RT-qPCR檢測轉染效果，結果顯示，與對照組和miR-NC組相比，miR-130amimic組miR-130a的表達水平明顯升高，miR-130ainhibitor的表達水平明顯減低,轉染效果明顯，差異具有統(tǒng)計學意義（P＜0.01）。miR-NC組較對照組miR-130a的表達水平無明顯變化（圖3A）。給予上述3組細胞80μg/mL的ox-LDL刺激24h，對照組不進行轉染，直接使用80μg/mL的ox-LDL刺激細胞24h。使用RT-qPCR對PPAR-γ的mRNA表達量進行檢測，結果顯示，與對照組和miR-NC組相比，miR-130amimic抑制了PPAR-γ的mRNA水平的表達，而miR-130ainhibitor促進了PPAR-γ的mRNA的表達，差異均具有統(tǒng)計學意義（P＜0.01）；miR-NC與對照組之間PPAR-γ的mRNA的表達無明顯差異（圖3B）。Westernblot檢測PPAR-γ蛋白表達差異，結果顯示，與對照組相比，miR-130amimic組PPAR-γ蛋白表達降低，miR-130ainbibitor組PPAR-γ蛋白表達升高；且較miR-NC組相比，PPAR-γ表達差異均有統(tǒng)計學意義。（P＜0.001）miR-NC組與對照組相比，PPAR-γ蛋白表達無明顯差異（圖3C、D）。說明miR-130a抑制了PPAR-γ在mRNA及蛋白水平的表達。圖3miR-130a對HCAECsPPAR-γ表達產生的影響A.使用miR-130a模擬物、抑制物和轉染陰性對照轉染細胞后miR-130a的表達；B.miR-130a在mRNA水平對PPAR-γ表達的影響；C.miR-130a對PPAR-γ蛋白水平表達的影響。D.PPAR-γ的相對蛋白表達量。注：*表示與對照組相比，#表示與miR-NC組相比。**、##，P<0.01，***、###，P＜0.001。

4.miR-130a 促進 ox-LDL 誘導損傷后 HCAECs 細胞的炎癥反應 使用 mi R-130a mimic、mi R-130a inhibitor、mi R-NC 轉染細胞 48h，再給予 80μg/mL的 ox-LDL 刺激細胞 24h，對照組不轉染，直接給與 80μg/mL 的 ox-LDL 刺激 24h。我們使用 ELISA 法檢測炎性 IL-6、IL-1β 及 TNF-α 的表達，結果顯示，與對照組相比，mi R-130a mimic 組炎性因子 IL-6、IL-1β 及 TNF-α 的表達明顯升高（P＜0.001），mi R-130a inhibitor 組炎性因子的表達明顯降低，差異具有統(tǒng)計學意義（P＜0.01）。與 mi R-NC 組相比，mi R-130a mimic 組炎性因子 IL-6、IL-1β 及 TNF-α 的表達升高（P＜0.01），mi R-130a inhibitor 組炎性因子的表達降低（P＜0.01），mi R-NC 組與對照組相比無統(tǒng)計學差異（圖 4）。說明了 mi R-130a 的過表達促進內皮細胞損傷后炎癥因子的釋放。

【參考文獻】：
期刊論文
[1]miRNA與動脈粥樣硬化炎癥機制研究進展[J]. 顧燕妮,謝春毅.  中國免疫學雜志. 2019(20)
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本文編號：3480026